高效液相色譜法測(cè)定蒙藥毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

銀金蘭，鄭 敏，李佳青

（內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017）

高效液相色譜法測(cè)定蒙藥毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

銀金蘭，鄭 敏，李佳青

（內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017）

目的 建立測(cè)定蒙藥毛浩日查干 －5中二苯乙烯苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱采用 Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）、ODS預(yù)柱，流動(dòng)相為乙腈－水（25∶75），檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm，流速為1．0 mL／min。結(jié)果 二苯乙烯苷進(jìn)樣量在0．05～0．75 μg與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系(r＝0．999 99，n＝6)，加樣回收率為98．34%，RSD為1．56%(n＝6)。結(jié)論 該法結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測(cè)定毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量。

毛浩日查干－5；二苯乙烯苷；含量測(cè)定；高效液相色譜法

蒙藥毛浩日查干－5由手掌參、黃精、玉竹、制何首烏、廣棗組方，具有補(bǔ)腎、滋補(bǔ)強(qiáng)身之功效；用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體弱等癥。二苯乙烯苷是方中制何首烏藥材特有的生物活性成分，水溶性良好，同時(shí)具有補(bǔ)肝益腎的作用，現(xiàn)代藥理研究表明其還具有抗衰老、降低膽固醇、提高免疫功能、防止動(dòng)脈硬化及護(hù)肝等作用[1－2]。且其含量較穩(wěn)定，檢測(cè)重現(xiàn)性好，質(zhì)量易控制。為此，將其作為毛浩日查干－5的指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國(guó) Agilent公司)，包括四元泵、在線(xiàn)脫氣機(jī)、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、VWD檢測(cè)器，HP化學(xué)工作站。乙腈為色譜純?cè)噭?，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；對(duì)照品為2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D葡萄糖苷（簡(jiǎn)稱(chēng)二苯乙烯苷，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 110844－201310）；毛浩日查干 －5(自制，批號(hào)為 140401，140402，140403）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），ODS預(yù)柱；流動(dòng)相：乙腈－水（25∶75）；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；流速：1．0 mL／min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。

2．2 溶液制備

取本品粉末約0．5 g，精密稱(chēng)定，置50 mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相40 mL，超聲處理30 min（功率250 W，頻率20 kHz），放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[3－5]。精密稱(chēng)取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每100 mL含5 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。按處方量制備缺制何首烏藥材的陰性樣品，取約0．5 g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液的制備方法制備得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取供試品溶液、二苯乙烯苷對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)陰性對(duì)照品溶液在二苯乙烯苷峰位置無(wú)相應(yīng)峰出現(xiàn)，且二苯乙烯苷和其他組分色譜峰可很好分離，對(duì)二苯乙烯苷的測(cè)定無(wú)干擾；在與二苯乙烯苷對(duì)照品峰相對(duì)應(yīng)位置上供試品具有相應(yīng)色譜峰，且與相鄰峰的分離度大于1．5，按二苯乙烯苷峰計(jì)算理論板數(shù)為10 000以上，拖尾因子為1．03。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：精密量取二苯乙烯苷對(duì)照品溶液（50 μg／mL）1，2，4，8，10，15 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程 A＝0．936 2 C－1．78，r＝0．999 99(n＝6)。結(jié)果表明，二苯乙烯苷進(jìn)樣量在0．05～0．75 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為0．22%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為140404）溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果的 RSD為0．20% (n＝6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為140401），依法制備6份供試品溶液，按擬訂方法分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為1．620 mg／片，RSD為1．60%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品9份（批號(hào)為140401）約0．2 g，精密稱(chēng)定，置50 mL棕色容量瓶中，分別按不同量級(jí)加入二苯乙烯苷對(duì)照品溶液（0．123 g／L），按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 二苯乙烯苷回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為140401，140402，140403的二苯乙烯苷含量分別每片為1．62，1．49，1．49 mg。

3 討論

目前，用HPLC法測(cè)定二苯乙烯苷含量所用的流動(dòng)相多為乙腈－水的不同比例[3－5]。本試驗(yàn)中比較了乙腈－水（19∶81）、乙腈－水（25∶75）、乙腈－水（24∶76），發(fā)現(xiàn)第2個(gè)峰形好，且與2010年版《中國(guó)藥典(一部)》藥材項(xiàng)下二苯乙烯苷含量測(cè)定所用流動(dòng)相一致，故流動(dòng)相選擇乙腈－水（25∶75）。

本法作為該藥品的含量測(cè)定方法，能保證藥品檢測(cè)時(shí)數(shù)據(jù)的真實(shí)性、可靠性，可作為保證藥品質(zhì)量的檢測(cè)依據(jù)。

[1]許評(píng)比，李榮宗 ．人參、何首烏的毒性反應(yīng)[J]．海峽藥學(xué)，2001，13（3）：112－113．

[2]李玉芳，和玄華．何首烏現(xiàn)代研究進(jìn)展[J]．中成藥，1997，19（5）：37－39．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:946．

[4]鄭麗娜，任海勇，張作平．HPLC法測(cè)定養(yǎng)血生發(fā)膠囊中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量[J]．中國(guó)藥物警戒，2011，8（4）：199－201．

[5]秦郁文，唐富麗．HPLC法測(cè)定七寶美髯軟膠囊中二苯乙烯苷的含量[J]．中國(guó)藥師，2013，16（5）：686－688．

R284．1；R286

A

1006－4931(2016)01－0066－02

銀金蘭，女，主任藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觯?電子信箱)nmyyyjl＠sohu．com。

2015－06－30)