不同稀釋液對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清雌二醇濃度的影響*

王洪珍，陳小芳

(江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院生殖中心　212001)

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·臨床研究·

不同稀釋液對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清雌二醇濃度的影響*

王洪珍，陳小芳△

(江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院生殖中心212001)

摘要:目的探討不同稀釋液對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清高濃度雌二醇(E2)的影響，選擇適用稀釋液，減少檢驗(yàn)成本支出。方法選取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，然后上DXI800化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)并計(jì)算結(jié)果，所得各稀釋組E2值與原始值作配對(duì)t檢驗(yàn)并作相關(guān)性及線性回歸分析。結(jié)果各稀釋組E2值與原始值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，低值混合血清組E2值與原始值偏差最小，生理鹽水組偏差超出允許范圍；E2專用稀釋液組，低值混合血清組及生理鹽水組的E2值與原始值的相關(guān)系數(shù)分別為0.998、0.998和0.967，回歸分析常數(shù)項(xiàng)E2專用稀釋液組絕對(duì)值最小，生理鹽水組絕對(duì)值最大。結(jié)論除E2專用稀釋液外，低值混合血清可以用作DXI800化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)定高濃度E2的替代稀釋液，而生理鹽水不能用作稀釋測(cè)定高值E2。

關(guān)鍵詞:稀釋；化學(xué)發(fā)光免疫；雌二醇

婦產(chǎn)科內(nèi)分泌學(xué)的發(fā)展離不開生殖激素測(cè)定方法的不斷改進(jìn)，生殖醫(yī)學(xué)的臨床工作要求激素測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、快速。其中血清雌二醇(E2)是促排卵方案的一項(xiàng)重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)，促排卵方案的應(yīng)用，E2測(cè)量值常超出測(cè)定上限4 800 pg/mL。為利于生殖治療中方案的調(diào)整及防治卵巢過度刺激綜合征發(fā)生，臨床要求對(duì)超出線性范圍的高濃度E2進(jìn)行稀釋定量測(cè)定，儀器專用E2稀釋液較貴且在保質(zhì)期內(nèi)使用，由于目前此類標(biāo)本量不多，促使檢測(cè)成本較高，為減少檢驗(yàn)成本支出選擇適用稀釋液，研究者用不同稀釋液對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定高濃度E2進(jìn)行稀釋測(cè)定并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集2014年6～11月本院生殖中心順磁性顆粒化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定E2結(jié)果為2 522～4 793 pg/mL的患者靜脈血清標(biāo)本20例，置-30 ℃保存。

1.2儀器與試劑全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀DXI800和E2測(cè)定試劑盒均由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司提供，試劑批號(hào)均在有效期內(nèi)。

1.3方法

1.3.1自制低值混合血清的制備方法選擇本實(shí)驗(yàn)室體檢健康男性血清，取體檢結(jié)果無異常，生化指標(biāo)及血常規(guī)指標(biāo)均無明顯異常的無溶血、無黃疸、無脂血的新鮮血清標(biāo)本制成混合血清，再上機(jī)檢測(cè)混合血清的E2濃度，檢測(cè)結(jié)果為20～50 pg/mL時(shí)，可作為合格的自制E2標(biāo)本稀釋液(本實(shí)驗(yàn)的混合血清的E2濃度為35 pg/mL)，然后56 ℃水浴滅活10 h后再3 000 r/min離心10 min，小包裝分裝保存于-30 ℃冰箱，半年內(nèi)有效，使用前30 min置室溫融化，避免反復(fù)凍融。

1.3.2檢測(cè)方法將20例標(biāo)本分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清，生理鹽水按1∶10稀釋(50 μL標(biāo)本+450 μL稀釋液)混勻后上機(jī)檢測(cè)并計(jì)算結(jié)果。 血清E2原始值和不同稀釋方法計(jì)算值按原始值、E2專用稀釋液組、低值混合血清組和生理鹽水組分類統(tǒng)計(jì)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)不同稀釋組E2值與原始值之間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，使用Pearson相關(guān)分析計(jì)算不同稀釋組與原始值的相關(guān)系數(shù)并擬合線性回歸方程。

