大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化及意義

張朝霞，劉智屏，肖智輝，陳俐麗，李博

(暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院兒科，廣東 深圳 518020)

大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化及意義

張朝霞，劉智屏，肖智輝，陳俐麗，李博

(暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院兒科，廣東 深圳 518020)

目的 研究大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化及其臨床意義。方法選擇2014年9月至2015年9月在我院兒科接受診治的大葉性肺炎患兒64例作為觀察組，另選同期在我院進行健康體檢的健康兒童60例作為對照組，比較兩組受檢者誘導(dǎo)痰內(nèi)的T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)，炎性細(xì)胞因子水平(IL-6、IL-8及TNF-α)，以及T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平(IFN-γ、TGF-β及IL-17A)。結(jié)果觀察組患兒的誘導(dǎo)痰內(nèi)的CD3+(67.84±8.62)%、CD4+(46.08±6.93)%及CD4+/CD8+(2.07±0.21)均較對照組的(55.37±6.25)%、(30.82±5.07)%、(1.40±0.17)明顯更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；兩組受檢者的CD8+(24.23±3.06)%及(24.63± 3.62)%比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組患兒誘導(dǎo)痰內(nèi)的IL-6(358.27±29.13)ng/L、IL-8(2.13±0.07)ng/L及TNF-α(3.08±0.92)ng/L水平均較對照組的(150.24±32.28)ng/L、(0.58±0.02)ng/L、(0.39±0.23)ng/L明顯更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組患兒誘導(dǎo)痰內(nèi)IFN-γ(5.19±2.63)×10-4及TGF-β(3.31±1.09)×10-2顯著低于對照組的(23.42±3.92)×10-4及(6.18±2.11)×10-2，而IL-17A(3.46±1.24)×10-5顯著高于對照組的(2.94±1.30)×10-5，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中的T細(xì)胞亞群以及細(xì)胞因子均呈現(xiàn)出異常變化，對此類指標(biāo)進行監(jiān)測有助于臨床的診斷與治療。

大葉性肺炎；誘導(dǎo)痰；T細(xì)胞亞群；細(xì)胞因子

大葉性肺炎屬于細(xì)菌性肺炎，是小兒肺炎的常見類型，主要致病菌為肺炎雙球菌，其病理表現(xiàn)呈大葉性分布。由于大葉性肺炎通常起病較急，且以高熱、胸痛等為主要癥狀，嚴(yán)重者會出現(xiàn)驚厥、昏迷，甚至休克等，對患兒健康及生命均造成嚴(yán)重威脅，需予以高度重視。臨床通常將免疫功能出現(xiàn)失衡作為導(dǎo)致大葉性肺炎發(fā)病的一項重要因素。據(jù)報道，在該病發(fā)病過程中細(xì)胞免疫也參與其中[1-2]。在對大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，其T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子等均出現(xiàn)明顯失衡現(xiàn)象，進一步證實，其在該病發(fā)病機制中起到一定作用。有學(xué)者提出，誘導(dǎo)痰相關(guān)檢測結(jié)果能夠直接反映出患兒病理變化特點，明確大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子等變化及意義，對該病診斷、治療及預(yù)后評估等均起到有效提示作用[3-4]。本文通過研究分析大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化及意義，旨在更好地輔助臨床治療，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年9月至2015年9月在我院兒科接受診治的大葉性肺炎患兒64例作為觀察組，男性38例，女性26例；年齡8個月～12歲，平均(5.24±0.27)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患兒的臨床癥狀及體征均符合大葉性肺炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過實驗室檢查及X線片診斷證實；(2)初診患兒；(3)年齡≥8個月；(4)近1個月內(nèi)未患有其他過敏或免疫性疾病及慢性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他種類的肺炎患兒；(2)存在嚴(yán)重的心、肝、腎等臟器的功能性不全；(3)患兒病歷資料數(shù)據(jù)缺失。另選同期在醫(yī)院進行正常健康體檢的兒童60例作為對照組，男性40例，女性20例；年齡8個月～11歲，平均(5.18±0.29)歲。兩組兒童的性別及年齡等相關(guān)資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究已獲得受試者家屬簽字知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 誘導(dǎo)痰炎性細(xì)胞因子的檢測 在患兒家屬的知情同意下通過超聲霧化并吸入高滲鹽水的方式對兩組受試者實施痰誘導(dǎo)，提取樣本后，通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法對白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8，IL-8)及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)實施檢測，相關(guān)試劑盒均產(chǎn)自深圳的晶美公司，操作時需嚴(yán)格遵照試劑盒的說明書進行。

1.2.2 誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群的檢測 利用貝克曼流式細(xì)胞儀及儀器自帶試劑盒對誘導(dǎo)痰內(nèi)的CD3+、CD4+及CD8+進行檢測，操作時需嚴(yán)格按試劑盒的說明書進行。

