首烏藤不同部位有效成分含量考察

廖 力，黃 倩，陳勝利，廖光星,林 冰,2*

(1.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽550025；2.貴州省藥食同源植物資源開發(fā)工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽550025；3.貴州七合生物科技有限公司，貴州 貴陽550081；4.湄潭七合種植專業(yè)合作社，貴州 湄潭564100)

首烏藤不同部位有效成分含量考察

廖 力1，黃 倩1，陳勝利3，廖光星4,林 冰1,2*

(1.貴州大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽550025；2.貴州省藥食同源植物資源開發(fā)工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽550025；3.貴州七合生物科技有限公司，貴州 貴陽550081；4.湄潭七合種植專業(yè)合作社，貴州 湄潭564100)

目的：考察并比較首烏藤嫩、中、老枝不同部位中主要有效成分二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。方法:采用加熱回流提取法制備供試品，采用高效液相色譜法測定首烏藤中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量。結(jié)果：首烏藤嫩、中、老枝中二苯乙烯苷含量分別為0.016、0.147和0.516 %，大黃素含量分別為0.112、0.116、0.235 mg/g，大黃素甲醚的含量分別為0.299、0.584、0.747 mg/g。結(jié)論：首烏藤不同部位中二苯乙烯苷、大黃素及大黃素甲醚含量有明顯差異，老枝中的含量大于中枝與嫩枝。三種成分在首烏藤不同部位含量變化趨勢一致。采收時(shí)應(yīng)注意保留老、中枝部分。

首烏藤；二苯乙烯苷；大黃素；大黃素甲醚

首烏藤(CaulisPolygoniMultiflori)為蓼科植物何首烏(PolygonummultiflorumThunb)的藤莖，性味甘，平，歸心，肝經(jīng)。具有養(yǎng)血安神，祛風(fēng)通絡(luò)等功效，用于失眠多夢，血虛身痛風(fēng)濕痹痛，皮膚瘙癢等癥，并廣泛分布于河南，貴州，湖南，湖北等地[1]，是一種民間的常用藥。首烏藤主要化學(xué)成分為大黃素、大黃素甲醚、二苯乙烯苷等。長期以來，大黃素被傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為具有瀉下的作用，現(xiàn)認(rèn)為還有改善睡眠[2]，抗菌消炎[3]、抗腫瘤[4]、免疫抑制[5,6]、抗腎纖維化[7]等藥理作用。根據(jù) 2005年版《中國藥典》一部“夜寧糖漿”的處方改制而成﹝批準(zhǔn)文號: 南制字(2011)F16006﹞，其處方由合歡皮，靈芝，首烏藤等7味中藥組成的養(yǎng)血安神膠囊，具有養(yǎng)心安神的功效，其中首烏藤原藥材質(zhì)量直接影響成品中大黃素的含量[8]。2015年版《中華人民共和國藥典》中首烏藤的采收方法為“秋冬二季采割，除去殘葉，捆成或趁鮮切斷，干燥?！钡⑽疵鞔_規(guī)定首烏藤采收部位，實(shí)際生產(chǎn)中有的采收較嫩枝的部位[9]，老枝嫩枝棄之；有的采取嫩老枝混用的方法處理，造成了首烏藤質(zhì)量不穩(wěn)定的狀況。因此，通過高效液相色譜法測定首烏藤不同部位中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量，能為首烏藤明確規(guī)定采收部位提供依據(jù)，有利于保證其藥物制劑成品中有效成分的規(guī)定限量，提高首烏藤的利用率。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 儀器試劑

Agilent Technologies 1220型自動進(jìn)樣高效液相色譜儀(DAD檢測器及配套色譜工作站) ，色譜柱ZORBA SB-C18(150 nm×4.6 mm,5 μm)，F(xiàn)A2004分析天平(上海良平儀器儀表有限公司) ，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DGG-9246A(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)，電子調(diào)溫電熱套98-1-B型(天津市泰斯特儀器有限公司)。乙腈，甲醇為色譜純( Fisher 公司) ，其他試劑均為分析純; 2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷( 批號: 1501123) 對照品購于中國藥品生物制品檢定所，大黃素(批號：TB20150421)對照品，大黃素甲醚(TB20150306)對照品購于西安天寶生物科技有限公司。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥材

首烏藤新鮮樣品采自貴州省湄潭縣何首烏生產(chǎn)基地，經(jīng)貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院熊源新老師鑒定為蓼科植物何首烏(PolygonummultiflorumThunb.)藤莖首烏藤(CaulisPolygoniMultiflori.)。由地上部分到何首烏根部全株采收。

