甲殼類疾病及其防治技術(shù)（3）
——蝦類疾?。ㄈ?/h1>
2016-03-28 13:27:02汪建國中國科學院水生生物研究所研究員博導
漁業(yè)致富指南 2016年16期
○汪建國（中國科學院水生生物研究所研究員博導）
專題講座
甲殼類疾病及其防治技術(shù)（3）
——蝦類疾?。ㄈ?/p>
○汪建國
（中國科學院水生生物研究所研究員博導）
7.斑節(jié)對蝦桿狀病毒?。∕BVD）
一種對蝦病毒性傳染病，嚴重威脅對蝦幼體、仔蝦和幼蝦的健康。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為三類動物疫病。
【病原體】斑節(jié)對蝦桿狀病毒（Penaeus monodon-type baeulovirus，MBV）。
【流行與危害】斑節(jié)對蝦桿狀病毒病在東亞、東南亞、印度次大陸、中東、澳大利亞、印度尼西亞、東非、馬達加斯加養(yǎng)殖和野生蝦中廣泛分布，隨著斑節(jié)對蝦的引進，病毒也傳人地中海、西非、塔希提島和夏威夷，還有南、北美洲和加勒比海的一些養(yǎng)殖地區(qū)。
斑節(jié)對蝦桿狀病毒可感染對蝦屬、明對蝦屬、囊對蝦屬和溝對蝦屬的多種對蝦。除了卵和無節(jié)幼體階段都可被該病毒感染。野生蝦帶毒率較低，病毒分布地區(qū)流行和感染都比較嚴重，幼蝦和成蝦攜帶病毒高達50％～100％。是宿主蝦的幼體、仔蝦和早期幼蝦的潛在嚴重病原。
相互殘食和糞一口途徑的經(jīng)口傳播為該病的主要的傳播方式。親蝦產(chǎn)卵時排泄被病毒污染的糞便，而使病毒傳給下一代種群。
【癥狀及病理變化】受感染后的幼體除體色加深外，并無特別的癥狀，多數(shù)攜帶病毒的蝦活動正常。幼體群常無明顯癥狀出現(xiàn)而大量死亡。死亡率與養(yǎng)殖環(huán)境有關(guān)，一般在20％ ～90％。感染嚴重的病蝦往往活力降低、食欲下降、體色較深，鰓和體表有固著類纖毛蟲、絲狀細菌、附生硅藻等生物附著。
MBV侵害的對蝦組織是肝胰腺腺管和中腸的上皮細胞，顯微鏡下可觀察到受感染的對蝦肝胰腺或中腸的上皮細胞核腫大，核內(nèi)有單個或多個折射率高的球形包涵體，單個包涵體直徑約為0.1～2.0μm。受感染的對蝦糞便壓片可觀察到帶折光性的近似球形的包涵體，大小約20μm，在新鮮糞便中，病毒包涵體常成團聚集，并被核膜包裹著。組織病理觀察感染MBV的對蝦肝胰腺細胞的細胞核明顯肥大，內(nèi)有單個或多個近球形的核型多角體型包涵體，使染色質(zhì)減少并向邊緣遷移。在中腸上皮細胞中也偶爾可看到類似的現(xiàn)象，包涵體呈亮紅色。肝胰腺細胞受感染的比率越大，說明病毒感染程度越重。
【診斷方法】
（1）初步診斷根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可作出初步診斷，確診需進行實驗室診斷。診斷時應注意與對蝦桿狀病毒病相區(qū)別。
（2）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體取完整個體，仔蝦取頭胸部，幼蝦和成蝦取小塊肝胰腺或小截中腸組織。糞便樣品采集：將幼蝦或成蝦暫養(yǎng)于水族箱中，待數(shù)小時直至水族箱底部出現(xiàn)糞便，用干凈的塑料虹吸管吸取排泄物，注入玻璃試管中。
樣品采集的要求按SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（3）組織和病理學檢查
①壓片顯微鏡檢查法：通過光學顯微鏡觀察新鮮組織樣品或糞便中近球形的MBV核型多角體形成的情況進行初步判斷。適用于對蝦活體及其糞便中的MBV非致死性的疾病篩查和診斷，不適于對病毒的非感染性攜帶的標本進行診斷以及對宿主進行組織病理學評價。
②組織病理學診斷法：觀察經(jīng)HE染色后細胞核內(nèi)單個或多個近球形的核型多角體形成的情況進行判斷。適用于對蝦感染情況的確診或未知疾病樣品的組織病理學評價。不適于對病毒的非感染性攜帶的標本進行病毒檢測。
（4）病原學鑒定
①原位雜交法：采用非放射性的以地高辛標記的cDNA探針進行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學診斷法。適用于進行MBV敏感宿主組織細胞的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病的確診。
②PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應，檢測特定基因。適用于進行病原篩查和疾病的確診。其中核型多角體基因保守序列法僅適用于對蝦，包括對蝦活體、糞便以及冰凍和冰鮮蝦產(chǎn)品的病毒篩查和疾病的初步診斷。單獨使用時不適于對病毒量或感染活性的估測以及宿主感染程度的評估。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。加強親蝦及幼體的檢疫，銷毀染疫對蝦。為避免親蝦的糞便、受污染卵將病毒傳給下一代，在孵化場可采用福爾馬林、碘伏和干凈的海水徹底清洗無節(jié)幼體和卵，孵化場應相對獨立，具有良好的隔離設(shè)施，防止病毒在孵化場內(nèi)的傳播。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
8.肝胰臟細小病毒狀病毒病
【病原體】肝胰腺細小病毒狀病毒（Hepatopancreatic parvovirus，HPV）。
【流行與危害】首先發(fā)現(xiàn)在新加坡和馬來西亞養(yǎng)殖的墨吉對蝦內(nèi)，以后又發(fā)現(xiàn)在野生的和養(yǎng)殖的中國明對蝦、波斯灣的短溝對蝦、菲律賓的斑節(jié)對蝦和澳大利亞的食用對蝦。在流行病發(fā)生后4～8周內(nèi)，墨吉對蝦的累積死亡率為50％，短溝對蝦的死亡率則高達100％，并常發(fā)生弧菌病的繼發(fā)性感染。在中國明對蝦上的致病性尚不十分明顯。受感染的種群在人為的擁擠條件下會加重病情。
【癥狀及病理變化】病蝦無特有癥狀，只是食欲不振，行動不活潑，生長緩慢，體表附著物多，偶然發(fā)現(xiàn)尾部肌肉變白。幼蝦出現(xiàn)這些癥狀后很快就死亡，有時有繼發(fā)性細菌或真菌感染。
主要的病理變化是肝胰腺壞死和萎縮。肝胰管上皮細胞的細胞核過度肥大。核內(nèi)有一個大而顯著的包涵體。這種包涵體為嗜堿性，PAS陰性，弗爾根陽性，近于圓形或橢圓形，在光學顯微鏡下就可看到。在中國明對蝦仔蝦的前中腸上皮細胞肥大的核中，也發(fā)現(xiàn)有正在發(fā)育的嗜伊紅的包涵體，但較為少見，沒有發(fā)現(xiàn)充分發(fā)育的嗜堿性包涵體。正在發(fā)育的包涵體，是由電子密度很細微的顆粒物質(zhì)（即病毒基因基質(zhì)）和病毒粒子組成。
【診斷方法】初步診斷可取病蝦的肝胰腺，用FAA液或包氏液固定，HE染色，檢查出明顯的嗜伊紅，弗爾根染色陽性的核內(nèi)包涵體，核仁被擠到一邊，染色質(zhì)分布在核的周邊。確診須用透射電鏡觀察核內(nèi)包涵體中的病毒粒子。
【防治方法】
（1）嚴格檢疫，杜絕病原從親蝦或苗種帶入。
（2）使用無病毒污染或經(jīng)過過濾、消毒的海水。
（3）養(yǎng)殖蝦池應徹底清淤消毒。
（4）投放健壯苗種或經(jīng)消毒處理的蝦苗。
（5）大池改小池，淺水改深水，合理密養(yǎng)，設(shè)立增氧機。
（6）投喂優(yōu)質(zhì)配合飼料，或添加免疫多糖類和提高抗病力的中草藥。
（7）穩(wěn)定蝦池理化因子和藻相，投放環(huán)境保護劑和有益細菌或活性生物制劑。
（8）早晚巡池，發(fā)現(xiàn)異常不亂用藥或濫用藥，應取樣檢查，要在準確診斷的基礎(chǔ)上對癥或?qū)σ蛴盟?，防止細菌繼發(fā)感染等，實施全面健康的養(yǎng)殖管理。
9.日本對蝦中腸腺壞死桿狀病毒病
【病原體】中腸腺壞死桿狀病毒（Baculoviral midgut gland necrosis type viruses，BMNV）。一種C型桿狀病毒，病毒粒子大小為72納米×310納米，具雙層被膜。
【流行與危害】中腸腺壞死桿狀病毒病只侵害日本囊對蝦。在日本南部的孵化場中，每年5-9月常發(fā)生中腸腺壞死桿狀病毒病造成大批死亡。生病的仔蝦主要為P2-P12。生病時的水溫為19～29.5℃，pH為7.8～8.8。不患此病的仔蝦死亡率一般為30％以下，患此病者死亡率一般為70％～100％。在巴西和夏威夷養(yǎng)殖的日本囊對蝦也發(fā)生此病。
【癥狀及病理變化】中腸腺壞死桿狀病毒病病毒主要侵害日本囊對蝦的仔蝦。仔蝦的肝胰腺“白濁”，即混濁不透明變白色，這是最容易看到的癥狀。隨著病情的發(fā)展，白濁的程度越來越明顯。嚴重受害的仔蝦（長度為6～9mm）從癥狀上很容易區(qū)別。病蝦缺乏活力，漂浮在水面。發(fā)作突然，死亡率高。