2結(jié)果

E2專用稀釋液組中E2水平為(3 421.75±708.52)pg/mL與原始值(3 167.85±657.35)pg/mL比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-17.068,P=0.000)；自制低值混合血清組(3 008.85±642.17)與原始值比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.582,P=0.000)；生理鹽水組(10 073.6±1 341.38)與原始值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-42.608,P=0.000)。E2專用稀釋液組、低值混合血清組和生理鹽水組的E2值與原始值之間的相對(duì)差值分別為-8.01%、5.10%和-222.10%；Pearson相關(guān)系數(shù)分別為0.998、0.998和0.967；線性回歸方程分別為Y=0.926X-0.639、Y=1.021X+94.63和Y=0.474X-1 607.89；回歸常數(shù)項(xiàng)顯著性分析，P分別為0.989、0.070和0.000；回歸系數(shù)顯著性分析，P均為0.000。

3討論

化學(xué)發(fā)光免疫法是目前測(cè)定激素類物質(zhì)的常用方法，隨著全自動(dòng)分析儀的應(yīng)用，測(cè)試簡(jiǎn)便快速。但儀器都有一定的檢測(cè)范圍，盡管DXI800檢測(cè)E2的范圍達(dá)20～4 800 pg/mL，但隨著近年生殖醫(yī)學(xué)體外受精-胚胎移植臨床工作的開展，促排卵方案的應(yīng)用，E2測(cè)量值常大于4 800 pg/mL，而E2結(jié)果對(duì)治療方案的調(diào)整和防治卵巢過度刺激綜合征發(fā)生至關(guān)重要，因此需要對(duì)超出線性范圍的高濃度E2進(jìn)行稀釋定量測(cè)定。由于不同的稀釋介質(zhì)會(huì)對(duì)稀釋結(jié)果造成不同的偏差，甚至對(duì)臨床醫(yī)生產(chǎn)生誤導(dǎo)，引發(fā)醫(yī)患矛盾和醫(yī)療糾紛。為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)南♂屢?，使檢測(cè)結(jié)果偏差控制在可允許的范圍內(nèi)。專用E2稀釋液較貴，為減少檢驗(yàn)成本支出選擇適用稀釋液，采用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定的高濃度E2進(jìn)行稀釋測(cè)定并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

本試驗(yàn)選取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，然后上DXI800化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)并計(jì)算結(jié)果，所得各稀釋組E2值與原始值作配對(duì)t檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。各稀釋組E2值與原始值的相關(guān)性與線性回歸分析顯示，E2專用稀釋液組值、低值混合血清組值與原始值相關(guān)系數(shù)均為0.998,生理鹽水組值與原始值相關(guān)系數(shù)為0.967，三組都呈正相關(guān)；回歸系數(shù)顯著性分析P均為0.000，說明三組回歸分析模型整體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；回歸常數(shù)項(xiàng)即回歸方程截距，E2專用稀釋液組最小，為-0.639，P=0.989表明對(duì)于不同濃度E2值，用E2專用稀釋液組值與原始值的回歸方程擬合出的結(jié)果最接近原始值，低值混合血清組，回歸常數(shù)項(xiàng)較大為94.633，但P=0.070,大于0.05，表示常數(shù)項(xiàng)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)于不同濃度E2值，其回歸方程擬合出的結(jié)果仍接近原始值，生理鹽水組回歸常數(shù)項(xiàng)為-1607.887，P=0.000，表示常數(shù)項(xiàng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)于不同濃度E2值，其回歸方程擬合出的結(jié)果與原始值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)超出檢測(cè)線性范圍的高值標(biāo)本作適當(dāng)?shù)南♂寱r(shí)，稀釋液的酸堿度和電解質(zhì)會(huì)影響反應(yīng)體系中pH值、離子強(qiáng)度，反應(yīng)介質(zhì)的改變會(huì)直接影響反應(yīng)的結(jié)果，另外稀釋液中的蛋白質(zhì)、脂類、糖類、特有離子等物質(zhì)也會(huì)間接的影響抗原抗體的結(jié)合[1]。低值混合血清的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白質(zhì)、脂類、糖類等物質(zhì)與待測(cè)血清標(biāo)本基本一致，所以其測(cè)定的不同濃度E2與原始值偏差最小，為5.10%，E2專用稀釋液基質(zhì)接近血清，其測(cè)定結(jié)果與原始值偏差較小，為-8.01%，兩者偏差在允許范圍內(nèi)，均可以作為高濃度血清E2的稀釋液使用；生理鹽水的pH值、離子強(qiáng)度與待測(cè)血清標(biāo)本相似，但其不含蛋白質(zhì)、脂類、糖類等物質(zhì)，與待測(cè)血清標(biāo)本有較大差異，所以其測(cè)定結(jié)果與原始值偏差最大，為-222.10%，超出可允許范圍，說明生理鹽水不可以用于高濃度血清E2的稀釋測(cè)定。

