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瀕危植物顯脈金花茶的扦插繁殖試驗(yàn)*
0引言
【研究意義】金花茶組(Theaceae,Camellia,Sect.Chrysantha Chang)植物是世界珍稀的觀賞植物和種質(zhì)資源,具有極高的觀賞價(jià)值、科研價(jià)值和藥用價(jià)值[1-3]。金花茶組植物對(duì)生境要求較高,分布范圍極為狹窄。近年來,由于“金花茶”熱的持續(xù),大部分野生資源都受到極為嚴(yán)重地破壞,野外的部分種類幾近滅絕。目前,金花茶組植物的所有種類均已列入《廣西壯族自治區(qū)第一批重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》[4],金花茶(Camellia petelotii)、顯脈金花茶(C.euphlebia)、東興金花茶(C.tunghinensis)、毛瓣金花茶(C.pubipetala)、平果金花茶(C.pingguoensis)等5種列入了《中國(guó)珍稀瀕危保護(hù)植物名錄》,其中顯脈金花茶列為二級(jí)保護(hù)植物[5]。顯脈金花茶天然分布于廣西防城港及越南諒山的部分區(qū)域,在廣西主要集中在防城港那良鎮(zhèn)(107°50′E)以東、那梭鎮(zhèn)(108°07′E)以西約710 hm2范圍內(nèi),分布范圍十分狹窄[6]。目前,金花茶和顯脈金花茶是用于保健食品開發(fā)利用的兩種主要金花茶種類,各銷售企業(yè)和部分農(nóng)戶已建立了規(guī)范化的金花茶種植基地。隨著金花茶產(chǎn)品需求的日益增加,急需進(jìn)一步擴(kuò)大金花茶和顯脈金花茶的種植規(guī)模,而種苗是制約其生產(chǎn)規(guī)模進(jìn)一步擴(kuò)大的關(guān)鍵因素。因此,開展顯脈金花茶扦插繁殖技術(shù)研究意義重大?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前,關(guān)于顯脈金花茶的研究主要集中在生態(tài)學(xué)[7]、光合特性[8]、遺傳多樣性[9]、化學(xué)成分[10-11]等方面,有關(guān)其繁殖特性方面的研究較少[12-13],還未見有關(guān)其扦插繁殖方面的報(bào)道。【本研究切入點(diǎn)】研究顯脈金花茶扦插繁殖的最佳試驗(yàn)條件,為該物種的保護(hù)及其規(guī)模化種植提供技術(shù)支持。【擬解決的關(guān)鍵問題】采用四因素三水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),以生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)為扦插生根效果的評(píng)價(jià)指標(biāo),并構(gòu)建生根效果指數(shù),研究激素種類、激素濃度、插條浸泡時(shí)間和扦插基質(zhì)4個(gè)因素對(duì)顯脈金花茶扦插生根的影響。
1材料和方法
1.1試驗(yàn)時(shí)間及苗床的準(zhǔn)備
試驗(yàn)于2013年6月至2014年4月在廣西植物研究所溫室大棚內(nèi)進(jìn)行。苗床長(zhǎng)20 m,寬1 m,高30 cm,用紅磚砌成。苗床底部平鋪5~8 cm的河卵石,上再鋪5 cm的河沙,在河沙上鋪基質(zhì)20 cm。在苗木扦插前,用500倍的高錳酸鉀溶液對(duì)插床進(jìn)行消毒。
1.2插穗處理
插穗采自廣西植物研究所金花茶種質(zhì)資源圃內(nèi)成年的顯脈金花茶植株,選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的1~2年生枝條,采后立即帶回溫室內(nèi)進(jìn)行剪枝扦插。將枝條剪成長(zhǎng)12 cm左右的插穗,每穗留2~3個(gè)芽,保留上端兩片葉子,并剪去葉子的1/2。插穗上切口離腋芽1 cm處平剪,下切口斜剪。用50%(V/V)的多菌靈粉劑配成800倍液后噴施消毒。
1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)
以激素種類、激素濃度、插條浸泡時(shí)間和扦插基質(zhì)作為扦插試驗(yàn)的影響因素,每因素取3個(gè)水平,按L9(34)表安排四因素三水平的正交試驗(yàn)(表1),試驗(yàn)共設(shè)9個(gè)處理,每個(gè)處理試驗(yàn)90個(gè)插穗,研究各試驗(yàn)因素對(duì)顯脈金花茶扦插生根的影響程度,以找出顯脈金花茶扦插生根的最優(yōu)條件。
表1L9(34)正交試驗(yàn)
Table 1The design of L9(34)orthogonal experiment
