痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結(jié)核感染診斷中的聯(lián)合應(yīng)用

張　梅

(清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東清遠(yuǎn) 511518)

?

·論著·

痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結(jié)核感染診斷中的聯(lián)合應(yīng)用

張梅

(清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東清遠(yuǎn) 511518)

摘要:目的探討痰TB-DNA定性與血清抗結(jié)核抗體及痰抗酸染色檢測(cè)方法在肺結(jié)核感染診斷中的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值。方法以2013年1月至2015年6月在清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院就診的肺結(jié)核患者278例為研究對(duì)象。另?yè)裥詣e、年齡匹配的同期入院非肺結(jié)核病患者121例為對(duì)照組。 現(xiàn)通過收集該肺結(jié)核患者的TB-DNA定性和血清抗結(jié)核抗體及抗酸染色的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，探討痰TB-DNA定性與血清抗結(jié)核抗體檢測(cè)及抗酸染色在肺結(jié)核感染診斷中的聯(lián)合應(yīng)用。結(jié)果結(jié)核病組中抗酸染色靈敏度為32.01%；血清抗結(jié)核抗體靈敏度為51.44%；TB-DNA定性靈敏度為48.56%；TB-DNA定性和血清抗結(jié)核抗體聯(lián)合檢出率為67.63%；TB-DNA定性和抗酸染色聯(lián)合檢出率為54.68%；血清抗結(jié)核抗體和抗酸染色聯(lián)合檢出率為57.55%；三者聯(lián)合檢出率為68.71%。結(jié)論血清抗結(jié)核抗體檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷簡(jiǎn)單、有效，靈敏度優(yōu)于TB-DNA定性檢測(cè)及抗酸染色，但其特異度比較低。細(xì)菌學(xué)診斷是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是痰涂片尋找抗酸桿菌的陽(yáng)性率低，而TB-DNA定性檢測(cè)快速又準(zhǔn)確。血清抗結(jié)核抗體及痰抗酸染色及痰TB-DNA定性檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用于肺結(jié)核診斷效果更佳。

關(guān)鍵詞:結(jié)核抗體；抗酸染色；聚合酶鏈反應(yīng)；肺結(jié)核

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的可累及全身多系統(tǒng)多器官的疾病，是由單一致病菌感染導(dǎo)致病死率最高的人畜共患傳染病。其嚴(yán)重危害人民群眾的健康，而這最重要的原因，就是其早期診斷技術(shù)不理想。實(shí)驗(yàn)室常用抗酸染色檢查痰中的結(jié)核分枝桿菌為金標(biāo)法篩查肺結(jié)核[1-2],但其漏檢率高，目前一般采用的檢測(cè)血清抗結(jié)核抗體(PPD-IgG)的方法為膠體金法，此法快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高，是目前比較理想的篩查方法，但其特異度不高，如能結(jié)合痰TB-DNA定性檢測(cè)，則能提高其檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

1資料與方法

1.1一般資料2013年1月至2015年6月在清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院就診的以各方面綜合考慮為肺結(jié)核患者，入選病例包括診斷為肺結(jié)核的患者278例，男215例，女63例，最大年齡為95歲，最小年齡為14歲，平均年齡為54.8歲，納入肺結(jié)核病例組的嚴(yán)格遵照世界衛(wèi)生組織(WHO)《肺結(jié)核診斷指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)癥狀典型如有接觸病史、潮熱、盜汗、咳嗽、咯血；(2)體征典型如消瘦、貧血、肺上部濕啰音；(3)X線片表現(xiàn)典型(病灶位于上葉后或下葉背段，浸潤(rùn)、增殖、空洞、鈣化多種性質(zhì)病灶并存，同側(cè)或?qū)?cè)有播散病灶)或痰菌抗酸染色陽(yáng)性或抗結(jié)核治療有效即可診斷。另?yè)裥詣e、年齡匹配的同期入院非肺結(jié)核病患者121例，男79例，女42例，最小年齡為9歲，最大年齡為88歲，平均年齡56.6歲為對(duì)照組。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)本次入院前已存在嚴(yán)重的肝腎疾病、惡性腫瘤等嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾?。?2)HIV的患者；(3)孕婦或哺乳婦女及對(duì)藥物過敏的患者。所有入選者在就診期間，取痰液送往檢驗(yàn)科微生物室進(jìn)行痰涂片，進(jìn)行抗酸染色；另取痰液送往廣東省金域檢驗(yàn)中心檢測(cè)痰液TB-DNA；空腹采集靜血3 mL，分離血清送往檢驗(yàn)科免疫室檢測(cè)PPD-IgG。

1.2儀器與試劑日本OLYMPUS公司的光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS-BX41)；美國(guó)伯樂公司的CFX-96熒光定量PCR儀。杭州天和微生物試劑有限公司的抗酸染液；上海奧普生物醫(yī)藥有限公司的結(jié)核分枝桿菌抗體診斷試劑盒；凱杰生物工程有限公司的結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑盒。

