體外受精中1PN及0PN(2PB)胚胎發(fā)育潛能及影響因素分析

張亞楠，殷寶莉，張翠蓮，韋多，郝好英，宋小兵，謝娟珂

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究所/河南省人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究所，鄭州　450003)

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體外受精中1PN及0PN(2PB)胚胎發(fā)育潛能及影響因素分析

張亞楠，殷寶莉，張翠蓮*，韋多，郝好英，宋小兵，謝娟珂

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究所/河南省人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)研究所，鄭州450003)

【摘要】目的初步探討體外受精-胚胎移植周期中1PN及0PN(2PB)胚胎形成的影響因素和發(fā)育潛能，以探尋提高卵母細(xì)胞利用率的可行性方法。方法對787個(gè)IVF周期和298個(gè)ICSI周期患者授精后18～20 h觀察到的1PN及0PN(2PB)胚胎繼續(xù)進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察其原核及卵裂情況，序貫培養(yǎng)至D6，觀察囊胚形成情況；并回顧性分析這些患者的臨床資料，研究1PN及0PN(2PB)胚胎形成的影響因素。結(jié)果(1)1PN及0PN(2PB)胚胎可卵裂并形成囊胚，但卵裂率(分別為90.16%和88.11%)和囊胚形成率(17.09%和30.03%)均顯著低于2PN胚胎(分別為98.40%和45.71%)(P均<0.05)；(2)1PN胚胎的形成隨患者的年齡、體外受精方式及獲卵數(shù)的不同而不同，而0PN(2PB)胚胎的形成只隨患者年齡不同而異(P<0.05)；(3)經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，1PN和0PN(2PB)胚胎的形成與患者選擇的受精方式、MII卵數(shù)、2PN胚胎數(shù)相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)內(nèi)分泌水平及獲卵數(shù)無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論患者的體外受精方式、獲得的MII卵數(shù)以及受精后的2PN胚胎數(shù)可能影響到1PN和0PN(2PB)胚胎的形成；1PN及0PN(2PB)胚胎有一定發(fā)育潛能，但較2PN胚胎低；在行輔助生殖技術(shù)助孕過程中，應(yīng)綜合考慮各種影響因素，以降低1PN和0PN(2PB)胚胎的發(fā)生率，提高卵母細(xì)胞的臨床利用率。

【關(guān)鍵詞】體外受精；單原核(1PN)胚胎；囊胚；發(fā)育潛能；Logistic回歸

(JReprodMed2016，25(1)：32-38)

在人類體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術(shù)中，常于授精后16～20 h內(nèi)通過光學(xué)顯微鏡對胚胎原核數(shù)目進(jìn)行觀察及評分，正常受精的判斷標(biāo)準(zhǔn)為觀察到胚胎內(nèi)存在明確的2PN(pronucleus)及2PB(polar body)[1]。然而，在胚胎培養(yǎng)過程中，常有相對較多的異常受精情況出現(xiàn)，其中1PN的發(fā)生率約為2%～5%[2]。在臨床治療過程中，1PN及0PN(2PB)胚胎通常被視為異常受精胚胎，與多原核胚胎及發(fā)育停滯的2PN胚胎一起作為廢棄胚胎被銷毀。事實(shí)上，部分1PN及0PN(2PB)胚胎是正常受精的胚胎，只是因?yàn)殄e(cuò)過了最佳的觀察時(shí)機(jī)[3]，被誤認(rèn)為是異常受精，如果將這類胚胎全部銷毀，會造成胚胎資源的浪費(fèi)。

本研究回顧性分析787個(gè)IVF周期和298個(gè)ICSI周期患者的1PN及0PN(2PB)胚胎的繼續(xù)培養(yǎng)情況，探討這類“異常受精”胚胎的發(fā)育潛能，同時(shí)分析患者的臨床資料，研究1PN及0PN(2PB)胚胎形成的影響因素，為降低1PN及0PN(2PB)胚胎的發(fā)生率，提高卵母細(xì)胞利用率提供指導(dǎo)。