【診斷方法】初步診斷可根據(jù)病蝦的外觀癥狀，以及日本囊對蝦的糠蝦幼體特別是仔蝦的突然發(fā)病和死亡率很高的情況。確診可用病蝦肝胰腺切片或壓片，HE染色后，在光學顯微鏡下看到肥大的細胞核而沒有包涵體，或用電子顯微鏡觀察超薄切片，看到病毒粒子。熒光抗體診斷技術(shù)，可以快速診斷，并可發(fā)現(xiàn)癥狀不明顯的帶病毒者。
【防治方法】
（1）引進日本囊對蝦時應嚴格檢疫，不從BMNV的發(fā)病地區(qū)引進對蝦。
（2）受精卵用聚維酮碘溶液進行藥浴5～10分鐘。
（3）孵化設(shè)施及用水要消毒處理。
（二）細菌性疾病
1.紅腿病
【病原體】主要有副溶血弧菌、鰻弧菌和溶藻弧菌等。
【流行與危害】紅腿病的流行范圍大，在全國乃至全球各地的對蝦養(yǎng)殖區(qū)均常有發(fā)生；感染對象廣，幾乎所有養(yǎng)殖對蝦均可感染；發(fā)病率和死亡率有時高達90％以上。該病主要發(fā)生在溫度較高的6-9月，特別在季節(jié)變換溫差波動較大的高溫期發(fā)病率最高，有時發(fā)病后數(shù)天內(nèi)，可導致整池養(yǎng)殖對蝦毀滅性死亡。
【癥狀及病理變化】該病最顯著的外觀表現(xiàn)為步足、游泳足、尾扇和觸角等變?yōu)槲⒓t或鮮紅色，其中，尤以游泳足的內(nèi)外邊緣最為明顯。有時，頭胸部的鰓絲也會變黃或者呈現(xiàn)粉紅色，嚴重者鰓絲潰爛及內(nèi)部組織發(fā)臭。顯微鏡檢查，可見病蝦血淋巴混濁稀薄，血細胞減少，凝固時間變長甚至不能凝固；在血淋巴、肝胰腺、心臟和鰓絲等器官組織內(nèi)可發(fā)現(xiàn)大量細菌。病蝦個體消瘦，行動遲緩，一般在池邊離群獨游，有時在水面呈水平或垂直打轉(zhuǎn)，嚴重者沉底不動，不久即出現(xiàn)大量死亡。
【診斷方法】該病可根據(jù)附肢特別是游泳足變紅的外觀癥狀初診。實驗室診斷，包括用顯微鏡檢查血淋巴中是否有細菌，或用TCBS固體培養(yǎng)基進行細菌分離：
（1）取具有顯著紅腿癥狀的病蝦，用無菌注射器從頭胸甲后緣插入圍心腔中吸取血液，或直接用鑷子從頭胸甲后緣與第一腹節(jié)連接處刺破，用吸管吸取血液，滴于干凈的載玻片上，蓋上蓋玻片后用顯微鏡的高倍鏡觀察有無細菌活動。
（2）若進行細菌分離培養(yǎng)，需先制備TCBS固體培養(yǎng)基，再于超凈工作臺內(nèi)用消毒酒精棉球?qū)︻^胸甲后緣周圍擦拭消毒后，用經(jīng)消毒的鑷子刺破圍心腔，再用經(jīng)消毒的接種環(huán)從圍心腔挑取血液，并于TCBS固體培養(yǎng)基上劃線，28-C培養(yǎng)24小時后觀察有無大量細菌生長。
【預防方法】
（1）放苗前盡可能清除池底淤泥等污物，并用20mg/L的漂白粉或75～112.5g/m2的生石灰消毒池底和池壁，進水后也要用1～1.5mg/L的漂白粉或0.4～0.8mg/L的漂白精等含氯消毒劑徹底消毒。
（2）選擇健康優(yōu)質(zhì)蝦苗，控制適宜的放養(yǎng)密度，配備充足的增氧設(shè)施，保證養(yǎng)殖水體特別是池底的溶解氧可達到4mg/L以上。
（3）投餌量要適宜，切忌過量；餌料要新鮮且營養(yǎng)豐富，絕不能投喂腐敗變質(zhì)的餌料。
【治療方法】
（1）使用0.4～0.8mg/L的漂白精或0.2～0.5mg/L的三氯異氰脲酸粉全池潑灑，以消滅池水和對蝦體表的病原。
（2）每千克魚體重每天拌料投喂甲砜霉素粉40～60mg，分2次投喂，連用3～5天；或每天拌料投喂氟苯尼考粉15～20mg，分2次投喂，連用3～5天。
（3）加入1％～2％大蒜等抗菌中草藥拌料制成藥餌，連續(xù)投喂3～5天。
2.爛鰓病
【病原體】弧菌、假單胞菌和產(chǎn)氣單胞菌等。
【流行與危害】爛鰓病是養(yǎng)殖對蝦在高溫季節(jié)的常見疾病之一，可發(fā)生于斑節(jié)對蝦、中國明對蝦和凡納濱對蝦等幾乎所有養(yǎng)殖對蝦，特別在每茬養(yǎng)殖的中后期，因養(yǎng)殖池水質(zhì)和底質(zhì)環(huán)境質(zhì)量下降，病原菌大量繁殖，對蝦鰓部附著物增多，使其鰓組織受損而出現(xiàn)爛鰓。
【癥狀及病理變化】爛鰓病的發(fā)展一般經(jīng)歷黃鰓、黑鰓至爛鰓的過程。在發(fā)病初期，病蝦的鰓絲局部或全部變黃（黃鰓），此時若及時處理可很快恢復，若未及時處理則鰓絲顏色進一步加深變黑（黑鰓），并最終發(fā)展為爛鰓。爛鰓期的病蝦鰓絲腫脹、變脆，鰓絲從尖端開始潰爛，潰爛壞死的鰓絲發(fā)白并出現(xiàn)皺縮或脫落，鰓的呼吸功能嚴重受損甚至喪失，對蝦因功能性缺氧而浮于水面或臥于池邊，游動緩慢，反應遲鈍，攝食下降甚至停止攝食，最后因缺氧而死。