1.3方法抗酸染色在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，石炭酸復(fù)紅染色后，用鹽酸乙醇分色，當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。涂片染色鏡檢嚴(yán)格按《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[3]和試劑說明書進(jìn)行。鏡檢結(jié)果按以下方式報(bào)告：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌為抗酸桿菌陰性(-)；否則為抗酸桿菌陽(yáng)性(+)。PPD-IgG試驗(yàn)步驟：在反應(yīng)板的反應(yīng)孔中間，依次加入2滴封閉液、40 μL 血清標(biāo)本、6滴洗滌液、2滴金標(biāo)液、6滴洗滌液，等待薄膜吸入。結(jié)果讀取，薄膜中間有紅圓點(diǎn)為陽(yáng)性，否則為陰性。FQ-PCR檢測(cè)嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。主要實(shí)驗(yàn)操作包括樣本液化、DNA提取、擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備、加樣和PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件：先在37 ℃擴(kuò)增3 min；93 ℃再變性1 min；93 ℃退火5 s，最后在60 ℃延伸40 s，以20 μL的反應(yīng)體系重復(fù)40個(gè)循環(huán)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理按涂片抗酸染色鏡檢結(jié)果及PPD-IgG、TB-DNA檢測(cè)結(jié)果均以陰性(-)、陽(yáng)性(+)對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行分類。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用χ2檢測(cè)結(jié)核陽(yáng)性率的比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1結(jié)核抗酸染色兩組檢測(cè)結(jié)果的靈敏度及特異度比較肺結(jié)核病例組血清結(jié)核抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率為32.01%，顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在結(jié)核組別中，陽(yáng)性89例，陰性189例，靈敏度為32.01%；在非結(jié)核組別中，全部為陰性結(jié)果，特異度為100.00%，約登指數(shù)為32.01%。

2.2血清抗結(jié)核抗體兩組檢測(cè)結(jié)果的靈敏度及特異度比較結(jié)果肺結(jié)核病例組血清結(jié)核抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率為51.44%，顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在結(jié)核組別中，陽(yáng)性為143例，陰性為135例，靈敏度為51.44%；在非結(jié)核組別中，陽(yáng)性為41例，陰性為80例，特異度為66.12%，約登指數(shù)為17.56%。

2.3結(jié)核核酸定性兩組檢測(cè)結(jié)果的靈敏度及特異度比較肺結(jié)核病例組痰TB-DNA陽(yáng)性率48.56%，顯著高于對(duì)照組(陽(yáng)性率為0)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在結(jié)核組中陽(yáng)性為135例，陰性為143例，靈敏度為48.56%；在非結(jié)核組別中，全部為陰性，特異度為100.00%，約登指數(shù)為48.56%。

2.4各種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果檢出率比較各種檢測(cè)方法診斷肺結(jié)核感染中，由單一痰抗酸染色檢測(cè)方法檢出率為32.01%，血清抗體檢出率為51.44%，由痰PCR檢出率為48.56%；三者的聯(lián)合檢出率為68.71%。

3討論

結(jié)核病目前在我國(guó)發(fā)病率極高，其特點(diǎn)依然是流行性高、感染性高、患病情況嚴(yán)重、耐藥性高、病死率較高、疫情難以遞減。發(fā)現(xiàn)患者，實(shí)施治療和系統(tǒng)管理，直到傳染源完全消滅是結(jié)核病控制的最重要措施。發(fā)現(xiàn)患者主要屬于肺結(jié)核診斷問題，只有確診了才可以采取措施進(jìn)行治療，及時(shí)診斷或延誤診斷都能夠影響到治療效果和預(yù)后問題，所以肺結(jié)核診斷對(duì)流行病學(xué)和臨床治療有非常重要的意義。呼吸系統(tǒng)疾病屬于常見肺結(jié)核疾病的臨床癥狀。通常在肺結(jié)核診斷中，痰和病變組織檢測(cè)結(jié)核桿菌屬于最為可靠的診斷方法，被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)。胸部X線片檢查通常無法確診肺結(jié)核，因?yàn)橛衅渌愃品尾考膊?，如肺炎、肺部腫瘤等疾病也能夠發(fā)生相似的肺部X線片影像學(xué)資料。所以，在大多數(shù)發(fā)展中國(guó)家，檢查痰中細(xì)菌學(xué)，通常可以作為診斷肺結(jié)核的唯一指標(biāo)。但是，此種方法的檢出率比較低，若是只使用此痰結(jié)核菌檢查方法作為診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)，有可能導(dǎo)致大多數(shù)結(jié)核患者出現(xiàn)漏診。在全國(guó)肺結(jié)核流行病調(diào)查當(dāng)中，痰菌呈現(xiàn)陰性的肺結(jié)核患者占總的結(jié)核病患者的 60%～70%。在實(shí)際臨床應(yīng)用中，痰菌出現(xiàn)陰性且通過臨床綜合資料確診為肺結(jié)核病的患者占臨床診斷為肺結(jié)核病例的 70%～80%。因此，在臨床實(shí)際應(yīng)用中，如果沒有得到病原學(xué)確診依據(jù)，菌陰肺結(jié)核的診斷依然需要按照臨床資料綜合分析進(jìn)行確診避免發(fā)生誤診。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用一種檢測(cè)方法來診斷肺結(jié)核是非常不理想的，而使用3種檢測(cè)方法聯(lián)用對(duì)肺結(jié)核的靈敏度和準(zhǔn)確度最高，和一些發(fā)表的研究文獻(xiàn)結(jié)果相一致[4]。PPD-IgG屬于肺結(jié)核基本診斷中比較傳統(tǒng)的方法，陽(yáng)性者顯示患者已經(jīng)感染了結(jié)核桿菌且存在抗結(jié)核桿菌的免疫力，但是并無法確定其就是結(jié)核病，其特異性也比較差。使用通常認(rèn)為強(qiáng)陽(yáng)性才能成為其診斷的標(biāo)準(zhǔn)，能夠避免過度誤診。本研究發(fā)現(xiàn)，痰結(jié)核分枝桿菌抗酸染色檢測(cè)、血清結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)、痰結(jié)核分枝桿菌核酸定性聯(lián)合檢測(cè)，檢測(cè)率為68.71%，明顯優(yōu)于其他組合，可減少肺結(jié)核分枝桿菌感染的漏診率。