資料與方法

一、臨床資料

選擇2014年7月28日至2014年10月31日就診于河南省人民醫(yī)院生殖中心的不孕癥夫婦的臨床資料。

納入標(biāo)準(zhǔn)：基礎(chǔ)內(nèi)分泌水平正常；≤3個(gè)治療周期；HBV及HIV陰性。

排除標(biāo)準(zhǔn)：生殖泌尿系統(tǒng)急性感染或性傳播疾??；嚴(yán)重的遺傳、軀體疾病或精神疾患；吸毒等不良嗜好；獲卵數(shù)<1個(gè)；短時(shí)受精聯(lián)合早期補(bǔ)救ICSI(Re-ICSI)。

本研究共包括787個(gè)IVF周期和298個(gè)ICSI周期的不孕癥夫婦的臨床資料。

二、患者診療方法回顧

1.促排卵方案及卵母細(xì)胞的采集與處理：接受IVF-ET治療的不孕癥患者采用本中心常規(guī)方案[4]進(jìn)行控制性促排卵，當(dāng)≥3個(gè)卵泡直徑達(dá)18 mm時(shí)，結(jié)合血清雌二醇(E2)、孕酮(P)值，適時(shí)予以HCG(麗珠制藥)5 000～10 000 U肌肉注射；36 h后在陰道超聲引導(dǎo)下，使用18 G取卵針(Cook，瑞典)采集卵冠丘復(fù)合體(OCCC)，將其于加有G-MOPS緩沖液(Vitrolife，瑞典)的培養(yǎng)皿中洗滌兩次后，轉(zhuǎn)入含G-IVF-PLUS培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞典)的培養(yǎng)皿中，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)6% CO2、體積分?jǐn)?shù)5% O2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.精子處理： 精液處理采用密度梯度離心法。處理后的精子沉淀經(jīng)1 ml的G-IVF-PLUS培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞典)上游后，取上游液分析精子濃度。

3.受精：IVF周期患者于取卵后約3 h后行體外授精，加精濃度為每卵0.5～1萬條精子；精卵共孵育約4 h后機(jī)械剝離顆粒細(xì)胞，轉(zhuǎn)入含有G1-PLUS培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞典)的培養(yǎng)皿中。

ICSI周期患者于取卵后約3 h后將孵育后的卵母細(xì)胞經(jīng)透明質(zhì)酸酶(Vitrolife，瑞典)消化后機(jī)械剝離顆粒細(xì)胞，將卵母細(xì)胞置于含有G-IVF-PLUS培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞典)的培養(yǎng)皿中預(yù)培養(yǎng)1 h后，挑選形態(tài)相對正常的精子對成熟的卵母細(xì)胞行單精子注射，注射后的卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)入含G1-PLUS培養(yǎng)液(Vitrolife，瑞典)的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。

4.胚胎觀察及評分：授精后18～20 h于倒置顯微鏡下觀察受精情況，記錄原核數(shù)目。原核和胚胎形態(tài)學(xué)的觀察參照之前的研究[5]。若觀察時(shí)胚胎出現(xiàn)兩個(gè)原核及兩個(gè)極體，則為2PN胚胎；若只有一個(gè)原核，則為1PN胚胎；若觀察不到原核但有兩個(gè)極體，則為0PN(2PB)胚胎。

2PN胚胎于D2和D3在倒置顯微鏡下評估卵裂期胚胎的形態(tài)，包括胚胎細(xì)胞數(shù)、碎片比例、細(xì)胞大小是否均勻等情況，參照文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[6]?？衫门咛榧?xì)胞數(shù)多于4個(gè)且評分高于2分的胚胎，可繼續(xù)培養(yǎng)至囊胚；根據(jù)患者的具體情況決定其2PN胚胎的去向：移植、冷凍或是囊胚培養(yǎng)。進(jìn)行囊胚培養(yǎng)的2PN胚胎，于D5和D6對囊胚進(jìn)行評估，囊胚分級的方法為Gardner囊胚分級法[7]。我中心可利用囊胚標(biāo)準(zhǔn)為：3BB及以上的囊胚；優(yōu)質(zhì)囊胚標(biāo)準(zhǔn)為：評分為4AA、4AB、4BA和4BB的囊胚；可利用囊胚及優(yōu)質(zhì)囊胚可進(jìn)行移植或冷凍保存，冷凍的囊胚擇期復(fù)融后進(jìn)行移植。