【診斷方法】通過鰓絲腫脹、顏色變褐或變黑等外觀癥狀可初步診斷。實驗室檢查可取對蝦病變的鰓絲做水浸片鏡檢，具體方法為：在載玻片上滴一滴水，取病變的鰓絲置于載玻片的水中，蓋上蓋玻片，輕壓或輕輕敲打蓋玻片使鰓絲展平，用吸水紙吸去蓋玻片周圍溢出的水，置顯微鏡低倍鏡下觀察鰓絲潰爛情況，再用高倍鏡觀察鰓絲內(nèi)有無細菌。若要進行病原的鑒別診斷，則需制備TCBS固體平板進行病原菌分離，并按細菌鑒定要求進行種類鑒定。
【防治方法】
該病的防治方法與紅腿病相同。在對蝦養(yǎng)殖中主要通過各種措施，改良水質(zhì)和控制細菌性病原的暴發(fā)與蔓延。
3.瞎眼病
【病原體】非01群霍亂弧菌。
【流行與危害】瞎眼病又稱爛眼病。其流行范圍廣，全國各地養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦、凡納濱對蝦、中國明對蝦和長毛對蝦等均有發(fā)生。主要發(fā)生于溫度較高的6～10月，感染率30％～50％，死亡率10％～30％，嚴重時死亡率可達80％以上。越冬期親蝦的感染率有時高達90％以上，死亡率40％～50％。
【癥狀及病理變化】病蝦伏于水草或池邊，不時浮于水面做無方向性的狂游，或于水面旋轉(zhuǎn)翻滾。對蝦患病后的眼球病變過程如下：發(fā)病初期眼球腫脹，顏色逐漸由黑變褐，并進一步發(fā)展為眼球潰爛，嚴重者眼球脫落僅剩下眼柄。病蝦血淋巴液稀薄，凝固緩慢，鏡檢可見眼球潰爛組織中含有大量細菌。
【診斷方法】根據(jù)病蝦在水中狂游或旋轉(zhuǎn)翻滾，眼球顏色由黑變褐以及眼球潰爛等外觀癥狀可初步診斷；實驗室檢查需通過顯微鏡檢查病蝦眼球和血淋巴中是否有病原菌（具體診斷過程參照紅腿?。?，病原的鑒別診斷還需進行細菌分離和細菌鑒定。不過，真菌中的鐮刀菌感染對蝦眼球后也可使眼球致瞎，兩者可通過顯微鏡檢查病變部位進行區(qū)別：鐮刀菌引起的瞎眼病，可在患病眼球中發(fā)現(xiàn)菌絲；而非01群霍亂弧菌引起的瞎眼病，則無菌絲。
【防治方法】同紅腿病的防治方法。
4.甲殼潰瘍病
【病原體】體表受傷而導致細菌感染引起。從病灶上分離出多種細菌，隸屬于弧菌、假單胞菌、產(chǎn)氣單胞菌、螺菌和黃桿菌等，均為革蘭陰性菌。
【流行與危害】甲殼潰瘍病又稱褐斑病。主要在越冬親蝦中流行，其誘發(fā)原因主要是親蝦因各種原因?qū)е麦w表受傷后，分解幾丁質(zhì)的細菌或其他病菌入侵感染，從而導致越冬對蝦因甲殼潰瘍而陸續(xù)死亡，累積死亡率可高達80％以上。該病主要發(fā)生在越冬中后期的1-3月，感染對象包括中國明對蝦、凡納濱對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、龍蝦、蟹類以及淡水的羅氏沼蝦等。
【癥狀及病理變化】該病最顯著的癥狀為體表甲殼表面有黑褐色斑塊，該斑塊主要是因病蝦體表甲殼發(fā)生潰瘍而形成的黑褐色凹陷，嚴重時會侵蝕到幾丁質(zhì)以下的組織。黑褐斑一般周圍顏色較淺，呈灰白色，中部顏色較深。黑褐色斑塊隨著感染時間的延續(xù)逐漸擴大，其形狀多數(shù)為圓形，也有長方形或不規(guī)則形。黑褐斑發(fā)生的部位不固定，但以頭胸甲鰓區(qū)和腹部前三節(jié)的背面和側(cè)面較多；對蝦附肢和額角爛掉后，其斷面也呈黑褐色。潰瘍的深度未達表皮者，黑褐斑可隨對蝦蛻殼而消失；但若潰瘍已達表皮之下，蛻殼時常在潰瘍處發(fā)生新殼與舊殼黏連，并因此造成蛻殼困難，嚴重者因細菌侵入甲殼下的內(nèi)部組織而造成對蝦死亡。
【診斷方法】該病可通過病蝦體表甲殼和附肢上的黑褐色斑點狀潰瘍等外觀癥狀進行初步診斷，但根據(jù)外觀癥狀診斷該病時，要注意與維生素C缺乏癥的區(qū)別：甲殼潰瘍病在黑褐斑處有潰爛，而維生素C缺乏癥雖然也有黑褐斑，但斑塊位于甲殼之下，其甲殼表面光滑，無潰爛。該病的鑒別診斷需要從甲殼潰瘍處進行病原分離，并對所分離的病原菌進行種類鑒定，病原分離的方法與紅腿病病原分離相同。
【預防方法】甲殼潰瘍病主要是由于操作不慎而導致細菌感染引起，因此，該病的主要預防措施為采取各種措施，防止對蝦受傷：