水平Levels因素FactorsA激素種類TypeofhormonesB激素濃度Concentrationofhormones(mg·L-1)C浸泡時(shí)間Treatingtime(h)D扦插基質(zhì)Substance1萘乙酸1Naphthalene-aceticacid(NAA)1003河沙Riversand2吲哚丁酸3Indolebutyricacid(IBA)3006V(泥炭土)∶V(珍珠巖)=1∶13ABT50012黃土Loess
1.4扦插方法及扦插后管理
采用直插法,株行距為10 cm×10 cm,扦插深度約為插穗長(zhǎng)度的1/2。扦插時(shí),先用小木棍在基質(zhì)中打孔,然后將插穗放入孔中,用手壓實(shí),扦插完成后,澆透水,使插穗基部與基質(zhì)充分接觸。扦插初期,每天噴霧2~3次,棚內(nèi)溫度保持在25~30℃,相對(duì)濕度控制在90%以上,并加蓋1層遮陰網(wǎng)遮陰,使苗床透光率為20%左右。扦插后,每隔15 d噴施多菌靈進(jìn)行殺菌,并噴施0.2%(W/V)的尿素和磷酸二氫鉀混合液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。插穗生根后,減少噴霧次數(shù)以及噴水時(shí)間,以利于生根。管理期間及時(shí)取出腐爛插穗。
1.5結(jié)果調(diào)查及統(tǒng)計(jì)分析
扦插10個(gè)月后對(duì)所有處理的生根率(x1)、生根數(shù)(x2)和平均根長(zhǎng)(x3)進(jìn)行測(cè)定。生根率(%)=(生根插條數(shù)/插條總數(shù))×100%;每處理取10個(gè)存活插條,對(duì)平均生根數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);每處理取10個(gè)插條,每插條隨機(jī)測(cè)定10個(gè)根長(zhǎng),計(jì)算平均根長(zhǎng)。采用極差分析、方差分析和多重比較(LSD法),分析各試驗(yàn)因素對(duì)生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)的影響。由于單個(gè)指標(biāo)并不能反映總的生根效果,本文構(gòu)建生根效果指數(shù)對(duì)總的生根效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。以生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)等3個(gè)變量為指標(biāo),運(yùn)用功效系數(shù)法[14]構(gòu)建生根效果指數(shù)(y),分析各試驗(yàn)因素對(duì)生根效果指數(shù)的影響,找出顯脈金花茶扦插生根的最優(yōu)組合。為確保各指標(biāo)方差的一致性,在統(tǒng)計(jì)分析前對(duì)生根率進(jìn)行反正弦轉(zhuǎn)換[15],對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)進(jìn)行(x+1)1/2轉(zhuǎn)換[16]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用正交設(shè)計(jì)助手和SAS8.1軟件。
生根效果指數(shù)(y)的具體計(jì)算方法見式(1)和式(2):
(1)
(2)
式中Mj、mj分別為指標(biāo)xj的最大值和最小值。
2結(jié)果與分析
2.1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如表2所示,處理7的生根率、生根效果指數(shù)最高,處理2的次之;處理2的生根數(shù)最多,處理7的次之;處理7的平均根長(zhǎng)最長(zhǎng),處理6的次之,處理2的排列第3位。
表2正交試驗(yàn)結(jié)果
Table 2The results of orthogonal experiment
處理號(hào)TreatmentA激素種類TypeofhormonesB濃度Concentrationofhormones(mg·L-1)C浸泡時(shí)間Treatingtime(h)D扦插基質(zhì)Substance生根率Rootingrate(%)生根數(shù)Rootnumber(Strips)平均根長(zhǎng)Rootlength(cm)生根效果指數(shù)Rootingindex1NAA1003河沙Riversand33.370.52.7375.982NAA3006泥炭土+珍珠巖Peatsoilandperlite50.0121.34.2396.363NAA50012黃土Loess40.065.22.7476.774IBA1006黃土Loess6.755.12.0362.115IBA30012河沙Riversand33.383.73.3181.486IBA5003泥炭土+珍珠巖Peatsoilandperlite43.3100.24.3291.757ABT10012泥炭土+珍珠巖Peatsoilandperlite56.7106.34.6097.808ABT3003黃土Loess26.745.52.5268.029ABT5006河沙Riversand23.375.73.0676.03