臨床上常規(guī)將1PN胚胎及0PN(2PB)胚胎丟棄。本研究中所有的1PN及0PN(2PB)胚胎均進(jìn)行序貫培養(yǎng)，培養(yǎng)至D6，胚胎及囊胚的評分標(biāo)準(zhǔn)同上。

上述整個(gè)過程均取得患者的知情同意且獲得醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。

三、觀察指標(biāo)

2PN胚胎形成率=(2PN胚胎數(shù)/獲卵數(shù))×100%；2PN胚胎卵裂率=(發(fā)生卵裂的2PN胚胎數(shù)/2PN胚胎數(shù))×100%；2PN囊胚形成率=(2PN胚胎形成的囊胚數(shù)/進(jìn)行囊胚培養(yǎng)的2PN胚胎數(shù))×100%。

相應(yīng)的1PN及0PN(2PB)胚胎的形成率、卵裂率、囊胚形成率采用類似計(jì)算方式。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)或率(%)表示，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、患者基本情況分析

787例行IVF治療的患者，年齡為(31.94±5.63)歲，患者的體重指數(shù)(BMI)為(23.26±3.65)kg/m2；298例行ICSI治療的患者，年齡為(32.11±6.86)歲，患者的BMI為(23.02±7.52)kg/m2。兩組患者的基本資料和基礎(chǔ)內(nèi)分泌水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

IVF治療周期共415個(gè)周期進(jìn)行了移植，共移植了760個(gè)2PN胚胎，臨床妊娠241例；ICSI治療周期有164個(gè)周期移植了264個(gè)2PN胚胎，臨床妊娠102例。

二、1PN及0PN(2PB)胚胎形成及繼續(xù)囊胚培養(yǎng)結(jié)局

370個(gè)IVF周期的患者出現(xiàn)了1PN和0PN(2PB)胚胎。形成1PN胚胎305枚，卵裂275枚，形成囊胚47枚；0PN(2PB)胚胎412枚，卵裂363枚，形成囊胚109枚。1PN和0PN(2PB)胚胎的卵裂率及囊胚形成率均顯著低于2PN胚胎(P<0.05)(表2)

表1患者一般情況(x-±s)

組 別周期數(shù)年齡(歲)BMI(kg/m2)FSH(U/L)LH(U/L)IVF78731.94±5.6323.26±3.658.33±1.586.03±2.11ICSI29832.11±6.8623.02±7.527.55±3.115.71±2.43組 別周期數(shù)E2(pmol/L)P(nmol/L)PRL(nmol/L)T(nmol/L)IVF787238.04±297.562.42±2.890.91±0.562.36±0.90ICSI298224.38±259.362.64±1.690.82±0.672.22±0.59

表2IVF周期不同受精狀況的胚胎體外繼續(xù)培養(yǎng)情況[n(%)]

組 別形成率卵裂率囊胚培養(yǎng)數(shù)囊胚形成率1PN305(3.65)*275/305(90.16)*27547/275(17.09)*0PN(2PB)412(4.93)*363/412(88.11)*363109/363(30.03)*2PN4994(59.79)4914/4994(98.40)2133975/2133(45.71)

注：表中2PN和1PN、0PN分別表示2PN胚胎、1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎；與2PN組相比，*P<0. 05