1.2 方法

1.2.1 藥材處理

選取長約為150 cm的首烏藤，將其分為嫩、中、老枝三部分。其中最頂端約長30 cm、直徑2 mm以下的為嫩枝；中間部位長約70 cm、直徑2～3 mm之間為中枝；末端長約50 cm、直徑3 mm以上的為老枝；長約為150 cm的首烏藤整株切段混合為嫩、中、老枝三種部位混合樣品，將嫩、中、老枝三部分及混合樣品置于50℃熱風(fēng)干燥箱中烘干，粉碎成粗末備用。

1.2.2 首烏藤不同部位二苯乙烯苷含量測定方法

1.2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取二苯乙烯苷對照品適量, 置棕色量瓶中, 加稀乙醇配制成每1 mL 含60 μg的溶液，置10℃以下保存，即得。

1.2.2.2 供試品溶液的制備

分別取首烏藤嫩、中、老三種部位樣品及混合樣粉末約2 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，上清夜濾過，即得。

1.2.2.3 色譜條件

參照2015年版《中華人民共和國藥典》中測定首烏藤中二苯乙烯苷的高效液相色譜法。色譜柱 流動相:乙腈-水(26:74)，檢測波長:320 nm，流速:1.0 mL/min,柱溫:25℃，進(jìn)樣量:10 μL。

1.2.3 首烏藤不同部位大黃素及大黃素甲醚含量測定

1.2.3.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取大黃素，大黃素甲醚對照品適量，置棕色量瓶中，加甲醇配制成每1 mL 含大黃素102 μg，大黃素甲醚76 μg的溶液，置10℃以下保存，即得。

1.2.3.2 供試品溶液的制備

1.2.3.3 色譜條件

參照2015年版《中華人民共和國藥典》中測定何首烏中大黃素和大黃素甲醚的高效液相色譜法。色譜柱 流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)，檢測波長：254 nm，流速:1.0 mL/min，柱溫:25℃，進(jìn)樣量:10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 首烏藤不同部位二苯乙烯苷含量測定結(jié)果

2.1.1 線性關(guān)系的考察

取二苯乙烯苷對照品溶液(60 μg/mL)，分別進(jìn)樣2，4，6，8，10 μL，測定進(jìn)樣量峰面積，以對照品峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為: Y=4482.5X-22.48，R2=0.99079，表明二苯乙烯苷在0.1～0.6 μg之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.1.2 樣品含量測定

按1.2.2.2項(xiàng)供試品溶液的制備方法，精密吸取10 μL供試品溶液進(jìn)樣，測定二苯乙烯苷含量，每份3次，取平均值。HPLC圖見圖1，結(jié)果見表1。

教育部辦公廳頒布的《2017年教育信息化工作要點(diǎn)》提出：“推進(jìn)信息技術(shù)在教學(xué)中的深入普遍應(yīng)用，激發(fā)廣大教師應(yīng)用信息技術(shù)推動教育理念、教學(xué)模式和教學(xué)內(nèi)容創(chuàng)新的熱情，積極促進(jìn)線上線下相結(jié)合的混合式學(xué)習(xí)模式普及?！?在線開放課程是現(xiàn)代教育技術(shù)發(fā)展與教學(xué)資源共享化的結(jié)晶，具有學(xué)習(xí)任務(wù)明確、知識針對性強(qiáng)、考評方式豐富及節(jié)奏可控性等特點(diǎn)。建設(shè)《組織學(xué)與胚胎學(xué)》在線開放課程為《組織學(xué)與胚胎學(xué)》的課程教學(xué)改革提供了新的思路。

圖1 首烏藤二苯乙烯苷HPLC圖Fig.1 HPLC scanning profiles of THSG of Caulis Polygoni Multiflori

表1 樣品中二苯乙烯苷含量測定結(jié)果(，n= 3)Tab．1 results of determination of THSG in the sample(，n= 3)

由表1可知，首烏藤嫩、中、老枝中二苯乙烯苷含量差異明顯，尤其是老枝的二苯乙烯苷含量遠(yuǎn)大于嫩枝的二苯乙烯苷含量，老枝和中枝的差異較小。隨著首烏藤從老莖部位向嫩莖部位延伸，其中二苯乙烯苷的含量呈逐漸降低趨勢，即老枝>中枝>嫩枝?；旌蠘又卸揭蚁┸蘸勘戎兄?，嫩枝的大，但小于老枝的二苯乙烯苷含量。