不同稀釋液對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定血清E2濃度影響的報(bào)道很少，本研究結(jié)果與包安裕等[2]研究結(jié)論有差異，后者各稀釋組與原始值差異進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，生理鹽水稀釋標(biāo)本得到的E2值與原始值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。可能原因如下：(1)兩種實(shí)驗(yàn)測(cè)量血清E2所用的儀器和試劑不同，測(cè)量范圍也不同；(2)兩種實(shí)驗(yàn)研究的標(biāo)本E2濃度不同，本研究標(biāo)本E2濃度為2 522～4 793 pg/mL，后者研究標(biāo)本的E2濃度未明確，但在線性范圍10～1 000 pg/mL。因此，不同儀器、不同試劑檢測(cè)E2高值標(biāo)本稀釋液的選擇可能是不同的，但都需要進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，以確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

在化學(xué)發(fā)光免疫法人絨毛膜促腺性激素(HCG)稀釋測(cè)定研究中，曾慶洋等[3]認(rèn)為健康男性混合血清是一種比較理想的稀釋液；也有研究者認(rèn)為生理鹽水可以作為高值HCG稀釋之用[4-5]。實(shí)際工作中生理鹽水也常用于化學(xué)發(fā)光免疫法泌乳素、雌三醇等稀釋測(cè)定，因此設(shè)計(jì)方案時(shí)沒想到生理鹽水稀釋E2標(biāo)本的結(jié)果與原始值差異會(huì)如此之大；相關(guān)性分析時(shí)，生理鹽水稀釋組結(jié)果與原始值如此強(qiáng)相關(guān)也出乎意料。查閱資料健康男性混合血清E2值可低于20 pg/mL[2]，實(shí)驗(yàn)中對(duì)體檢健康男性混合血清進(jìn)行E2檢測(cè)發(fā)現(xiàn)測(cè)定數(shù)值為35～65 pg/mL。因此，臨床實(shí)驗(yàn)只有不斷驗(yàn)證才能得到正確的結(jié)論。

生殖醫(yī)學(xué)的醫(yī)生要根據(jù)E2等激素監(jiān)測(cè)患者的用藥效果，以便調(diào)整治療措施，要求實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果快速準(zhǔn)確，而E2等激素常隨個(gè)體月經(jīng)周期的變化而變化，E2等測(cè)定值本身對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性也有監(jiān)測(cè)的作用[6-8]。實(shí)際應(yīng)用中，臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)有時(shí)E2檢測(cè)結(jié)果與患者卵泡發(fā)育情況會(huì)有偏差，因此，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重視標(biāo)本分析前、分析中和分析后的質(zhì)量管理，每天做好室內(nèi)質(zhì)控，結(jié)果在控方可審發(fā)報(bào)告，定期參加室間質(zhì)控等質(zhì)量控制工作。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)E2高值超出線性范圍的標(biāo)本，不建議使用生理鹽水稀釋標(biāo)本，在沒有專用E2稀釋液的情況下，可以使用健康男性混合血清稀釋替代(計(jì)算結(jié)果需減去混合血清本身的E2濃度)，如果使用回歸方程算出標(biāo)本E2值，結(jié)果可能更準(zhǔn)確。

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*基金項(xiàng)目：江蘇省鎮(zhèn)江市重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(SH2015073)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.031

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)13-1827-02

(收稿日期：2016-02-05修回日期：2016-04-12)

△通訊作者，E-mail:chenxiaofang369@126.com。