（1）親蝦捕撈前按0.5mg/L的用量在水體中潑灑維生素C，避免捕撈時親蝦出現(xiàn)應激；捕撈時盡可能采用大拉網(wǎng)、錨網(wǎng)和掛子網(wǎng)等網(wǎng)具，以減輕蝦體損傷，在取蝦時也要盡量避免碰傷對蝦體表。
（2）親蝦運輸工具要寬敞，密度不宜過大，運輸和裝卸操作盡可能避免碰撞。
（3）在餌料中補充維生素C，用量為每千克餌料添加0.5～1.0g，避免因維生素缺乏而跳躍受傷。
治療方法：越冬期親蝦患病后的治療措施包括：用0.2mg/L的三氯異氰脲酸粉等含氯消毒劑全池潑灑進行水體消毒。同時，每千克魚體重每天拌料投喂甲砜霉素粉40～60mg或氟苯尼考粉15～20mg，分2次投喂，連用3～5天；或拌料投喂大蒜50～100mg，連續(xù)投喂3～5天。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國科學院水生生物研究所武漢市武昌東湖南路7號）
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MBV侵害的對蝦組織是肝胰腺腺管和中腸的上皮細胞，顯微鏡下可觀察到受感染的對蝦肝胰腺或中腸的上皮細胞核腫大，核內(nèi)有單個或多個折射率高的球形包涵體，單個包涵體直徑約為0.1～2.0μm。受感染的對蝦糞便壓片可觀察到帶折光性的近似球形的包涵體，大小約20μm，在新鮮糞便中，病毒包涵體常成團聚集，并被核膜包裹著。組織病理觀察感染MBV的對蝦肝胰腺細胞的細胞核明顯肥大，內(nèi)有單個或多個近球形的核型多角體型包涵體，使染色質(zhì)減少并向邊緣遷移。在中腸上皮細胞中也偶爾可看到類似的現(xiàn)象，包涵體呈亮紅色。肝胰腺細胞受感染的比率越大，說明病毒感染程度越重。
【診斷方法】
（1）初步診斷根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可作出初步診斷，確診需進行實驗室診斷。診斷時應注意與對蝦桿狀病毒病相區(qū)別。
（2）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體取完整個體，仔蝦取頭胸部，幼蝦和成蝦取小塊肝胰腺或小截中腸組織。糞便樣品采集：將幼蝦或成蝦暫養(yǎng)于水族箱中，待數(shù)小時直至水族箱底部出現(xiàn)糞便，用干凈的塑料虹吸管吸取排泄物，注入玻璃試管中。
樣品采集的要求按SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（3）組織和病理學檢查
①壓片顯微鏡檢查法：通過光學顯微鏡觀察新鮮組織樣品或糞便中近球形的MBV核型多角體形成的情況進行初步判斷。適用于對蝦活體及其糞便中的MBV非致死性的疾病篩查和診斷，不適于對病毒的非感染性攜帶的標本進行診斷以及對宿主進行組織病理學評價。
②組織病理學診斷法：觀察經(jīng)HE染色后細胞核內(nèi)單個或多個近球形的核型多角體形成的情況進行判斷。適用于對蝦感染情況的確診或未知疾病樣品的組織病理學評價。不適于對病毒的非感染性攜帶的標本進行病毒檢測。
（4）病原學鑒定
①原位雜交法：采用非放射性的以地高辛標記的cDNA探針進行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學診斷法。適用于進行MBV敏感宿主組織細胞的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病的確診。
②PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應，檢測特定基因。適用于進行病原篩查和疾病的確診。其中核型多角體基因保守序列法僅適用于對蝦，包括對蝦活體、糞便以及冰凍和冰鮮蝦產(chǎn)品的病毒篩查和疾病的初步診斷。單獨使用時不適于對病毒量或感染活性的估測以及宿主感染程度的評估。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。加強親蝦及幼體的檢疫，銷毀染疫對蝦。為避免親蝦的糞便、受污染卵將病毒傳給下一代，在孵化場可采用福爾馬林、碘伏和干凈的海水徹底清洗無節(jié)幼體和卵，孵化場應相對獨立，具有良好的隔離設(shè)施，防止病毒在孵化場內(nèi)的傳播。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
8.肝胰臟細小病毒狀病毒病
【病原體】肝胰腺細小病毒狀病毒（Hepatopancreatic parvovirus，HPV）。