61個(gè)ICSI周期的患者形成了1PN和0PN(2PB)胚胎。其中1PN胚胎71枚，卵裂66枚，形成囊胚5枚；2PB胚胎25枚，卵裂21枚，形成囊胚3枚。

三、女方年齡與1PN及0PN(2PB)胚胎形成的關(guān)系

女方年齡范圍為20～49歲，中位數(shù)為31歲，以30歲、35歲為界值對患者進(jìn)行分組。與>35歲組患者比較，30～35歲組患者的2PN胚胎卵裂率、0PN(2PB)胚胎形成率及其卵裂率較高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而<30歲組患者的0PN(2PB)胚胎卵裂率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

四、體外受精方式與1PN及0PN(2PB)胚胎形成的關(guān)系

體外受精-胚胎移植周期中，常規(guī)IVF周期的平均獲卵數(shù)、1PN及0PN(2PB)胚胎的發(fā)生率均高于ICSI周期(P<0.05)；而兩組之間的1PN及0PN(2PB)胚胎的卵裂率及囊胚形成率并無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

五、獲卵數(shù)與1PN及0PN(2PB)胚胎形成的關(guān)系

獲卵數(shù)的中位數(shù)為9枚(1～48枚)，以5、10、15、20為界值，對患者進(jìn)行分組。各組的1PN胚胎形成率及卵裂率以及0PN(2PB)胚胎的形成率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但各組之間2PN胚胎的形成率及卵裂率、0PN(2PB)卵裂率及2PN優(yōu)質(zhì)胚胎率存在顯著性差異(P<0.05)(表5)。

六、Logstic回歸分析結(jié)果

以是否有1PN胚胎形成為因變量，納入患者年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)內(nèi)分泌(FSH、LH、E2、PRL、P、T)水平、受精方式、獲卵數(shù)、MII數(shù)、正常受精數(shù)為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

分析發(fā)現(xiàn)，1PN胚胎的形成與患者選擇的受精方式、MII卵數(shù)、2PN數(shù)顯著相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)內(nèi)分泌(FSH、LH、E2、PRL、P、T)水平、獲卵數(shù)等無關(guān)(P>0.05)。與IVF周期相比，ICSI周期中更可能出現(xiàn)1PN胚胎(P<0.05)；當(dāng)患者的MII卵數(shù)越多，2PN胚胎數(shù)越少時(shí)，越易形成1PN胚胎(P<0.05)。

同樣，以是否有0PN(2PB)胚胎形成為因變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)0PN(2PB)胚胎的形成與患者選擇的受精方式、MII卵數(shù)、2PN數(shù)有關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)內(nèi)分泌(FSH、LH、E2、PRL、P、T)水平、獲卵數(shù)等無關(guān)(P>0.05)。與ICSI周期相比，IVF周期中更可能出現(xiàn)0PN(2PB)胚胎(P<0.05)；當(dāng)患者的MII卵數(shù)越多，2PN胚胎數(shù)越少時(shí)，越易形成0PN(2PB)胚胎(P<0.05)。

表3女方年齡與IVF/ICSI周期中各類胚胎的發(fā)生發(fā)育關(guān)系[n(%)]

年齡組獲卵數(shù)2PN形成率2PN卵裂率1PN形成率1PN卵裂率0PN形成率0PN卵裂率<3064723814(58.93)3751(98.35)200(3.09)182(91.00)228(3.52)202(88.60)*30~3531101868(60.06)1847(98.88)*117(3.76)103(88.03)152(4.89)*139(91.45)*>3517051004(58.89)980(97.61)59(3.46)56(94.92)57(3.34)43(75.44)

注：表中2PN和1PN、0PN分別表示2PN胚胎、1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎；與>35歲組比較，*P<0.05

表4不同受精方式下各類胚胎的發(fā)生發(fā)育情況[n(%)]

組 別周期數(shù)平均獲卵數(shù)1PN發(fā)生率1PN卵裂率1PN囊胚形成率0PN發(fā)生率0PN卵裂率0PN囊胚形成率IVF78710.61*305(3.65)*275(90.16)47(17.09)412(4.93)*363(88.11)109(30.03)ICSI2989.8571(3.01)66(92.96)5(7.58)25(1.07)21(84.0)3(14.29)

注：表中1PN和0PN分別表示1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎；與ICSI組比較，*P<0.05

