沉降式液基細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量12 000例分析

賀德智（勝利石油管理局河口醫(yī)院病理科，山東東營257200）

沉降式液基細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量12 000例分析

賀德智（勝利石油管理局河口醫(yī)院病理科，山東東營257200）

目的提高液基細(xì)胞學(xué)制片的質(zhì)量。方法收集該院2009年12月至2015年12月共12000例婦科患者，采用廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的沉降式液基細(xì)胞學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行制片。結(jié)果通過總結(jié)經(jīng)驗(yàn)改進(jìn)制片時(shí)的操作技術(shù)，提高了涂片質(zhì)量。結(jié)論通過對制片過程中嚴(yán)格的質(zhì)量控制，使每一步都做到細(xì)致操作，完全能做出符合診斷要求的涂片。

宮頸腫瘤；細(xì)胞診斷學(xué)；沉降式；液基細(xì)胞學(xué)

宮頸癌是女性腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，居女性惡性腫瘤第2位，但在一些發(fā)展中國家和地區(qū)仍居第1位［1］，嚴(yán)重危害婦女的生命。而在我國的發(fā)病率呈明顯上升和年輕化的趨勢［2］，患病率以每年2%～3%的速度增長［3］。因而宮頸病變篩查顯得尤為重要，各種檢查方法也應(yīng)運(yùn)而生，沉降式液基細(xì)胞學(xué)制片就是其中的一種，相比于其他種類，該方法通過固定液保存標(biāo)本，再經(jīng)過一系列的技術(shù)處理，去掉了標(biāo)本中的血液、黏液等雜質(zhì)，利用自然沉降原理，將具有診斷意義的細(xì)胞沉淀下來，制成薄片，片內(nèi)細(xì)胞豐富，分布均勻，易于辨認(rèn)。自2009年開始，本院病理科使用廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的沉降式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查系統(tǒng)，通過對大量標(biāo)本制片，積累了一些制片及染色經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)介紹如下。

1　資料與方法

1.1一般資料由安必平醫(yī)藥科技公司提供成套設(shè)備與耗材。選取本院2009年12月至2015年12月收治的婦科患者12 000例，年齡20～65歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集由婦科醫(yī)生進(jìn)行標(biāo)本的采集。

1.2.2液基薄層細(xì)胞學(xué)片的制備將標(biāo)本瓶放置在漩渦混合器上振蕩約30 s；將標(biāo)本瓶、離心管、載玻片及申請單對應(yīng)寫上編號(hào)；在12 mL離心管中注入4 mL分離提取液；使用自動(dòng)樣本轉(zhuǎn)移機(jī)轉(zhuǎn)移8 mL樣本；第1次離心：1 200 r/min，2 min，吸去8 mL上清液；第2次離心：2 200 r/min，10 min，棄上清液；置漩渦混合器上振蕩約30 s。

1.2.3制片染色將處理好的載玻片放置在染色板上并扣上制片染色艙，使用安必平液基細(xì)胞沉降式自動(dòng)制片染色系統(tǒng)進(jìn)行制片及染色（染色艙的直徑?jīng)Q定了涂片直徑為1.3 cm）。

1.2.4濕式封片拆除染色艙，將片子放入無水乙醇內(nèi)進(jìn)行脫水（2次）；二甲苯內(nèi)透明（2次）；中性樹膠濕式封片。

1.3細(xì)胞學(xué)診斷采用2001年TBS分類標(biāo)準(zhǔn)［3］：（1）無上皮內(nèi)病變或惡性病變（NILM）；（2）意義不明的非典型鱗狀細(xì)胞（ASCUS）和非典型腺細(xì)胞（AGC）；（3）不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變的非典型鱗狀細(xì)胞（ASC-H）；（4）低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）；（5）高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）；（6）鱗狀上皮癌（SCC）；（7）非特異性不典型子宮頸管腺細(xì)胞（AGC-NOS）；（8）不典型子宮頸管腺細(xì)胞傾向于腫瘤（AGC傾向腫瘤）；（9）宮頸原位腺癌（AIS）及腺癌。根據(jù)液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測報(bào)告系統(tǒng)（TBS報(bào)告系統(tǒng)）：LSIL包含人乳頭瘤病毒（HPV）感染和宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）Ⅰ級(jí)，HSIL包含CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)或鱗狀上皮原位癌（CIS）；該系統(tǒng)也對標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行評估，對微生物和炎癥程度或萎縮等分別加以描述。TBS報(bào)告正?；蜓仔苑磻?yīng)作為細(xì)胞學(xué)陰性，ASCUS及以上病變?yōu)榧?xì)胞學(xué)陽性。

2　結(jié)　果

2.1制片及染色結(jié)果12 000份片子中，有11 736份達(dá)到制片標(biāo)準(zhǔn)，甲片率97.8%，對不滿意片子進(jìn)行分析，找出原因并進(jìn)行解決。細(xì)胞染色的結(jié)果：整張涂片背景干凈，上皮細(xì)胞核呈深藍(lán)色，核仁紅色；角化細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)粉紅色，不全角化細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)橙黃色，角化前細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)淡藍(lán)或淡綠色。

