根據(jù)中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間修改及驗(yàn)證顯微鏡復(fù)檢規(guī)則

王　鳳，王　貞，王衍晶，張風(fēng)華

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116011)

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·論著·

根據(jù)中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間修改及驗(yàn)證顯微鏡復(fù)檢規(guī)則

王鳳，王貞，王衍晶△，張風(fēng)華

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116011)

摘要:目的根據(jù)中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間的調(diào)整修改并驗(yàn)證血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則，探討其是否適合該院實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析的需求。方法回顧性分析根據(jù)中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間的調(diào)整，修改該院實(shí)驗(yàn)室Sysmex XE-5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則并比較規(guī)則修改前后推片復(fù)檢率、鏡檢血小板聚集陽性率的不同。結(jié)果血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則修改前血小板推片復(fù)檢率為1.94%，復(fù)檢規(guī)則修改后血小板推片復(fù)檢率為3.99%，復(fù)檢規(guī)則修改后推片復(fù)檢率顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論根據(jù)新版中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間，修改該院實(shí)驗(yàn)室血小板復(fù)檢規(guī)則，能提高顯微鏡復(fù)檢率，有效避免血小板假性減少的漏檢，適合該實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析的需求。

關(guān)鍵詞:血細(xì)胞分析儀；血小板聚集；血小板假性減少

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板，由于受到檢測(cè)原理及樣本等各種不確定因素的限制，其計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性備受關(guān)注[1]。EDTA依賴性血小板聚集等因素常導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性減少，若經(jīng)顯微鏡復(fù)檢就會(huì)得到及時(shí)矯正。因此，合理的血小板復(fù)檢規(guī)則在血細(xì)胞分析中至關(guān)重要。本院實(shí)驗(yàn)室參考國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專家組和中國(guó)血液學(xué)復(fù)檢專家組制定的標(biāo)準(zhǔn)[2-3],結(jié)合本院專家建議，曾制定過血小板復(fù)檢規(guī)則并嚴(yán)格執(zhí)行。原衛(wèi)生部頒布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定了中國(guó)人群血小板參考區(qū)間，本院實(shí)驗(yàn)室根據(jù)新版行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)修改了血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則，本研究試圖探討修訂后的血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則是否適合本院實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析的需求。

1材料與方法

1.1樣本來源收集大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2013年3～12月門診和住院患者的EDTA-K2抗凝的血常規(guī)樣本。復(fù)檢規(guī)則修改前以血小板小于80×109/L的樣本設(shè)置為鏡檢規(guī)則，2013年3月1日至4月30日的血常規(guī)樣本總數(shù)為23 737例；修改后以血小板小于125×109/L的樣本設(shè)置為鏡檢規(guī)則，2013年9月1日至10月31日的血常規(guī)樣本總數(shù)為21 771例。

1.2儀器與試劑Sysmex XE-5000血液分析儀、SP-1000i自動(dòng)推片染片機(jī)及配套試劑由希森美康公司提供；雙目顯微鏡由日本Olympus公司提供；瑞氏染液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供；EDTA-K2真空抗凝管由陽普醫(yī)療公司提供。

1.3方法

1.3.1儀器的校準(zhǔn)與調(diào)試嚴(yán)格按照Sysmex XE-5000操作手冊(cè)進(jìn)行質(zhì)控及樣本檢測(cè)。儀器按要求進(jìn)行日常保養(yǎng)及維護(hù)，每天采用原廠配套高、中、低值質(zhì)控物對(duì)儀器進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)，確保儀器處于正常工作狀態(tài)，儀器性能符合規(guī)定要求。

1.3.2顯微鏡復(fù)檢SP-1000i自動(dòng)推片染片機(jī)制成厚薄均勻，頭、體、尾分明的血涂片。依據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[4]，在顯微鏡油鏡下選擇血涂片體、尾交界處，按城垛狀移動(dòng)觀察有無血小板聚集現(xiàn)象。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，樣本率的檢驗(yàn)采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則修改前后推片復(fù)檢率及血小板聚集陽性率比較2013年3月1日至4月30日的血常規(guī)樣本總數(shù)為23 737例，根據(jù)鏡檢規(guī)則其推片例數(shù)為461例，推片復(fù)檢率為1.94%,血小板聚集例數(shù)22例，陽性率為4.77%。血小板復(fù)檢檢規(guī)則修改后，2013年9月1日至10月31日的血常規(guī)樣本總數(shù)為21 771例，推片例數(shù)為868例，推片復(fù)檢率為3.99%，血小板聚集例數(shù)42例，陽性率為4.84%。兩者推片復(fù)檢率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血小板聚集陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2血小板復(fù)檢規(guī)則修改后不同時(shí)間段血小板聚集陽性率比較血小板復(fù)檢規(guī)則修改后，2013年9月1日至10月31日推片例數(shù)為868例，陽性例數(shù)為42例，血小板聚集陽性率4.84%；2013年9月15日至12月20日推片例數(shù)為1 832例，陽性例數(shù)為107例，血小板聚集陽性率5.84%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3血小板復(fù)檢規(guī)則修改后不同數(shù)值段血小板聚集陽性率比較復(fù)檢規(guī)則修改后，2013年9月15日至12月20日血小板為小于80×109/L的樣本中，推片例數(shù)為728例，血小板聚集例數(shù)為41例，陽性率為5.63%；血小板為(80～125)×109/L的樣本中，推片例數(shù)為1 104例，血小板聚集例數(shù)為66例，陽性率為5.98%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4血小板減少患者主要分布科室情況血小板減少患者主要分布在血液風(fēng)濕免疫科、介入治療科、腎內(nèi)科、消化科、心內(nèi)科和神經(jīng)內(nèi)科等。其中以血液風(fēng)濕免疫科(20.20%)復(fù)檢率最高，而鏡檢血小板聚集陽性率以血液風(fēng)濕免疫科(1.9%)最低，以健康體檢部(20.5%)鏡檢陽性率最高。