2.2各因素對(duì)生根率的影響
極差的大小反映各因素對(duì)生根率影響的大小,由表3可知,各因素對(duì)生根率影響的大小排序?yàn)镈>C>A>B,表明扦插基質(zhì)對(duì)生根率的影響最大,插條浸泡時(shí)間次之,激素濃度影響最小。以離差平方和最小項(xiàng)作為誤差項(xiàng),進(jìn)行方差分析(表4),結(jié)果表明,只有扦插基質(zhì)對(duì)生根率的影響達(dá)到顯著水平(P<0.05),其中泥炭土+珍珠巖基質(zhì)的生根率為52.47%(轉(zhuǎn)換后數(shù)據(jù)),顯著高于河沙和黃土;其余因素對(duì)生根率的影響并不顯著(P>0.05)。9個(gè)處理中,處理7的生根率最高,為56.7%(表2)。
表3各因素對(duì)生根率影響的極差分析
Table 3The range analysis of experimental factors affecting rooting rate
均值A(chǔ)verage生根率RootingrateABCDK142.5333.6335.2730.53bK228.5037.8027.5752.47aK336.9336.5345.1324.97b極差Range14.034.1717.5727.50
注:同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)
Note:The different normal letter in the same column indicates significant difference of the parameters
表4各因素對(duì)生根率影響的方差分析
Table 4The variance analysis of experimental factors affecting rooting rate
方差來源Variancesource自由度Degreeoffreedom(d.f.)生根率Rootingrate離差平方和Sumofsquares(SS)均方差Meansquareerror(MS)F值FValueA2299.42149.7110.94B227.3813.69C2465.23232.61516.99D21268.31634.1646.33*總和Total82060.34
注:*表示因素的影響達(dá)顯著水平(P<0.05)
Note:*indicates significant effects at 0.05 level
2.3各因素對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)的影響
由極差分析可知(表5),各因素對(duì)顯脈金花茶扦插生根數(shù)影響的大小排序?yàn)镈>C>A>B,扦插基質(zhì)影響最大,插條浸泡時(shí)間次之,激素濃度影響最??;對(duì)平均根長(zhǎng)影響的大小排序?yàn)镈>C>B>A,扦插基質(zhì)影響最大,插條浸泡時(shí)間次之,激素種類最小。方差分析結(jié)果表明(表6),扦插基質(zhì)對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)的影響達(dá)到極顯著水平(P<0.01),泥炭土+珍珠巖基質(zhì)的生根數(shù)和平均根長(zhǎng)顯著高于河沙和黃土;其余各因素對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)的影響均未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。9個(gè)處理中,處理2的生根數(shù)最多,平均每插穗達(dá)121.3條,處理7的平均根長(zhǎng)最長(zhǎng),為4.60 cm(表2)。
表5各因素對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)影響的極差分析
Table 5The range analysis of experimental factors affecting root number and root length
均值A(chǔ)verage生根數(shù)Rootnumber平均根長(zhǎng)RootlengthABCDABCDK19.228.778.458.81b2.052.012.042.01bK28.929.039.1010.49a2.042.082.012.32aK38.658.999.237.48b2.082.082.131.85b極差Range0.570.260.793.010.040.070.120.47
注:同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)
Note:The different normal letter in the same column indicate significant difference of the parameters