1.2.3 誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平的檢測 通過實時熒光定量PCR法測定干擾素-γ(interferon，IFN-γ)，轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor，TGF-β)，以及白細(xì)胞介素-17A(interleukin-17A，IL-17A)。檢測過程中所用試劑盒選用產(chǎn)自QIAGEN公司的SYBRGreen試劑。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組誘導(dǎo)痰內(nèi)的T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)，炎性細(xì)胞因子水平(IL-6、IL-8及TNF-α)，以及T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平(IFN-γ、TGF-β及IL-17A)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)的T細(xì)胞亞群比較 觀察組患者誘導(dǎo)痰內(nèi)的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均較對照組明顯更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但兩組受試者的CD8+比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)的T細(xì)胞亞群比較(±s)

表1 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)的T細(xì)胞亞群比較(±s)

組別CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值67.84±8.62 55.37±6.25 9.170 0.000 46.08±6.93 30.82±5.07 13.917 0.000 24.23±3.06 24.63±3.62 0.666 0.507 2.07±0.21 1.40±0.17 19.449 0.000

2.2 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)炎性細(xì)胞因子水平比較 觀察組患者誘導(dǎo)痰內(nèi)的IL-6、IL-8及TNF-α水平均較對照組明顯更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)炎性細(xì)胞因子水平比較(±s)

表2 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)炎性細(xì)胞因子水平比較(±s)

組別IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)TNF-α(ng/L)觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值358.27±29.13 150.24±32.28 37.716 0.000 2.13±0.07 0.58±0.02 165.273 0.000 3.08±0.92 0.39±0.23 22.008 0.024

2.3 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平比較 觀察組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)IFN-γ及TGF-β顯著低于對照組，而IL-17A顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平比較(±s)

表3 兩組受試者誘導(dǎo)痰內(nèi)T細(xì)胞亞群有關(guān)細(xì)胞因子水平比較(±s)

組別IFN-γ(×10-4)TGF-β(×10-2)IL-17A(×10-5)觀察組(n=64)對照組(n=60) t值P值5.19±2.63 23.42±3.92 30.583 0.000 3.31±1.09 6.18±2.11 9.602 0.000 3.46±1.24 2.94±1.30 2.280 0.024

3 討 論

大葉性肺炎是指因肺炎鏈球菌等細(xì)菌感染導(dǎo)致的一個肺葉或者一個肺段區(qū)域內(nèi)發(fā)生的肺泡炎，其為臨床典型的急性肺器官實質(zhì)性炎癥，以冬春季節(jié)多見。該病好發(fā)于3歲及以上的兒童，主要原因是小兒呼吸道的防御功能較弱，易遭受外界細(xì)菌入侵并引起感染。當(dāng)細(xì)菌侵襲患兒肺泡時，將以變態(tài)反應(yīng)方式提升肺泡壁中的毛細(xì)血管自身通透性，進而使得漿液和纖維素滲出。細(xì)菌在含有豐富蛋白的滲出物中可以快速大量繁殖，并經(jīng)肺泡間孔和細(xì)支氣管向相鄰的肺組織繼續(xù)蔓延，最終波及一個肺段甚至整個肺葉[5]。臨床對于大葉性肺炎治療的傳統(tǒng)方式以抗菌素治療為主。但是，隨著免疫學(xué)發(fā)展以及不斷深入的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)致病菌感染患兒肺部后，與患兒免疫系統(tǒng)之間會發(fā)生作用，并使其免疫機能失常[6-7]。因此，在應(yīng)用抗感染類藥物治療大葉性患兒的同時，及時對其誘導(dǎo)痰進行分析，了解患兒機體內(nèi)T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的表達情況，必要時應(yīng)用針對性的免疫調(diào)節(jié)類藥物，可幫助提高臨床療效。

本文研究發(fā)現(xiàn)，觀察組誘導(dǎo)痰內(nèi)的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均較對照組明顯更高(P＜0.05)，但兩組CD8+比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。符合Nemoto等[8]和袁紅瑛等[9]的報道結(jié)果，提示患有大葉性肺炎的患兒存在較為明顯的細(xì)胞免疫功能紊亂。CD3+、CD4+雙陽性細(xì)胞群是具有誘導(dǎo)輔助功能的一類T淋巴細(xì)胞的重要亞群，其可對免疫細(xì)胞產(chǎn)生輔助誘導(dǎo)作用。其中CD4+降低會造成機體免疫力下降，而其含量上升則會導(dǎo)致免疫機能亢進。CD3+、CD8+雙陽性細(xì)胞群則屬于T淋巴細(xì)胞的一類抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞，兩者均具有特異性功能，可殺死靶細(xì)胞，并起到抗病毒以及抗腫瘤的作用。