表5不同獲卵數(shù)組中各類胚胎的發(fā)生發(fā)育情況[n(%)]

獲卵數(shù)病例數(shù)2PN形成率2PN卵裂率1PN形成率1PN卵裂率≤5295510(62.65)494(96.86)25(3.07)21(84.00)6~103051355(56.58)*1339(98.82)*84(3.51)77(91.67)11~152361758(58.72)*1740(98.98)*※95(3.17)89(93.68)16~201371413(59.27)1389(98.30)70(2.94)63(90.00)21~481121650(69.92)#1616(97.94)102(4.32)91(89.22)獲卵數(shù)病例數(shù)0PN形成率0PN卵裂率2PN優(yōu)質(zhì)胚胎率≤529534(4.18)23(67.65)#423(82.94)6~10305110(4.59)97(88.18)1087(80.22)*11~15236128(4.28)114(89.06)1412(80.32)*※16~2013793(3.90)82(88.17)1129(79.90)*21~4811272(3.05)68(94.44)1355(82.12)

注：表中2PN和1PN、0PN分別表示2PN胚胎、1PN胚胎和0PN(2PB)胚胎；與獲卵數(shù)≤5組比較，*P<0. 05；與其他各組比較，#P<0. 05；與獲卵數(shù)21～48組比較，※P<0.05

討論

目前國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為1PN胚胎可能的發(fā)生機(jī)制主要有以下方面：①孤雌激活；②精子染色體解聚異常[8]；③雌原核形成異常[9]；④雌雄原核融合[10]；⑤雌雄原核形成不同步[11]；⑥成熟前原核核膜崩解(premature pronuclear envelope breakdown，pPNBD)：最近一項(xiàng)新的研究[12]發(fā)現(xiàn)，對1PN胚胎行FISH檢測發(fā)現(xiàn)其有兩個(gè)原核，這是以上的機(jī)制難以解釋的，進(jìn)一步采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測，證實(shí)了pPNBD的發(fā)生可能是導(dǎo)致1PN胚胎形成的另一機(jī)制。另外，約30%～40%的卵受精18～20 h后在倒置顯微鏡下觀察不到原核，只看到兩個(gè)第二極體即0PN(2PB)胚胎。繼續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)，部分0PN(2PB)胚胎仍可發(fā)生卵裂或是形成胚胎，其外觀形態(tài)和卵裂率與正常受精的胚胎相似，因此未觀察到原核并不意味著未發(fā)生受精。導(dǎo)致0PN(2PB)形成的原因主要有以下幾個(gè)方面：①雌雄原核發(fā)育不同步[2]；②受精缺陷[13]；③第二極體參與到核遺傳物質(zhì)的形成過程[14]。從上述機(jī)制可以發(fā)現(xiàn)，部分1PN及0PN(2PB)胚胎是正常受精的胚胎，只是因?yàn)殄e(cuò)過了最佳的觀察時(shí)機(jī)[3]而導(dǎo)致只觀察到1個(gè)原核或是沒有原核，盡管如此，仍有一部分是異常受精的胚胎。臨床上經(jīng)常會遇到一些患者，獲卵數(shù)較少，經(jīng)過體外受精后往往無2PN胚胎，而形成了1PN或0PN(2PB)胚胎。對于此類患者，可進(jìn)行多次原核觀察，以期發(fā)現(xiàn)第二個(gè)原核。但反復(fù)多次地將培養(yǎng)皿取出進(jìn)行觀察會帶來胚胎生長環(huán)境的不斷變化，可能會對胚胎的正常發(fā)育造成一定的不良影響；此外，多次觀察會大大地增加胚胎實(shí)驗(yàn)室工作人員的工作量。而近些年來興起的time-lapse技術(shù)雖然可以在封閉環(huán)境下動(dòng)態(tài)地觀察胚胎發(fā)育情況，但因其價(jià)格昂貴且不能有效地改善妊娠結(jié)局及輔助生殖技術(shù)的安全性[15]，尚未在各個(gè)生殖中心廣泛采用。所以本研究將探討這類胚胎的發(fā)育潛能及可能的影響因素。