表6各因素對(duì)生根數(shù)和平均根長(zhǎng)影響的方差分析
Table 6The variance analysis of experimental factors affecting root number and root length
方差來源Variancesource自由度Degreeoffreedom(d.f.)生根數(shù)Rootnumber平均根長(zhǎng)Rootlength離差平方和Sumofsquares(SS)均方差Meansquareerror(MS)F值FValue離差平方和Sumofsquares(SS)均方差Meansquareerror(MS)F值FValueA20.490.254.330.0030.002B20.110.060.0100.0053.33C21.070.549.360.0210.0117.00D213.666.83119.79**0.3490.175116.33**總和Total815.330.383
注:**表示因素的影響達(dá)極顯著水平(P<0.01)
Note:**indicates extremely significant effects at 0.01 level
2.4各因素對(duì)生根效果指數(shù)的影響
由極差分析可知(表7),各因素對(duì)顯脈金花茶扦插生根效果指數(shù)的影響按大小排序?yàn)镈>C>A>B,扦插基質(zhì)對(duì)生根效果指數(shù)的影響最大,插條浸泡時(shí)間次之,激素濃度的影響最小。極差分析中,均值Ki反映了該因素水平i對(duì)生根效果指數(shù)的影響程度,生根效果指數(shù)越大,生根效果越好,因此,顯脈金花茶扦插生根的最優(yōu)組合為A1B2C3D2,即當(dāng)激素種類為NAA、激素濃度為300 mg·L-1,浸泡時(shí)間為12 h,扦插基質(zhì)為泥炭土+珍珠巖時(shí),顯脈金花茶的生根效果最好。由方差分析可知,扦插基質(zhì)對(duì)生根效果指數(shù)的影響達(dá)到極顯著水平(P<0.01),其余各因素對(duì)生根效果指數(shù)的影響未達(dá)顯著水平(P>0.05)(表8)。
表7各因素對(duì)生根效果指數(shù)影響的極差分析
Table 7The range analysis of experimental factors affecting rooting index
均值A(chǔ)verage生根效果指數(shù)RootingindexABCDK183.0478.6578.5877.83bK278.4581.9578.1795.33aK380.6481.5285.3768.97b極差Range4.593.307.2126.36
注:同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)
Note:The different normal letter in the same column indicates significant difference of the parameters
3討論
影響扦插繁殖成功的因素很多,其中,內(nèi)部因素有樹種遺傳特性、插穗年齡、穗條長(zhǎng)度等, 外部因素包括扦插基質(zhì)、激素種類、激素濃度、浸泡時(shí)間、光照、溫度等。本試驗(yàn)以外部因素為重點(diǎn),探討其對(duì)顯脈金花茶插穗生根的影響。在激素種類、激素濃度、插條浸泡時(shí)間和扦插基質(zhì)4個(gè)因素中,扦插基質(zhì)對(duì)顯脈金花茶扦插生根的影響最大,該因素對(duì)生根率、生根數(shù)、平均根長(zhǎng)、生根效果指數(shù)等的影響均達(dá)到顯著水平(P<0.05),其余各因素對(duì)這些指標(biāo)的影響均未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。從總的生根效果來看,顯脈金花茶扦插生根的最優(yōu)組合為A1B2C3D2,即當(dāng)激素種類為NAA、激素濃度為300 mg·L-1,插條浸泡時(shí)間為12 h,扦插基質(zhì)為泥炭土+珍珠巖時(shí),顯脈金花茶的生根效果最好。
表8各試驗(yàn)因素對(duì)生根效果指數(shù)影響的方差分析
Table 8The variance analysis of experimental factors affecting rooting index
方差來源Variancesource自由度Degreeoffreedom(d.f.)生根效果指數(shù)Rootingindex離差平方和Sumofsquares(SS)均方差Meansquareerror(MS)F值FValueA231.6215.811.64B219.289.64C298.2149.1055.09D21079.54539.7755.99*總和Total81228.65
注:*表示因素的影響達(dá)顯著水平(P<0.05)