本文還發(fā)現(xiàn)，觀察組誘導(dǎo)痰內(nèi)的IL-6、IL-8及TNF-α水平均較對照組明顯更高，這說明大葉性肺炎患兒存在一定的炎癥反應(yīng)癥狀。且觀察組誘導(dǎo)痰內(nèi)IFN-γ及TGF-β顯著低于對照組，而IL-17A顯著高于對照組，與Sharma等[10]和朱曉華等[11]的報道相符。提示哮喘患兒機體內(nèi)的免疫平衡已被打破。究其原因，T細(xì)胞在細(xì)胞免疫中十分關(guān)鍵，其屬于一類重要的免疫細(xì)胞，起到調(diào)節(jié)作用。其還包含多種亞群和類型，不同類型T細(xì)胞的表型和功能均存在區(qū)別。Th細(xì)胞受到抗原刺激后會生成Th1和Th2，其中Th1通常和對抗細(xì)胞內(nèi)部的細(xì)菌免疫反應(yīng)有關(guān)，與之相關(guān)的細(xì)胞因子包含IFN-γ。通常情況下，Th1和Th2兩者之間存在交叉抑制和互相調(diào)節(jié)的關(guān)系，并保持動態(tài)平衡，而當(dāng)該平衡被打破，則會引起機體發(fā)生病理變化，此種變化常與感染類疾病以及免疫性疾病息息相關(guān)。Th17為新型Th細(xì)胞，可分泌出IL-17A等類型的細(xì)胞因子，起到促炎性反應(yīng)的功能，利于成纖維細(xì)胞以及上皮細(xì)胞大量合成并分泌趨化因子以及炎性細(xì)胞因子，如TNF-α和IL-8等[12]。IL-6和局部感染相關(guān)，其能夠發(fā)揮較好的抗病毒活性。IL-8為趨化性細(xì)胞因子，具有利于炎癥細(xì)胞發(fā)生趨化作用的功能。而TNF-α也能較好地反饋患者機體的炎癥反應(yīng)。由于大葉性肺炎患兒機體內(nèi)炎癥反應(yīng)活動較為強烈，因此上述指標(biāo)水平均可呈現(xiàn)出程度各異的異常變化。這在胡曉艷等[13]和Paats等[14]的報道中也可發(fā)現(xiàn)類似結(jié)論。

綜上所述，大葉性肺炎患兒誘導(dǎo)痰中的T細(xì)胞亞群以及細(xì)胞因子均呈現(xiàn)出異常變化，對此類指標(biāo)進行監(jiān)測有助于臨床的診斷與治療。

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Change and significance of T lymphocyte subsets and cell factor in induced sputum in children with lobar pneumonia.

ZHANG Zhao-xia,LIU Zhi-ping,XIAO Zhi-hui,CHEN Li-li,LI Bo.Department of Pediatrics,the Shenzhen People's Hospital,the Second Clinical Medical College of Jinan University,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the change and clinical significance of T lymphocyte subsets and cell factor in induced sputum in children of lobar pneumonia.MethodsFrom September 2014 to September 2015,64 children with lobar pneumonia in Department of Pediatrics in our hospital were selected as the observation group,and 60 healthy children were enrolled as the control group.T lymphocyte subsets(CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+),the levels of cytokines(IL-6,IL-8 and TNF-α),and cytokine levels(IFN-γ,TGF-β and IL-17A)in induced sputum were compared between the two groups.ResultsCD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group were(67.84±8.62)%,(46.08± 6.93)%,(2.07±0.21),which were significantly higher than those in the control group of(55.37±6.25)%,(30.82±5.07)%, (1.40±0.17),and the differences were statistically significant(P＜0.05).CD8+showed no statistically significant difference between the two groups,(24.23±3.06)%vs(24.63±3.62)%,P＞0.05.The levels of IL-6,IL-8 and TNF-α in the observation group were(358.27±29.13)ng/L,(2.13±0.07)ng/L(3.08±0.92)ng/L,which were significantly higher than those in the control group of(150.24±32.28)ng/L,(0.58±0.02)ng/L,(0.39±0.23)ng/L,with statistically significant difference(P＜0.05).IFN-γ and TGF-β in the observation group were(5.19±2.63)×10-4and(3.31±1.09)×10-2,which were significantly lower than those in the control group of(23.42±3.92)×10-4and(6.18±2.11)×10-2,while the IL-17A was significantly higher in the observation group than the control group,(3.46±1.24)×10-5vs(2.94±1.30)×10-5,with statistically significant difference(P＜0.05).ConclusionIn the induced sputum of children with lobar pneumonia,T cell subsets and cytokines show abnormal changes,and monitoring of the indicators is helpful to clinical diagnosis and treatment.

Lobar pneumonia;Induced sputum;T cell subsets;Cytokines

R725.6

A

1003—6350（2016）22—3658—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.22.016

2016-04-13)

張朝霞。E-mail：2578604036@qq.com