【流行與危害】首先發(fā)現(xiàn)在新加坡和馬來西亞養(yǎng)殖的墨吉對蝦內(nèi)，以后又發(fā)現(xiàn)在野生的和養(yǎng)殖的中國明對蝦、波斯灣的短溝對蝦、菲律賓的斑節(jié)對蝦和澳大利亞的食用對蝦。在流行病發(fā)生后4～8周內(nèi)，墨吉對蝦的累積死亡率為50％，短溝對蝦的死亡率則高達100％，并常發(fā)生弧菌病的繼發(fā)性感染。在中國明對蝦上的致病性尚不十分明顯。受感染的種群在人為的擁擠條件下會加重病情。
【癥狀及病理變化】病蝦無特有癥狀，只是食欲不振，行動不活潑，生長緩慢，體表附著物多，偶然發(fā)現(xiàn)尾部肌肉變白。幼蝦出現(xiàn)這些癥狀后很快就死亡，有時有繼發(fā)性細菌或真菌感染。
主要的病理變化是肝胰腺壞死和萎縮。肝胰管上皮細胞的細胞核過度肥大。核內(nèi)有一個大而顯著的包涵體。這種包涵體為嗜堿性，PAS陰性，弗爾根陽性，近于圓形或橢圓形，在光學顯微鏡下就可看到。在中國明對蝦仔蝦的前中腸上皮細胞肥大的核中，也發(fā)現(xiàn)有正在發(fā)育的嗜伊紅的包涵體，但較為少見，沒有發(fā)現(xiàn)充分發(fā)育的嗜堿性包涵體。正在發(fā)育的包涵體，是由電子密度很細微的顆粒物質(zhì)（即病毒基因基質(zhì)）和病毒粒子組成。
【診斷方法】初步診斷可取病蝦的肝胰腺，用FAA液或包氏液固定，HE染色，檢查出明顯的嗜伊紅，弗爾根染色陽性的核內(nèi)包涵體，核仁被擠到一邊，染色質(zhì)分布在核的周邊。確診須用透射電鏡觀察核內(nèi)包涵體中的病毒粒子。
【防治方法】
（1）嚴格檢疫，杜絕病原從親蝦或苗種帶入。
（2）使用無病毒污染或經(jīng)過過濾、消毒的海水。
（3）養(yǎng)殖蝦池應徹底清淤消毒。
（4）投放健壯苗種或經(jīng)消毒處理的蝦苗。
（5）大池改小池，淺水改深水，合理密養(yǎng)，設(shè)立增氧機。
（6）投喂優(yōu)質(zhì)配合飼料，或添加免疫多糖類和提高抗病力的中草藥。
（7）穩(wěn)定蝦池理化因子和藻相，投放環(huán)境保護劑和有益細菌或活性生物制劑。
（8）早晚巡池，發(fā)現(xiàn)異常不亂用藥或濫用藥，應取樣檢查，要在準確診斷的基礎(chǔ)上對癥或?qū)σ蛴盟?，防止細菌繼發(fā)感染等，實施全面健康的養(yǎng)殖管理。
9.日本對蝦中腸腺壞死桿狀病毒病
【病原體】中腸腺壞死桿狀病毒（Baculoviral midgut gland necrosis type viruses，BMNV）。一種C型桿狀病毒，病毒粒子大小為72納米×310納米，具雙層被膜。
【流行與危害】中腸腺壞死桿狀病毒病只侵害日本囊對蝦。在日本南部的孵化場中，每年5-9月常發(fā)生中腸腺壞死桿狀病毒病造成大批死亡。生病的仔蝦主要為P2-P12。生病時的水溫為19～29.5℃，pH為7.8～8.8。不患此病的仔蝦死亡率一般為30％以下，患此病者死亡率一般為70％～100％。在巴西和夏威夷養(yǎng)殖的日本囊對蝦也發(fā)生此病。
【癥狀及病理變化】中腸腺壞死桿狀病毒病病毒主要侵害日本囊對蝦的仔蝦。仔蝦的肝胰腺“白濁”，即混濁不透明變白色，這是最容易看到的癥狀。隨著病情的發(fā)展，白濁的程度越來越明顯。嚴重受害的仔蝦（長度為6～9mm）從癥狀上很容易區(qū)別。病蝦缺乏活力，漂浮在水面。發(fā)作突然，死亡率高。
【診斷方法】初步診斷可根據(jù)病蝦的外觀癥狀，以及日本囊對蝦的糠蝦幼體特別是仔蝦的突然發(fā)病和死亡率很高的情況。確診可用病蝦肝胰腺切片或壓片，HE染色后，在光學顯微鏡下看到肥大的細胞核而沒有包涵體，或用電子顯微鏡觀察超薄切片，看到病毒粒子。熒光抗體診斷技術(shù)，可以快速診斷，并可發(fā)現(xiàn)癥狀不明顯的帶病毒者。
【防治方法】
（1）引進日本囊對蝦時應嚴格檢疫，不從BMNV的發(fā)病地區(qū)引進對蝦。
（2）受精卵用聚維酮碘溶液進行藥浴5～10分鐘。
（3）孵化設(shè)施及用水要消毒處理。
（二）細菌性疾病
1.紅腿病
【病原體】主要有副溶血弧菌、鰻弧菌和溶藻弧菌等。
【流行與危害】紅腿病的流行范圍大，在全國乃至全球各地的對蝦養(yǎng)殖區(qū)均常有發(fā)生；感染對象廣，幾乎所有養(yǎng)殖對蝦均可感染；發(fā)病率和死亡率有時高達90％以上。該病主要發(fā)生在溫度較高的6-9月，特別在季節(jié)變換溫差波動較大的高溫期發(fā)病率最高，有時發(fā)病后數(shù)天內(nèi)，可導致整池養(yǎng)殖對蝦毀滅性死亡。