Note:*Indicates significant effects at 0.05 level
扦插基質(zhì)是影響插條生根和根系活力的重要因素之一,不同扦插基質(zhì)的持水力、透氣性、土壤理化性質(zhì)等有所不同,因此,選擇合適的扦插基質(zhì)是扦插成功的關(guān)鍵[17]。本試驗(yàn)中,黃土澆水后粘性較大,土壤含水太多,不透氣,易板結(jié),同時(shí)易滋生霉菌,常常會(huì)引起插穗腐爛,影響扦插成活率;河沙的顆粒細(xì),透氣好,但保水性能較差,且不能給插條生根過程中提供足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),影響扦插成活率;泥炭土+珍珠巖基質(zhì)的結(jié)構(gòu)疏松,透氣性好,持水能力強(qiáng),一定時(shí)期內(nèi)能給插穗提供充足的養(yǎng)分,使得扦插后生根效果較好。因此,泥炭土+珍珠巖為顯脈金花茶的最佳扦插基質(zhì)。對(duì)金花茶扦插基質(zhì)的篩選試驗(yàn)表明,一般以黃土或黃土混合河沙、苔蘚等基質(zhì)的生根效果最好[18-20],毛瓣金花茶在河沙中生根效果最好[21]。本試驗(yàn)中,顯脈金花茶在泥炭土+珍珠巖基質(zhì)中生根效果最好,這可能是由于不同種類的金花茶對(duì)扦插基質(zhì)的要求不同。
外源激素對(duì)插條生根有一定的促進(jìn)作用,它能促進(jìn)插條內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的重新分配,增加插條基部的糖含量,使下切口成為插條養(yǎng)分的吸收中心,同時(shí)還能有效提高酶活性,刺激形成層細(xì)胞的分裂,促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)[22]。相關(guān)研究表明,吲哚丁酸、萘乙酸、ABT等均能提高金花茶的扦插成活率[18,23],而本實(shí)驗(yàn)中,激素種類、激素濃度、浸泡時(shí)間對(duì)顯脈金花茶扦插生根的影響均不顯著,其原因有待進(jìn)一步研究。
扦插繁殖作為一種常規(guī)的繁殖技術(shù),對(duì)顯脈金花茶來說是可行的。考慮到顯脈金花茶野生資源破壞十分嚴(yán)重,且結(jié)實(shí)率低,用種子進(jìn)行大規(guī)模育苗并不現(xiàn)實(shí),而對(duì)金花茶組植物的組織培養(yǎng)目前仍處在實(shí)驗(yàn)室階段,尚不能工廠化育苗。因此,采用扦插繁殖對(duì)顯脈金花茶進(jìn)行規(guī)?;a(chǎn),是該物種種質(zhì)資源保護(hù)和可持續(xù)利用的主要途徑。
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(責(zé)任編輯:米慧芝)
Cutting Propagation in the Endangered Plant Camellia euphlebia
柴勝豐1,鄧耘2,吳儒華3,何志紅2,劉思2,寧世江1,韋記青1**
CHAI Shengfeng1,DENG Yun2,WU Ruhua3,HE Zhihong2,LIU Si2,NING Shijiang1,WEI Jiqing1
(1.廣西壯族自治區(qū)中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所,廣西桂林541006;2.柳州市園林科學(xué)研究所,廣西柳州545005;廣西防城金花茶國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理處,廣西防城港538021)
(1.Guangxi Institute of Botany,Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences,Guilin,Guangxi,541006,China;2.Liuzhou Institute of Gardening, Liuzhou,Guangxi,545005,China;3.Fangcheng Golden Camellia National Nature Reserve Management Office,F(xiàn)angchenggang,Guangxi,538021,China)