3討論

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板的原理目前多為經(jīng)典的電阻抗法。但該法的影響因素較多，計(jì)數(shù)存在誤差。為了確保血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，Sysmex XE系列血細(xì)胞分析儀將電阻抗法和流式細(xì)胞術(shù)激光散射法有效地結(jié)合起來對(duì)血小板進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定。根據(jù)電阻抗計(jì)數(shù)原理，血細(xì)胞計(jì)數(shù)有一定的計(jì)數(shù)閾，血小板計(jì)數(shù)閾一般在血小板體積為2～30 fL，當(dāng)血小板體積大于30 fL或小于2 fL時(shí)，這些血小板將不被納入血小板計(jì)數(shù)范圍，使血小板計(jì)數(shù)假性減低[5]；并且計(jì)數(shù)紅細(xì)胞和血小板都是在同一計(jì)數(shù)池內(nèi)，當(dāng)存在小紅細(xì)胞及其碎片時(shí)，由于其體積與血小板相似，儀器將部分小紅細(xì)胞及其碎片誤計(jì)為血小板而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高[6]。此類情況儀器將顯示其血小板直方圖的異常并報(bào)警。正常血小板直方圖通常主要集中在2～15 fL，一般在25～30 fL的某一點(diǎn)與橫坐標(biāo)重合,直方圖是一條呈偏態(tài)分布的單峰光滑曲線。當(dāng)大血小板增多時(shí)，曲線峰會(huì)右移，在大于30 fL的某一點(diǎn)與橫坐標(biāo)重合。當(dāng)存在小紅細(xì)胞的干擾，曲線峰的右側(cè)抬起并且尾部上翹。當(dāng)存在聚集的血小板時(shí)，曲線峰會(huì)降低，如果以小于20 fL血小板聚集為主，曲線峰的右側(cè)會(huì)抬起并且呈現(xiàn)拖尾狀，不與橫坐標(biāo)重合；如果以大于20 fL血小板聚集為主，曲線峰會(huì)變得低平右側(cè)無明顯抬起，并且，在白細(xì)胞直方圖上35 fL左右會(huì)有一個(gè)小峰出現(xiàn)[7]。通過血小板直方圖的觀察，可以初步了解血小板計(jì)數(shù)減少或增多的大致原因。Sysmex XE-5000的光學(xué)法測(cè)定血小板是在測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞的通道，通過反映細(xì)胞數(shù)量和表面體積的低角度散射光和反映核酸濃度的高角度散射熒光識(shí)別血小板。血小板內(nèi)含有少量的核酸，而成熟的紅細(xì)胞內(nèi)沒有核酸，所以血小板高角度散射光的強(qiáng)度比成熟紅細(xì)胞強(qiáng)，因此可以很好地將血小板和成熟紅細(xì)胞在散點(diǎn)圖上有效區(qū)分[8]。用光學(xué)法測(cè)定血小板可初步糾正因大血小板或巨大血小板、小紅細(xì)胞以及破碎的紅細(xì)胞等引起的血小板假性減少或增高，再經(jīng)過血涂片顯微鏡復(fù)檢，觀察血小板大小、形態(tài)、數(shù)量及是否存在干擾及有無血小板聚集等現(xiàn)象[9]，與直方圖相對(duì)應(yīng)以此驗(yàn)證并及時(shí)糾正血小板數(shù)量。

原衛(wèi)生部于2012年12月25日頒布了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 405-2012《血細(xì)胞分析參考區(qū)間》，明確規(guī)定中國(guó)人群血小板參考區(qū)間為(125～350)×109/L，且要求大型三甲醫(yī)院必須盡快按照文件規(guī)定修改血細(xì)胞分析的參考區(qū)間。本實(shí)驗(yàn)室在行標(biāo)規(guī)定之前已制定血細(xì)胞分析的鏡檢規(guī)則，其中血小板小于80×109/L即進(jìn)行推片復(fù)檢，在此行標(biāo)基礎(chǔ)上，2013年5月份將血小板復(fù)檢界限值提升到125×109/L。