2.2 首烏藤不同部位大黃素及大黃素甲醚含量測定結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系考察

取大黃素對照品溶液(102 μg/mL)和大黃素甲醚(76 μg/mL)對照品，分別進(jìn)樣2，4，6，8，10 μL，測定進(jìn)樣量峰面積，以對照品峰面積Y值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為: Y=2102.1X-49，R2=0.98338，Y=1123.4X-28.71，R2=0.98533表明大黃素在0.204～1.02 μg，大黃素甲醚在0.152～0.76 μg之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.2 樣品含量測定

按1.2.3.2項(xiàng)供試品溶液的制備方法，精密吸取10μL供試品溶液進(jìn)樣，測定大黃素和大黃素甲醚含量，每份3次，取平均值。HPLC圖見圖2，結(jié)果見表2。

圖2 首烏藤大黃素與大黃素甲醚HPLC圖Fig.2 HPLC scanning profiles ofemodin and emodin-3-methyl ether of Caulis Polygoni Multiflori.

表2 樣品中大黃素和大黃素甲醚含量測定結(jié)果 (，n= 3)Tab．2 results of determination of emodin and emodin-3- methyl ether in the sample(，n= 3)

由表2可知，首烏藤嫩枝和中枝的大黃素含量差異較小，老枝大黃素含量約是中枝與嫩枝的2倍，隨著首烏藤從老莖部位向嫩莖部位延伸，其中大黃素和大黃素甲醚的含量呈逐漸降低趨勢，即老枝>中枝>嫩枝，其趨勢與首烏藤中二苯乙烯苷含量變化趨勢一致。混合樣與嫩枝、中枝大黃素含量差異不明顯，含量都在0.1 mg/g左右?；旌蠘又写簏S素甲醚的含量介于中枝與老枝之間，其關(guān)系為老枝>混合樣>中枝>嫩枝。

3 結(jié)論與討論

(1)結(jié)果表明，首烏藤不同部位的二苯乙烯苷含量有明顯差異，首烏藤老枝含量的最高值0.516 %，嫩枝含量最低為0.016 %，兩者相差約30倍。首烏藤老枝二苯乙烯苷含量高出中枝約4倍。首烏藤老枝二苯乙烯苷含量為0.516 %，符合藥典規(guī)定限量，中枝二苯乙烯苷含量0.147 %，略小于藥典限量的0.2 %，而嫩枝只有0.016 %，低于藥典限量約10倍，不符合藥典規(guī)定限量。故在原藥材的采收過程中，應(yīng)盡量保留首烏藤老、中枝部位。

(2)2015年版《中華人民共和國藥典》中記載首烏藤可用于“失眠多夢”。有文獻(xiàn)報(bào)道[2]大黃有一定的促睡眠作用。李智欣等人[10]按照國標(biāo)(改善睡眠功能檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn))方法，亦證實(shí)了首烏藤中的蒽醌類成分對縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期具有促進(jìn)作用，表現(xiàn)出一定的改善睡眠的功效。首烏藤中的蒽醌類[11]成分主要為大黃素及大黃素甲醚。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，首烏藤不同部位中大黃素的含量差異較小(相差約2倍)，但首烏藤老枝部位依然比中枝、嫩枝的高。故在首烏藤的采收中，應(yīng)注意保留中、老枝部分。

(3)首烏藤各部位中大黃素甲醚的含量比大黃素的含量高，且其含量呈老枝>中枝>嫩枝關(guān)系。童研[12]等采用小鼠強(qiáng)迫游泳和小鼠懸尾模型動物應(yīng)激模型考察了大黃素甲醚抗抑郁的作用，結(jié)果顯示大黃素甲醚能夠降低小鼠的懸尾不動時(shí)間，縮短小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動時(shí)間，表明大黃素甲醚對動物有一定的抗抑郁作用。《中國藥典》2015版中記載首烏藤具有“養(yǎng)血安神”的功能。提示首烏藤養(yǎng)心安神作用可能與其含有的大黃素甲醚有關(guān)，故在實(shí)際的采收過程中應(yīng)盡量保留老、中枝部位。