在本研究中，1PN胚胎的發(fā)生率為3.65%(IVF周期)、3.01%(ICSI周期)，與先前報(bào)道的2%～5%相似[2]。與正常的2PN胚胎相比，1PN胚胎的形成在患者基本情況、促排卵方案、胚胎發(fā)育情況等方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[11]。目前有多個(gè)研究對獲卵數(shù)與ART妊娠結(jié)局之間的關(guān)系進(jìn)行研究，但研究結(jié)果并不一致。有研究證明，1PN胚胎的周期中卵冠丘復(fù)合體的數(shù)目較多[16]。我們根據(jù)獲卵數(shù)的多少對患者進(jìn)行分組，各組的1PN胚胎形成率及卵裂率以及0PN(2PB)胚胎的形成率均無顯著差異，但2PN的形成率及卵裂率、0PN(2PB)胚胎卵裂率及2PN優(yōu)質(zhì)胚胎率則存在顯著差異。本研究還發(fā)現(xiàn)1PN胚胎的形成可能與MII卵母細(xì)胞數(shù)及本周期中形成的2PN胚胎數(shù)相關(guān)，當(dāng)患者本周期的MII卵母細(xì)胞數(shù)較多而2PN胚胎數(shù)目較少時(shí)，往往更可能會出現(xiàn)1PN胚胎。因?yàn)榫兔總€(gè)周期的MII卵母細(xì)胞而言，授精后會形成0PN(2PB)胚胎、1PN胚胎、2PN胚胎、多PN胚胎，以及1PB胚胎，當(dāng)MII卵母細(xì)胞數(shù)目較多，而其余各種類型的胚胎尤其是2PN胚胎較少時(shí)，則較易出現(xiàn)1PN胚胎。

母方年齡在體外受精-胚胎移植周期中起著關(guān)鍵性的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著女方年齡的不斷增長，IVF及ICSI授精方式下1PN胚胎的發(fā)生率與卵裂率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而30～35歲的患者0PN(2PB)的發(fā)生率較其他年齡組高。為了進(jìn)一步探討授精方式對1PN胚胎形成的影響，對患者進(jìn)行分組研究結(jié)果顯示，IVF授精方式下1PN及0PN(2PB)胚胎的發(fā)生率均高于ICSI組(P<0.05)，而兩組的卵裂率及囊胚形成率并無顯著性差異。這說明兩種授精方式下1PN來源胚胎的發(fā)育潛能無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。有研究[17]表明，對IVF和ICSI周期中1PN胚胎進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)后發(fā)現(xiàn)，IVF周期中由1PN胚胎發(fā)育來的胚胎，其胚胎性染色體二倍體率為54.35%，單倍體率為23.91%，嵌合體率為21.74%；而在ICSI周期中，分別為34.62%、34.62%和30.77%。這表明IVF周期的單原核孕卵有一定的移植價(jià)值，而ICSI中1PN胚胎中大部分是由于孤雌生殖而形成。到目前為止，已有不少來源于1PN或0PN(2PB)胚胎來源的健康子代出生[18]。

進(jìn)一步行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，1PN及0PN(2PB)胚胎的形成與女方的年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)內(nèi)分泌(FSH、LH、E2、PRL、P、T)水平及獲卵數(shù)無關(guān)，而與患者選擇的受精方式、MII卵數(shù)以及形成的2PN數(shù)有關(guān)。出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能與進(jìn)行Logistic回歸分析時(shí)選擇的自變量有限有關(guān)，本研究未對患者的不孕類型(原發(fā)不孕或是繼發(fā)不孕)、超促排卵方案、HCG日的FSH及E2水平、Gn用量等進(jìn)行分析，也未將這些因素納入到研究中，可能會導(dǎo)致結(jié)果的偏差。但Logistic回歸分析的結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并不代表從專業(yè)知識角度也有意義，所以1PN及0PN(2PB)胚胎形成的危險(xiǎn)因素尚需進(jìn)一步的研究。