本文對(duì)修改前后鏡檢陽性率等的回顧性比較分析發(fā)現(xiàn)，血小板復(fù)檢規(guī)則修改后因血小板臨界值的改變，推片例數(shù)明顯增多，推片比例明顯較修改前增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但血小板聚集陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明盡管閱片量增大，但真正發(fā)現(xiàn)因血小板聚集引起的假性血小板減少并未明顯增多，絕大多數(shù)患者血小板減少是真性減少?？紤]復(fù)檢規(guī)則修改后工作人員的適應(yīng)能力和執(zhí)行情況，收集修改初期(2013年9月1日至10月31日)及修改后長(zhǎng)期(2013年9月15日至12月20日)樣本比較分析，發(fā)現(xiàn)復(fù)檢陽性率間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明顯微鏡復(fù)檢崗位人員已明確修改后復(fù)檢規(guī)則，執(zhí)行情況良好。

本研究血小板小于80×109/L與血小板為(80～125)×109/L的血小板聚集陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明血小板假性減少的患者血小板數(shù)分布區(qū)間很廣泛，進(jìn)一步證明了根據(jù)新版行標(biāo)修改血小板復(fù)檢規(guī)則的必要性。

對(duì)血小板減少患者的分布科室情況分析，發(fā)現(xiàn)主要來源于血液風(fēng)濕免疫科，占鏡檢樣本的20.20%，但鏡檢后發(fā)現(xiàn)血小板聚集的陽性率卻最低，僅為1.9%，這說明血液風(fēng)濕免疫科的患者血小板減少多為真性減少，血小板假性減少的情況很少出現(xiàn)。相反，健康體檢部及其他科室鏡下血小板聚集陽性率較高，說明這些科室尤其是健康體檢人群存在血小板假性減少的現(xiàn)象，在平時(shí)血細(xì)胞復(fù)檢時(shí)更應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行血小板鏡檢規(guī)則，避免對(duì)血小板假性減少的漏檢，引起臨床誤診誤治。

通過本研究，筆者認(rèn)為當(dāng)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少時(shí)，尤其是初診患者，一定要先排除抽血方法不當(dāng)引起的凝集，再用儀器復(fù)查并同時(shí)做血涂片染色顯微鏡復(fù)檢，細(xì)致觀察是否有血小板之間彼此聚集成片的現(xiàn)象。當(dāng)鏡檢發(fā)現(xiàn)存在血小板大小異常時(shí)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)激光散射熒光染色法進(jìn)行血小板檢測(cè)，此方法還可以有效避免小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片對(duì)血小板測(cè)定的干擾[10]。對(duì)因EDTA依賴性血小板聚集等引起的血小板假性減少，采用更換抗凝劑(用枸櫞酸鈉)抗凝或者是采用零添加抗凝劑試管，在儀器旁采血，選擇手動(dòng)模式快速檢測(cè)來糾正。必要時(shí)也采用經(jīng)典的計(jì)數(shù)盤人工顯微鏡計(jì)數(shù)方法，來準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板數(shù)量[4]。

綜上所述，根據(jù)中國(guó)人群血小板生物參考區(qū)間，將血小板復(fù)檢規(guī)則由血小板小于80×109/L修改為血小板小于125×109/L是正確的。提高的復(fù)檢率，適合本院實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析的需求。修定的血小板復(fù)檢規(guī)則在提高復(fù)檢率的同時(shí)，保證了檢驗(yàn)結(jié)果的正確性和可靠性。希望通過全新的血小板顯微鏡復(fù)檢規(guī)則，將更加準(zhǔn)確可信的檢測(cè)結(jié)果反饋給臨床，更好地指導(dǎo)臨床診斷及治療。

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According to the platelet of Chinese people biological reference interval change the microscope review rules

WangFeng,WangZhen,WangYanJing△,ZhangFenghua

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China)

Abstract:ObjectiveTo discuss change the platelet counts by microscope rule by the platelet of Chinese people biological reference range in this laboratory blood analysis requirement.MethodsRetrospectively analyzed according to the platelet of Chinese people biological reference range change the lab Sysmex XE-5000 automatic blood cell analyzer platelet review rules.Change the platelet counts by microscope rules,the differences between the microscopy rate and the microscopic examination of the platelet aggregation rate.ResultsBefore change the platelet counts by microscope rules the microscopy rate was 1.94%.After change the platelet counts by microscope rules the microscopy rate was 3.99%,after change the platelet counts by microscope rules pushing blood piece rate increased significantly,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionAccording to the platelet of Chinese people biological reference range change the lab platelet review rules.We can increase the rate of microscopy,and effectively avoid the pseudothrombocytopenia and accurately guide clinical treatment.

Key words:hematology analyzer;platelet aggregation;pseudothrombocytopenia

(收稿日期：2016-01-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.014

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1190-03

作者簡(jiǎn)介：王鳳，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)及臨床血液檢驗(yàn)研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：15541192550@163.com。