(4)混合樣中二苯乙烯苷含量符合藥典規(guī)定，仍低于老枝中二苯乙烯苷的含量?！吨袊幍洹?015版雖未對首烏藤中大黃素和大黃素甲醚的含量進(jìn)行含量限定，但作為其主要有效成分指標(biāo)，混合樣中大黃素和大黃素甲醚含量均比老枝中的低，首烏藤嫩、中、老枝、中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚含量均有差異。老枝中二苯乙烯苷的含量高于藥典規(guī)定，中、嫩枝中低于藥典規(guī)定，而混合樣的二苯乙烯苷含量均高于嫩，中枝的二苯乙烯苷含量，但遠(yuǎn)小于老枝中二苯乙烯苷的含量，故為保證首烏藤的質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)，在其采收過程中，更應(yīng)保留老、中枝部位。

(5)本實(shí)驗(yàn)只測定并比較了同一產(chǎn)地來源的首烏藤嫩、中、老枝的主要有效成分含量，并未對不同產(chǎn)地首烏藤不同部位二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚含量進(jìn)行測定比較。由于不同產(chǎn)地首烏藤中大黃素的含量有顯著差異[13]。對于其他產(chǎn)地首烏藤不同部位有效成分含量是否符合這一趨勢，需要進(jìn)一步研究。

通過實(shí)驗(yàn)研究測得了首烏藤嫩、中、老枝部位及混合樣中二苯乙烯苷，大黃素，大黃素甲醚的含量，并比較首烏藤不同部位與其有效成分含量之間的關(guān)系。以二苯乙烯苷為質(zhì)量指標(biāo)，只有首烏藤老枝，混合樣符合藥典規(guī)定限量，嫩枝，中枝部位均低于藥典規(guī)定限量。隨著首烏藤由嫩莖部位向老莖部位延伸，其中二苯乙烯苷，大黃素和大黃素甲醚的含量呈逐漸升高趨勢。因而在實(shí)際的采收過程中應(yīng)重視老、中枝的利用，保證首烏藤符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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Study of effective components in different parts ofCaulisPolygoniMultiflori

LIAOLi1,HUANGQian1,CHENSheng-li3,LIAOGuang-xing4,LINBing1,2*

1.CollegeofpharmacyinGuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China; 2.ThedevelopmenttechnologyresearchcenterofmedicinalandedibleplantresourcesinGuizhouProvince,Guiyang,Guizhou550025,China; 3.QihebiologicaltechnologycompanyinGuizhou,Guiyang,Guizhou550081,China; 4.QiHecooperativeinMeitan,Meitan,Guizhou564100,China)

To study and compare contents of active ingredientsin different parts ofCaulisPolygoniMultiflori, include 2,3,5,4，-tetrahydroxy stilbene-2-O- β-D-glucoside(THSG),emodin and emodin-3-methyl ether. Heating reflux extraction and preparation method was adopted for the test. Contents of THSG, emodin and emodin-3-methyl ether inCaulisPolygoniMultifloriwasdetermined by high performance liquid chromatography. Results: THSG content inshoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.016%, 0.147% and 0.516%, respectively. The content of emodin in shoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.112, 0.116, 0.235 mg/g, respectively.The content of emodin-3-methyl ether in shoots, normal branch and old branches ofCaulisPolygoniMultifloriwere 0.299, 0.584, 0.747 mg/g, respectively. THSG, emodin and emodin-3-methyl ether contents in different parts ofCaulisPolygoniMultiflorihave significant difference. The content inold branches are more than that in shoots andnormal branch. The trend of three kinds of components in different parts ofCaulisPolygoniMultifloriisconsistent, thusthe old and normal branches should be harvested intentionally.

CaulisPolygoniMultiflori, THSG, Emodin, Emodin-3-methyl ether

2016-06-15；

2016-07-12

貴州省教育廳2015年度自然科學(xué)研究項(xiàng)目(黔教科KY字(2015)369號)；貴州省科技計(jì)劃課題(黔科合重大專項(xiàng)字[2015]6009-5)；貴州省藥食同源資源研究開發(fā)科技創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)(黔科合人才團(tuán)隊(duì)(2015)4010號)；貴州省藥食同源植物資源開發(fā)工程技術(shù)研究中心(黔科合G字(2015)4001號)；貴州省藥食兩用資源應(yīng)用開發(fā)工程實(shí)驗(yàn)室(黔發(fā)改投資(2015)542號)。

Q945.78

A

1008-0457(2016)06-0081-06 國際

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.06.014

*通訊作者：林冰(1974-)，男，博士，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；E-mail:pharm-blin@shou.com。