【癥狀及病理變化】該病最顯著的外觀表現(xiàn)為步足、游泳足、尾扇和觸角等變?yōu)槲⒓t或鮮紅色，其中，尤以游泳足的內(nèi)外邊緣最為明顯。有時，頭胸部的鰓絲也會變黃或者呈現(xiàn)粉紅色，嚴重者鰓絲潰爛及內(nèi)部組織發(fā)臭。顯微鏡檢查，可見病蝦血淋巴混濁稀薄，血細胞減少，凝固時間變長甚至不能凝固；在血淋巴、肝胰腺、心臟和鰓絲等器官組織內(nèi)可發(fā)現(xiàn)大量細菌。病蝦個體消瘦，行動遲緩，一般在池邊離群獨游，有時在水面呈水平或垂直打轉(zhuǎn)，嚴重者沉底不動，不久即出現(xiàn)大量死亡。
【診斷方法】該病可根據(jù)附肢特別是游泳足變紅的外觀癥狀初診。實驗室診斷，包括用顯微鏡檢查血淋巴中是否有細菌，或用TCBS固體培養(yǎng)基進行細菌分離：
（1）取具有顯著紅腿癥狀的病蝦，用無菌注射器從頭胸甲后緣插入圍心腔中吸取血液，或直接用鑷子從頭胸甲后緣與第一腹節(jié)連接處刺破，用吸管吸取血液，滴于干凈的載玻片上，蓋上蓋玻片后用顯微鏡的高倍鏡觀察有無細菌活動。
（2）若進行細菌分離培養(yǎng)，需先制備TCBS固體培養(yǎng)基，再于超凈工作臺內(nèi)用消毒酒精棉球?qū)︻^胸甲后緣周圍擦拭消毒后，用經(jīng)消毒的鑷子刺破圍心腔，再用經(jīng)消毒的接種環(huán)從圍心腔挑取血液，并于TCBS固體培養(yǎng)基上劃線，28-C培養(yǎng)24小時后觀察有無大量細菌生長。
【預防方法】
（1）放苗前盡可能清除池底淤泥等污物，并用20mg/L的漂白粉或75～112.5g/m2的生石灰消毒池底和池壁，進水后也要用1～1.5mg/L的漂白粉或0.4～0.8mg/L的漂白精等含氯消毒劑徹底消毒。
（2）選擇健康優(yōu)質(zhì)蝦苗，控制適宜的放養(yǎng)密度，配備充足的增氧設(shè)施，保證養(yǎng)殖水體特別是池底的溶解氧可達到4mg/L以上。
（3）投餌量要適宜，切忌過量；餌料要新鮮且營養(yǎng)豐富，絕不能投喂腐敗變質(zhì)的餌料。
【治療方法】
（1）使用0.4～0.8mg/L的漂白精或0.2～0.5mg/L的三氯異氰脲酸粉全池潑灑，以消滅池水和對蝦體表的病原。
（2）每千克魚體重每天拌料投喂甲砜霉素粉40～60mg，分2次投喂，連用3～5天；或每天拌料投喂氟苯尼考粉15～20mg，分2次投喂，連用3～5天。
（3）加入1％～2％大蒜等抗菌中草藥拌料制成藥餌，連續(xù)投喂3～5天。
2.爛鰓病
【病原體】弧菌、假單胞菌和產(chǎn)氣單胞菌等。
【流行與危害】爛鰓病是養(yǎng)殖對蝦在高溫季節(jié)的常見疾病之一，可發(fā)生于斑節(jié)對蝦、中國明對蝦和凡納濱對蝦等幾乎所有養(yǎng)殖對蝦，特別在每茬養(yǎng)殖的中后期，因養(yǎng)殖池水質(zhì)和底質(zhì)環(huán)境質(zhì)量下降，病原菌大量繁殖，對蝦鰓部附著物增多，使其鰓組織受損而出現(xiàn)爛鰓。
【癥狀及病理變化】爛鰓病的發(fā)展一般經(jīng)歷黃鰓、黑鰓至爛鰓的過程。在發(fā)病初期，病蝦的鰓絲局部或全部變黃（黃鰓），此時若及時處理可很快恢復，若未及時處理則鰓絲顏色進一步加深變黑（黑鰓），并最終發(fā)展為爛鰓。爛鰓期的病蝦鰓絲腫脹、變脆，鰓絲從尖端開始潰爛，潰爛壞死的鰓絲發(fā)白并出現(xiàn)皺縮或脫落，鰓的呼吸功能嚴重受損甚至喪失，對蝦因功能性缺氧而浮于水面或臥于池邊，游動緩慢，反應遲鈍，攝食下降甚至停止攝食，最后因缺氧而死。
【診斷方法】通過鰓絲腫脹、顏色變褐或變黑等外觀癥狀可初步診斷。實驗室檢查可取對蝦病變的鰓絲做水浸片鏡檢，具體方法為：在載玻片上滴一滴水，取病變的鰓絲置于載玻片的水中，蓋上蓋玻片，輕壓或輕輕敲打蓋玻片使鰓絲展平，用吸水紙吸去蓋玻片周圍溢出的水，置顯微鏡低倍鏡下觀察鰓絲潰爛情況，再用高倍鏡觀察鰓絲內(nèi)有無細菌。若要進行病原的鑒別診斷，則需制備TCBS固體平板進行病原菌分離，并按細菌鑒定要求進行種類鑒定。
【防治方法】
該病的防治方法與紅腿病相同。在對蝦養(yǎng)殖中主要通過各種措施，改良水質(zhì)和控制細菌性病原的暴發(fā)與蔓延。
3.瞎眼病
【病原體】非01群霍亂弧菌。