2.2TBS細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果NILM者11580例（96.50%），ASC-US者244例（2.03%），ASC-H者14例（0.12%），LSIL者242例（2.02%），HSIL者25例（0.21%），SCC者8例（0.07%）。檢出霉菌504例（4.20%），滴蟲12例（0.10%），線索細(xì)胞150例（1.25%）。

2.3與病理組織學(xué)結(jié)果進(jìn)行對照分析細(xì)胞學(xué)診斷中，部分ASC-US和 LSIL以上鱗狀上皮病變（包括ASC-H）均行陰道鏡下活檢，病理組織學(xué)檢測結(jié)果：CINⅠ級(jí)254例（2.12%），CINⅡ級(jí)26例（0.22%），CINⅢ級(jí)8例（0.07%），SCC 7例（0.06%）。

3　討　論

傳統(tǒng)巴氏涂片中，53%～90%為假陰性的原因是涂片中沒有能診斷的細(xì)胞［4］，有研究發(fā)現(xiàn)，常規(guī)涂片有80%以上的細(xì)胞隨取材器被丟棄［5］。另外，傳統(tǒng)涂片質(zhì)量差，涂片不均勻或過厚，血液、黏液等雜質(zhì)掩蓋了不正常細(xì)胞，或細(xì)胞重疊影響了對異常細(xì)胞的識(shí)別能力［6］。

液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)是1996年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)上市的改良細(xì)胞學(xué)技術(shù)，其突出優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)本的利用率高，符合不丟棄任何所取材料的原則［7］。國內(nèi)從2001年開始做液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查篩選宮頸癌的研究［8］。與傳統(tǒng)涂片相比，安必平沉降式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查系統(tǒng)具有以下優(yōu)勢：能夠有效地收集細(xì)胞；標(biāo)本固定及時(shí)，細(xì)胞無蛻變、固縮等現(xiàn)象，核漿比的改變易辨認(rèn)；有效去除了血液、黏液等雜質(zhì)成分，保證了制片的質(zhì)量；一次能制成24張片子，非常適合大規(guī)模查體工作，減少了技術(shù)人員的工作量；機(jī)器標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的染色保證了染色效果的穩(wěn)定性；獨(dú)立的染色艙能有效避免交叉污染。最后制成的涂片中細(xì)胞層次薄、平鋪，而且能呈現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞特有的立體結(jié)構(gòu)，這使得診斷的準(zhǔn)確性、敏感性都比傳統(tǒng)涂片明顯提高。該技術(shù)漏診率低，無創(chuàng)傷，因此成為篩查癌前病變的主要手段，對宮頸癌的早防、早治起到積極的作用［9］。

由于制片中的環(huán)節(jié)比較多，如取材、固定、涂片、染色、封固，既有手工操作也有機(jī)器操作，在實(shí)際工作中任何一個(gè)步驟操作不規(guī)范，都會(huì)影響到最后的制片質(zhì)量。因而應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：（1）提前與婦科醫(yī)生進(jìn)行溝通，提高標(biāo)本采集合格率。90%以上的宮頸癌來自頸管交界處的細(xì)胞［10］，所以應(yīng)采集到病變部位和宮頸的移行區(qū)（鱗柱交界區(qū)）細(xì)胞。取材時(shí)還要注意力度要適當(dāng)，當(dāng)患者宮頸糜爛嚴(yán)重或分泌物過多時(shí)，可用紗布輕輕擦拭后取樣。（2）第2次離心后的振蕩非常重要，如果振蕩不充分，細(xì)胞團(tuán)沒有被打散，在片子上的細(xì)胞會(huì)堆積在一起，影響診斷，作者的經(jīng)驗(yàn)是：振蕩一會(huì)兒觀察一下試管，試管內(nèi)呈均勻的混懸狀，則是合適的；反之，如果在清亮的液體中見到成團(tuán)狀漂浮物，則應(yīng)繼續(xù)振蕩直至細(xì)胞塊充分打散為止（絕經(jīng)期女性例外）。（3）在向離心管中注入緩沖液后，應(yīng)逐個(gè)檢查一遍，當(dāng)管內(nèi)的混懸液特別濃稠時(shí)，可向管內(nèi)再次注入少量的緩沖液，稀釋一下，以避免制片時(shí)，細(xì)胞層過厚。反之，當(dāng)管內(nèi)的混懸液特別稀時(shí)，可將整管的液體全部倒入染色艙內(nèi)（向染色艙移液時(shí)，移液量一般設(shè)為300 μL）。（4）安必平醫(yī)藥科技有限公司提供的是改良的巴氏染色法，試劑的用量和染色時(shí)間均可以調(diào)整，這需要在工作中不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，找到最合適的用量和染色時(shí)間。當(dāng)染液使用時(shí)間過長時(shí)，要及時(shí)更換。

總之，沉降式液基細(xì)胞學(xué)制片是一種簡單易操作的方法，比傳統(tǒng)涂片的檢測陽性率較高。掌握上述注意事項(xiàng)，規(guī)范操作過程，完全能夠制作出一張滿意的液基細(xì)胞學(xué)涂片，為正確的細(xì)胞學(xué)診斷提供保證。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.041

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1009-5519（2016）14-2223-03

（2016-03-26）