高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方黨參片中丹酚酸B含量

劉茹麗

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010）

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方黨參片中丹酚酸B含量

劉茹麗

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010）

目的 建立測(cè)定復(fù)方黨參片中丹酚酸B含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），以甲醇－0．1%磷酸（33∶67）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm。結(jié)果 丹酚酸B進(jìn)樣量在0．209 6～4．192 0 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率為98．10%，RSD為0．89%（n＝6）。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于制劑的質(zhì)量控制。

丹酚酸B；復(fù)方黨參片；高效液相色譜法

復(fù)方黨參片由黨參、丹參、金果欖等中藥制成，具有活血化瘀、益氣寧心的功效，用于心肌缺血引起的心絞痛及胸悶等。該品種原收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十三冊(cè))》，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有2個(gè)理化鑒別項(xiàng)目；后收載于《國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒布（試行）標(biāo)準(zhǔn)》[WS－11271（ZD－1271）－2002]。蔣珍藕等[1]采用薄層色譜（TLC）法對(duì)其中的黨參、丹參、金果欖進(jìn)行了定性鑒別，并采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定丹參中丹參酮Ⅱ的含量。程顯隆等[2]建立了復(fù)方黨參片中黨參和當(dāng)歸的TLC鑒別，以及丹參素含量測(cè)定的HPLC法?？紤]到該制劑采用水煎煮提取工藝，結(jié)合2010年版《中國(guó)藥典(一部)》[3]丹參項(xiàng)下含量檢測(cè)指標(biāo)，即丹參藥用的是以丹酚酸B為主的水溶性成分，參考有關(guān)文獻(xiàn)，研究并建立了復(fù)方黨參片中丹酚酸B含量測(cè)定的HPLC法，為完善、提升該制劑質(zhì)量控制水平提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu 2010型高效液相色譜儀，LC solution色譜工作站；Mettler AE240型電子天平（梅特勒公司）；KQ－400DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)為111562－201102，供含量測(cè)定用）；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純；復(fù)方黨參片（市售品，批號(hào)分別為150301，150302，150303）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：迪馬 C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇－0．1%磷酸（33∶67）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2．2 溶液制備

取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1 mL含丹酚酸B 0．1 mg的溶液，即得丹酚酸B對(duì)照品溶液。取重量差異項(xiàng)下的本品20片，除去糖衣層，研細(xì)，取0．4 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加80%甲醇20 mL超聲（200 W，40 kHz）處理30 min，取出，待冷卻至室溫后，用80%甲醇定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例及制備工藝制備缺丹參的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明，處方中其他成分對(duì)丹酚酸B的測(cè)定無干擾，見圖1。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：稱取丹酚酸B對(duì)照品10．48 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并用80%甲醇定容至刻度，搖勻。分別精密吸取對(duì)照品溶液0．2，0．5，1．0，2．0，4．0 mL置10 mL容量瓶中，加80%甲醇定容至刻度，分別進(jìn)樣10 μL測(cè)定，以丹酚酸B峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得丹酚酸B回歸方程 Y＝241 165 X－9 942，r＝0．999 9(n＝5)。結(jié)果表明，丹酚酸B進(jìn)樣量在0．209 6～4．192 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果丹酚酸B峰面積的 RSD為1．27%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

圖1 丹酚酸B高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，1，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果丹酚酸B峰面積的 RSD為1．10%(n＝6)，表明供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20150301）樣品6份，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算丹酚酸B的含量。結(jié)果樣品中丹酚酸B平均含量為每片2．85 mg，RSD為1．26%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為20150301，淫羊藿苷含量為每片2．85 mg）6份，分別加入丹酚酸B對(duì)照品，照2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定丹酚酸B峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件及測(cè)定方法測(cè)定樣品含量。結(jié)果批號(hào)為150301，150302，150303的樣品中丹酚酸B每片含量分別為2．85，2．97，2．70 mg。

3 討論

3．1 流動(dòng)相選擇

在試驗(yàn)過程中，曾選擇甲醇－水、乙腈－水作為流動(dòng)相，但色譜峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，分離效果不理想。參照文獻(xiàn)[4－8]，在流動(dòng)相中加入適量磷酸，可改善目標(biāo)色譜峰形，提高分離效果。最后選定甲醇－0．1%磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，效果較好。

3．2 提取方法及時(shí)間選擇

由于丹酚酸B具熱不穩(wěn)定性[9]，故對(duì)提取方法進(jìn)行考察。取同一批樣品，比較了索氏提取、回流提取和超聲處理等提取方式，結(jié)果顯示，采用超聲處理方法，試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，提取效率較高，對(duì)丹酚酸B提取較完全，故選取超聲提取作為樣品的提取方法。還分別考察了超聲處理15，30，45，60 min對(duì)樣品中丹酚酸B含量測(cè)定值的影響，結(jié)果表明，超聲處理30 min結(jié)果較理想。故采用80%甲醇超聲處理30 min進(jìn)行提取。

3．3 方法的優(yōu)勢(shì)

采用HPLC法測(cè)定制劑中丹酚酸B的含量，方法快速、準(zhǔn)確、峰形對(duì)稱，可用于復(fù)方黨參片的質(zhì)量控制。

[1]蔣珍藕，陳榮光，孫寧梧．復(fù)方黨參片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中藥新藥與臨床藥理，2004，15（3）：184－186．

[2]程顯隆，馬雙成，肖新月．復(fù)方黨參片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．藥物分析雜志，2007，27（1）：56－59．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70．

[4]趙 華，李新莉．HPLC法測(cè)定婦女痛經(jīng)丸中丹酚酸B的含量[J]．內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，31（22）：40．

[5]黃詩遠(yuǎn)，陳 鳳，姚紅霞．RP－HPLC法測(cè)定濕毒清膠囊中丹酚酸 B和黃芩苷的含量[J]．中國(guó)藥師，2008，11（6）：663－664．

[6]劉亞英，梁 敏，杜艷玲．HPLC法同時(shí)測(cè)定注射用冠心寧中原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量[J]．中國(guó)藥師，2011，14（10）：1 469－1 470．

[7]張 樂，張 強(qiáng)，劉 娟．參七消痞顆粒中野黃芩苷和丹酚酸B含量測(cè)定方法研究[J]．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（8）：550－553．

[8]黃勝春，葛朝霞．高效液相色譜法測(cè)定康糖膠囊中丹酚酸B含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2010，19（11）：19－20．

[9]陸小華．不同炮制方法對(duì)丹參藥材中丹酚酸B的影響[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（2）：103－105．

Content Determination of Salvianolic Acid B in Fufang Dangshen Tablets by HPLC

Liu Ruli
（Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，China 400010）

Objective To determine the contents of salvianolic acid B in Fufang Dangshen tablets．M ethods HPLC method was adopted and Diamonsil C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）was used．The mobile phase was methanol－0．1% phosphoric acid solution（33∶67）．The detection wavelength was at 286 nm．Results The calibration curve of salvianolic acid B was linear in the range of 0．209 6－4．192 0 μg，the averge of recovery was 98．10%，RSD＝0．89%(n＝6)．Conclusion The methods is simple and accurate，it can be used for quality control of Fufang Dangshen Tablets．

salvianolic acid B；Fufang Dangshen tablets；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0067－02

2015－07－28)