有研究認(rèn)為1PN胚胎極有可能存在染色體異常，胚胎質(zhì)量較差，發(fā)育潛能較低，多數(shù)胚胎存在發(fā)育停滯，只有約30%發(fā)育至桑椹胚或囊胚[16，19]，故認(rèn)為其不具有臨床價(jià)值，常作為廢胚丟棄，僅在個(gè)別無正常受精的2PN胚胎的情況下考慮使用。本研究對IVF/ICSI周期授精后18～20 h觀察到的1PN及0PN(2PB)胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng)至D6，并于D5、D6觀察其囊胚形成情況，發(fā)現(xiàn)1PN和0PN(2PB)胚胎有相當(dāng)比例可發(fā)育成囊胚，但與2PN胚胎相比，其卵裂率及囊胚形成率均明顯降低，說明1PN及0PN(2PB)胚胎具有一定的發(fā)育潛能，但發(fā)育潛能較低，與以往的研究結(jié)果相似。

綜上所述，1PN和0PN(2PB)胚胎具有一定的發(fā)育潛能，其形成可能受授精方式、MII卵母細(xì)胞數(shù)等因素的影響。本研究并未對這些“異常胚胎”進(jìn)行染色體分析，也并未對患者移植這些胚胎。因此，關(guān)于IVF-ET中單原核來源的胚胎是否具有利用價(jià)值，尚需進(jìn)一步的研究來證實(shí)。

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[編輯：羅宏志]

Development potential of mono-pronucleus or two polar body zygotes and affecting factors in IVF

ZHANGYa-nan，YINBao-li，ZHANGCui-lian*，WEIDuo，HAOHao-ying，SONGXiao-bing，XIEJuan-ke

MedicalReproductionCenter，People’sHospitalofZhengzhouUniversity/HenanProvincialPeople’sHospital，Zhengzhou450003

【Abstract】

Objective： To investigate the affecting factors for formation of mono-pronucleus and two polar bodies zygotes and their development potential in IVF and ICSI.

Methods： Mono-pronucleus (1PN) or two polar body (2PB) zygotes were obtained from 298 patients in ICSI cycles and 787 patients in IVF cycles were observed at 18-20 hours after fertilization. The 1PN or 2PB zygotes were continuously cultured to Day 6 by the sequential method，and the pronuclear，cleavage and blastocyst were recorded. The data of the patients were retrospectively analyzed respectively to explore the influencing factors.

Results： The cleavage rate (90.16% and 88.11%) and blastocyst rate (17.09% and 30.03%) of 1PN and 2PB zygotes are significantly lower than that of 2PN embryos (98.40%，45.71%) (allP<0.05). The age of women，the fertilization modes and the number of oocytes retrieved significantly influenced the incidence of 1PN，while only the age significantly affected the incidence of 2PB zygotes (allP<0.05). Logistic regression analysis found that the incidence of 1PN or 2PB zygotes was significantly correlated with the fertilization modes，the number of MII oocytes and 2PN embryos (P<0.05)，but not with the age，body mass index，number of oocytes retrieved and serum levels of LH，F(xiàn)SH，E2，progesterone and PRL (P>0.05).

Conclusions： The developmental potential of 1PN or 2PB zygotes is much lower than 2PN embryos. Multiple factors such as the fertilization modes，number of MII oocytes，number of 2PN embryos may influence the incidence of 1PN or 2PB zygotes. The affecting factors should be considered in assisted reproductive techniques to reduce incidence of 1PN or 2PB zygotes and improve the utilization of oocytes.

Key words：IVF；Mono-pronucleus zygotes；Blastocyst；Developmental potential；Logistic regression analysis

【作者簡介】張亞楠，女，河南漯河人，碩士，生殖醫(yī)學(xué)專業(yè).(*通訊作者)

【基金項(xiàng)目】河南省科技廳重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.12202310536);河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.201202022)

【收稿日期】2015-07-18；【修回日期】2015-08-11

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.1.007