診斷中以痰TB-DNA作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[5]，并不完善，容易漏診誤診，最好使用多種方法聯(lián)檢，確保得到最高檢出率以及最低的誤診率。本研究涉及的檢測(cè)方法如痰結(jié)核分枝桿菌抗酸染色檢測(cè)、PPD-IgG檢測(cè)、痰TB-DNA等都比較經(jīng)濟(jì)、方便，可以快速確認(rèn)，適合在基層醫(yī)院使用，有較高的價(jià)值[6]。

參考文獻(xiàn)

[1]王成勇，李益榮．3 479例肺結(jié)核患者痰標(biāo)本抗酸桿菌檢查結(jié)果分析[J]．臨床肺科雜志，2004，9(6)：605-606．

[2]張梅,焦祖?zhèn)?聶渝瓊.我國(guó)結(jié)核病診斷方法現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2011,21(12):3018-3020.

[3]中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì)．結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程[M]．北京：中國(guó)教育文化出版社，2006：13-19．

[4]王成勇,李翠萍.三種檢測(cè)方法在菌陰結(jié)核病診斷中的價(jià)值[J].臨床肺科學(xué)雜志,2007,12(9):933-934.

[5]李振生，李德新．結(jié)核菌噬菌體生物擴(kuò)增法與結(jié)核菌DNA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)痰菌陰性肺結(jié)核診斷的價(jià)值[J]．河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,33(8):881-883.

[6]戴駿，徐玉嬋．TB-DNA、TB-DOT、BCG-PPD檢測(cè)在痰菌陰性肺結(jié)核診斷中的價(jià)值[J].山東醫(yī)藥,2009,49(50):50-52.

Combined detection of sputum smears,sputum TB-DNA and serum anti-PPD-IgG in diagnosis of tuberculosis

ZhangMei

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofQingyuanCity,Qingyuan,Guangdong511518,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the value of combined application of qualitative detection of TB-DNA serum anti-PPD-IgG and acid-fast staining methods in the diagnosis of tuberculosis infection.MethodsTotally 278 pulmonary tuberculosis patients and 121 non-pulmonary tuberculosis patients were collected from Qingyuan people′s hospital during the period from January 2013 to June 2015.Tuberculosis in patients with TB-DNA qualitative and serum anti-PPD-IgG and acid-fast staining test results was analyzed.Sputum TB-DNA qualitative and serum anti-PPD-IgG detection and joint application of acid-fast staining in the diagnosis of tuberculosis infection.ResultsSensitivities of acid-fast staining,TB-DNA and serum anti-PPD-IgG in the TB group were 32.01%,51.44% and 48.56% respectively.The detectable rate of combining TB-DNA with serum PPD-IgG was 67.63%.The detectable rate of combining TB-DNA with acid-fast staining was 54.68%.The detectable rate of combining serum anti-PPD-IgG with acid-fast combined rate was 57.55%.The detectable rate of combining three assays improved to 68.71%.ConclusionSerum anti-PPD-IgG detection in the diagnosis of tuberculosis is simple,effective,qualitative detection of acid-fast staining sensitivity better than TB-DNA,but it had a poor specificity.Bacteriologic diagnosis are tuberculosis diagnostic "gold standard",but the detectable rate for acid-fast bacilli is low.The qualitative of TB-DNA test had a better sensitivity and specificity than other two assay.Combining with three assays could increase detectable rate and improve diagnosis of tuberculosis disease.

Key words:tuberculosis antibody;acid fast stain;polymerase chain reaction;tuberculosis

(收稿日期：2015-10-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.030

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0504-02

作者簡(jiǎn)介：張梅，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事免疫學(xué)研究。