摘要:【目的】研究顯脈金花茶(Camellia euphlebia)扦插生根的最佳試驗(yàn)條件,為該物種的保護(hù)及規(guī)模化種植提供技術(shù)支持?!痉椒ā坎捎盟囊蛩厝秸辉囼?yàn)設(shè)計(jì),以生根率、生根數(shù)和平均根長(zhǎng)為扦插生根效果的評(píng)價(jià)指標(biāo),并構(gòu)建生根效果指數(shù),研究激素種類、激素濃度、插條浸泡時(shí)間和扦插基質(zhì)4個(gè)因素對(duì)顯脈金花茶扦插生根的影響?!窘Y(jié)果】扦插基質(zhì)對(duì)生根效果指數(shù)的影響最大,插條浸泡時(shí)間次之,激素濃度的影響最小,只有扦插基質(zhì)對(duì)生根效果指數(shù)的影響達(dá)到顯著水平(P<0.05),其余3個(gè)因素的影響均未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。當(dāng)激素種類為萘乙酸1-Naphthaleneacetic acid (NAA)、激素濃度為300 mg·L-1,浸泡時(shí)間為12 h,扦插基質(zhì)為泥炭土+珍珠巖時(shí),顯脈金花茶扦插的生根效果最好?!窘Y(jié)論】采用扦插繁殖技術(shù)開展顯脈金花茶的大規(guī)模育苗是可行的。
關(guān)鍵詞:顯脈金花茶瀕危植物扦插繁殖正交試驗(yàn)
Abstract:【Objective】In order to provide technical support for protection and large-scale planting of Camellia euphlebia,the experiment was designed to find out the optimum conditions of cuttings rooting in this species.【Methods】By using 1 or 2-year-old branches of C.euphlebia,and taking rooting rate,rooting number,root length,and rooting effect index as evaluation index,the effect of four factors including hormone types and concentration,treating time,substrate types on rooting of cuttings with orthogonal design L9(34) were studied.【Results】The substrate types were the key factor affecting rooting of cuttings. Treatment time was second effect on rooting of cuttings. Hormone concentration was least effect on rooting of cuttings.The substrate types had significant effect on rooting effect index of cuttings,while other 3 factors didn’t show any significant effect. The optimum treatment condition is to treat cuttings with 300 mg·L-1NAA for 12 h and taking peat soil + perlite as substrate.【Concusion】The cutting propagation is feasible to carry out large-scale breeding of C.euphlebia.
Key words:Camellia euphlebia,endangered plant,cutting propagation,orthogonal design
中圖分類號(hào):Q945.5
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1002-7378(2016)01-0015-06
作者簡(jiǎn)介:柴勝豐(1980-),男,博士,副研究員,主要從事植物保護(hù)生物學(xué)研究。** 通訊作者:韋記青(1968-),女,研究員,主要從事植物營(yíng)養(yǎng)與栽培研究,E-mail:weijq@gxib.cn。
收稿日期:2015-09-11
網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間:2016-01-27
網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1075.N.20160127.1616.002.html
*國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31160137),廣西科技成果轉(zhuǎn)化與推廣計(jì)劃項(xiàng)目(桂科轉(zhuǎn)14125003-2-18),廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科重1355001-5-4),桂林市科技攻關(guān)項(xiàng)目(20130414)和廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013GXNSFAA019081)資助。