波爾山羊人工授精技術及效果分析

張年江

(黑龍江省海林市畜牧獸醫(yī)局 157100)

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波爾山羊人工授精技術及效果分析

張年江

(黑龍江省海林市畜牧獸醫(yī)局 157100)

羊人工授精技術是用假陰道采集種公羊的精液，對精液品質進行檢查和稀釋后，再用輸精器將一定量的精液輸入到發(fā)情母羊生殖道內，用以代替公母羊自然交配而繁殖后代的一種技術。人工授精技術可以提高種公羊的配種效能，擴大配種母羊的頭數，不僅可以有效地改變羊的交配過程，還能夠提高優(yōu)秀種公羊的配種率，這在養(yǎng)羊生產中具有重要意義。

波爾山羊的人工授精與綿羊相似，但通過子宮頸管實施子宮內輸精比綿羊容易。其次，有公山羊存在時母羊的發(fā)情鑒定(即使在同情發(fā)情后)更為有效，即使沒有公羊也可進行母山羊的發(fā)情鑒定。因此，在生產實踐中，波爾山羊的人工授精更容易推廣。例如在法國，20世紀80年代采用人工授精的山羊數量增加了4倍。由于精清與富含牛奶/卵黃的稀釋液之間的相互作用會對精子產生毒害作用，所以山羊精液的冷藏和冷凍保存都存在一定困難。

1采精和精液保存

波爾山羊通常用假陰道采精，也可通過電刺激采精，但波爾山羊對電刺激的耐受性不如綿羊，電刺激后精清組分改變，可降低精子耐受冷凍保存的能力。公山羊是季節(jié)性繁殖的動物，春夏兩季精子質量和數量有所降低。

1.1精清對精液保存的影響

波爾山羊精液保存的主要問題是，在含有牛奶和卵黃的稀釋液中，精清的組分可能產生損傷精子活力的物質。精清中與卵黃作用后產生有毒物質的成分主要是由尿道球腺分泌的卵黃凝固酶(EYCE)，這種酶可以凝結卵黃，并將卵黃磷脂水解為脂肪酸及具有殺精子作用的溶血卵磷脂。EYCE主要通過磷脂酶A發(fā)揮作用，但其也含有脂肪酶。尿道球腺的分泌物也可與牛奶產生毒性作用。分子量(55～60)×103的糖蛋白脂肪酶，現命名為BUSgp60，其結構與胰腺的脂肪酶PLRP2相似，能使牛奶中甘油三酯產生油酸。因此在稀釋液中可使用脫脂奶，其效果取決于奶中殘余的脂肪量。有研究表明，EYCE和BUSgp60是同種蛋白質，這一結果還有待證實。

總之，波爾山羊精液的稀釋液要么使用脫脂奶，以保證精子充分存活；要么在加入卵黃稀釋液前除去精清。除去精清的辦法是將精液用Kerbs-Ringer磷酸緩沖液稀釋后離心。

1.2液態(tài)精液

波爾山羊人工授精中可以采用兩種策略使用液態(tài)精液。

簡單稀釋液冷藏精液：用簡單稀釋液洗滌除去精清，用卵黃-檸檬酸稀釋液或卵黃-Tris-果糖稀釋液稀釋精液，于5℃保存?zhèn)溆?。除去精清耗時而且導致大量精子損失，因此可使用脫脂奶稀釋液稀釋后在5℃保存。精子在脫脂奶稀釋液中的有效壽命相對較短(大約12 h)，但脫脂奶稀釋液的使用仍很廣泛。低濃度的卵黃含量(約2.5%)毒性作用相對較小，所以葡萄糖-檸檬酸或Tris-果糖稀釋液中加入低濃度卵黃也可有效用于精液的稀釋保存。

室溫稀釋保存：若精子溫度未降到15℃以下，則不需要加入卵黃防止冷休克。脫脂奶和以黃豆脂為基礎的稀釋液能在15～22℃下使精子活力維持24 h左右。

1.3冷凍保存

冷凍保存波爾山羊精液時，卵黃稀釋液比脫脂奶稀釋液使用更為廣泛。最廣泛使用的稀釋液是脫脂奶粉-果糖和Tris-果糖-檸檬酸-卵黃稀釋液。卵黃在稀釋液中含量低于2%時，可采用卵黃稀釋液而無需去除精清。甘油是最有效的冷凍保護劑，而且可以分一次或兩次添加。研究認為，對已清洗過的精子，最初用不含甘油的卵黃-檸檬酸稀釋液稀釋，精液溫度降到4℃時，再加入含有14%甘油的稀釋液。如果精子未經洗滌，甘油應在30℃時一次加入。

采用子宮頸管內輸精時，同樣存在與綿羊相似的精子數量和輸精體積之間的比例問題。建議：子宮頸管內輸精時先將高濃度的稀釋液進行稀釋(卵黃的最終濃度不低于2%)以增加稀釋液的體積，采用一步法稀釋，稀釋比例為1∶1～1∶4。

精液可以在干冰表面凍為顆粒，或用液氮熏蒸法和程控冷凍儀中冷凍制備細管凍精。顆粒凍精解凍后精子的復蘇率較高，解凍方法改進后，細管凍精也可以得到滿意的復蘇率，而且細管的使用比顆粒方便，已逐漸成為精液冷凍保存的首選方法。盡管波爾公羊個體間差異較大，但冷凍解凍后輸入子宮的活精子數達到5×106時受胎率與自然配種時相當。精子數量和繁殖效率之間的關系尚不清楚，大規(guī)模的研究結果很少。但專家建議，每次輸精使用(1～1.25)×108精子，但也有學者建議，由于波爾山羊輸精精子數與綿羊相當，解凍方法也與綿羊凍精一致。

2輸精

鮮精直接輸精時可采用陰道內輸精，但稀釋精液或冷凍精液陰道內輸精效果很不理想，因此主要采用子宮頸管內輸精或腹腔鏡子宮內輸精。子宮頸管內輸精是最常用的方法，尤其是在規(guī)模化養(yǎng)殖的羊群。因為波爾山羊子宮頸管比綿羊更易穿過，所以大量的精子可以穿過子宮頸管進入子宮內。雖然可以使輸精導管穿過子宮頸管而直接將精液輸入子宮內，但許多技術人員更愿意在子宮頸管里存留一些精液，以免子宮內輸精精液僅進入一側子宮角內。然而，有學者認為，子宮頸管內輸精失敗率高，一是因為輸精導管插入子宮頸管的深度不易掌握，二是輸精過程中可能損傷子宮頸管或子宮。輸精深度與受胎率有密切關系，子宮內輸精受胎率最高，輸精位置越靠近子宮頸管后部，受胎的機會越少。熟練的操作是提高受胎率的關鍵因素。腹腔鏡子宮內輸精的程序與在綿羊一樣。與子宮頸管內輸精相比，這一方法需要的精子濃度較低(約2×107)，而且可獲得較高的受胎率，但對技術要求高。

收稿日期：2016-03-28

作者簡介：張年江(1973-)，男，本科，畜牧師。

中圖分類號：S827.3

文獻標識碼：B

文章編號：1005-2739(2016)04-0022-02