【流行與危害】瞎眼病又稱爛眼病。其流行范圍廣，全國各地養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦、凡納濱對蝦、中國明對蝦和長毛對蝦等均有發(fā)生。主要發(fā)生于溫度較高的6～10月，感染率30％～50％，死亡率10％～30％，嚴重時死亡率可達80％以上。越冬期親蝦的感染率有時高達90％以上，死亡率40％～50％。
【癥狀及病理變化】病蝦伏于水草或池邊，不時浮于水面做無方向性的狂游，或于水面旋轉(zhuǎn)翻滾。對蝦患病后的眼球病變過程如下：發(fā)病初期眼球腫脹，顏色逐漸由黑變褐，并進一步發(fā)展為眼球潰爛，嚴重者眼球脫落僅剩下眼柄。病蝦血淋巴液稀薄，凝固緩慢，鏡檢可見眼球潰爛組織中含有大量細菌。
【診斷方法】根據(jù)病蝦在水中狂游或旋轉(zhuǎn)翻滾，眼球顏色由黑變褐以及眼球潰爛等外觀癥狀可初步診斷；實驗室檢查需通過顯微鏡檢查病蝦眼球和血淋巴中是否有病原菌（具體診斷過程參照紅腿?。?，病原的鑒別診斷還需進行細菌分離和細菌鑒定。不過，真菌中的鐮刀菌感染對蝦眼球后也可使眼球致瞎，兩者可通過顯微鏡檢查病變部位進行區(qū)別：鐮刀菌引起的瞎眼病，可在患病眼球中發(fā)現(xiàn)菌絲；而非01群霍亂弧菌引起的瞎眼病，則無菌絲。
【防治方法】同紅腿病的防治方法。
4.甲殼潰瘍病
【病原體】體表受傷而導致細菌感染引起。從病灶上分離出多種細菌，隸屬于弧菌、假單胞菌、產(chǎn)氣單胞菌、螺菌和黃桿菌等，均為革蘭陰性菌。
【流行與危害】甲殼潰瘍病又稱褐斑病。主要在越冬親蝦中流行，其誘發(fā)原因主要是親蝦因各種原因?qū)е麦w表受傷后，分解幾丁質(zhì)的細菌或其他病菌入侵感染，從而導致越冬對蝦因甲殼潰瘍而陸續(xù)死亡，累積死亡率可高達80％以上。該病主要發(fā)生在越冬中后期的1-3月，感染對象包括中國明對蝦、凡納濱對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、龍蝦、蟹類以及淡水的羅氏沼蝦等。
【癥狀及病理變化】該病最顯著的癥狀為體表甲殼表面有黑褐色斑塊，該斑塊主要是因病蝦體表甲殼發(fā)生潰瘍而形成的黑褐色凹陷，嚴重時會侵蝕到幾丁質(zhì)以下的組織。黑褐斑一般周圍顏色較淺，呈灰白色，中部顏色較深。黑褐色斑塊隨著感染時間的延續(xù)逐漸擴大，其形狀多數(shù)為圓形，也有長方形或不規(guī)則形。黑褐斑發(fā)生的部位不固定，但以頭胸甲鰓區(qū)和腹部前三節(jié)的背面和側(cè)面較多；對蝦附肢和額角爛掉后，其斷面也呈黑褐色。潰瘍的深度未達表皮者，黑褐斑可隨對蝦蛻殼而消失；但若潰瘍已達表皮之下，蛻殼時常在潰瘍處發(fā)生新殼與舊殼黏連，并因此造成蛻殼困難，嚴重者因細菌侵入甲殼下的內(nèi)部組織而造成對蝦死亡。
【診斷方法】該病可通過病蝦體表甲殼和附肢上的黑褐色斑點狀潰瘍等外觀癥狀進行初步診斷，但根據(jù)外觀癥狀診斷該病時，要注意與維生素C缺乏癥的區(qū)別：甲殼潰瘍病在黑褐斑處有潰爛，而維生素C缺乏癥雖然也有黑褐斑，但斑塊位于甲殼之下，其甲殼表面光滑，無潰爛。該病的鑒別診斷需要從甲殼潰瘍處進行病原分離，并對所分離的病原菌進行種類鑒定，病原分離的方法與紅腿病病原分離相同。
【預防方法】甲殼潰瘍病主要是由于操作不慎而導致細菌感染引起，因此，該病的主要預防措施為采取各種措施，防止對蝦受傷：
（1）親蝦捕撈前按0.5mg/L的用量在水體中潑灑維生素C，避免捕撈時親蝦出現(xiàn)應激；捕撈時盡可能采用大拉網(wǎng)、錨網(wǎng)和掛子網(wǎng)等網(wǎng)具，以減輕蝦體損傷，在取蝦時也要盡量避免碰傷對蝦體表。
（2）親蝦運輸工具要寬敞，密度不宜過大，運輸和裝卸操作盡可能避免碰撞。
（3）在餌料中補充維生素C，用量為每千克餌料添加0.5～1.0g，避免因維生素缺乏而跳躍受傷。
治療方法：越冬期親蝦患病后的治療措施包括：用0.2mg/L的三氯異氰脲酸粉等含氯消毒劑全池潑灑進行水體消毒。同時，每千克魚體重每天拌料投喂甲砜霉素粉40～60mg或氟苯尼考粉15～20mg，分2次投喂，連用3～5天；或拌料投喂大蒜50～100mg，連續(xù)投喂3～5天。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國科學院水生生物研究所武漢市武昌東湖南路7號）
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