產(chǎn)前診斷89例羊水細(xì)胞染色體異常核型分析▲

吳漢鋒 梁景欣

(廣西貴港市婦幼保健院遺傳實驗室，貴港市 537100，E-mail：302806790@qq.com)

臨床創(chuàng)新

產(chǎn)前診斷89例羊水細(xì)胞染色體異常核型分析▲

吳漢鋒 梁景欣

(廣西貴港市婦幼保健院遺傳實驗室，貴港市 537100，E-mail：302806790@qq.com)

目的 分析妊娠中期高危孕婦羊水細(xì)胞染色體核型，減少異常染色體胎兒的出生，提高人口出生素質(zhì)。方法 符合產(chǎn)前診斷指征的孕中期孕婦2 298例，在B超引導(dǎo)下行羊水穿刺，取羊水進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)及G顯帶染色體核型分析。結(jié)果 2 298例羊水細(xì)胞培養(yǎng)，檢出異常核型89例，染色體異常檢出率為3.87%，其中常染色體異常31例，性染色體異常14例，染色體多態(tài)性為44例。結(jié)論 孕中期高危孕婦進(jìn)行羊水細(xì)胞分析能準(zhǔn)確檢出染色體異常核型，降低染色體病胎兒的出生率，提高人口出生素質(zhì)。

高危孕婦；孕中期；羊水細(xì)胞分析；染色體異常；核型；產(chǎn)前診斷

染色體病是染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)發(fā)生異常而引發(fā)的疾病，是導(dǎo)致新生兒出生缺陷最多見的一類疾病。染色體病多表現(xiàn)為智力低下、多發(fā)畸形等，當(dāng)前尚無完全根治染色體病的方法，進(jìn)行產(chǎn)前診斷是減少染色體病發(fā)生的主要方法[1]，羊水細(xì)胞染色體核型分析是胎兒染色體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)[2]。本文對2 289例中期妊娠孕婦的羊水細(xì)胞遺傳學(xué)分析，檢出染色體異常核型89例，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年4月至2016年2月在我院優(yōu)生遺傳科門診就診，符合產(chǎn)前診斷指征的孕中期孕婦2 298例，在知情同意的情況下行羊膜腔穿刺。產(chǎn)前診斷指征包括：唐氏篩查高危、高齡妊娠、胎兒超聲檢查異常、父母雙方地貧攜帶者、不良孕產(chǎn)史等。年齡15～45歲，穿刺孕周為17～24周。

1.2 方法 術(shù)前對孕婦進(jìn)行遺傳咨詢，簽署產(chǎn)前診斷術(shù)前知情同意書；穿刺前囑孕婦進(jìn)行適當(dāng)活動，以便獲得更多的羊水細(xì)胞。嚴(yán)格無菌消毒，在B超定位下行羊膜腔穿刺，先抽取2 ml羊水棄去不用，防止母體血污染，再抽取20 ml羊水，分別注入2個15 ml BD無菌離心管中，1 500 r/min離心10 min，留取約2 ml羊水沉淀細(xì)胞，分別加入5 ml培養(yǎng)基吹打均勻，接種于培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)7 d后換液，觀察細(xì)胞生長情況于第8～10 d傳代，當(dāng)細(xì)胞生長旺盛，羊水細(xì)胞平鋪培養(yǎng)瓶，即可進(jìn)行收獲。培養(yǎng)液采用美國Irvine Scientific公司生產(chǎn)CHANG Medium C培養(yǎng)基和廣州白云山拜迪生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的一生駿培養(yǎng)基，接種和培養(yǎng)均采用雙人雙線平行操作。 收獲前加入秋水仙素2滴(20 μg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)3 h，用細(xì)胞刮刮取羊水貼壁細(xì)胞倒入離心管中離心棄上清，加入KCl 0.075 mol/ml低滲液，37℃水浴12 min，預(yù)固定加入固定液2 ml，離心沉淀，加入固定液7 ml，輕輕混勻，靜置室溫30 min，再次離心加固定液至于4℃冰箱過夜。第2天取出離心，滴片，95℃烤箱烤1 h后進(jìn)行G顯帶染色。

1.3 核型分析 利用全自動掃描系統(tǒng)計數(shù)20個分裂相，G顯帶分析5個核型，發(fā)現(xiàn)異常則加倍計數(shù)和分析。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 2 298例孕婦行羊水細(xì)胞培養(yǎng)，首次羊膜腔穿刺培養(yǎng)失敗5例，進(jìn)行二次穿刺培養(yǎng)后均成功。檢出異常核型89例，異常檢出率為3.87%，其中常染色體異常31例，異常檢出率為1.35%；性染色體異常14例，異常檢出率為0.61%；染色體多態(tài)性為44例，異常檢出率為1.91%。見表1。

2.2 三體型分析 89例異常染色體核型中，檢出18例三體型，其中高齡妊娠9例，B超發(fā)現(xiàn)異常3例，唐氏篩查高危4例，其他指征2例，18例三體型產(chǎn)前診斷指征與妊娠結(jié)局見表2。

表1 89例羊水細(xì)胞染色體異常核型分布

表2 18例三體型產(chǎn)前診斷指征與妊娠結(jié)局

3 討 論

染色體病是導(dǎo)致新生兒出生缺陷最多見的一類遺傳性疾病，染色體病至今無法醫(yī)治，發(fā)病率相對較高，我國每年出生染色體異常的新生兒約10萬人，新生兒活嬰中染色體異常占0.5%[3]，要防止染色體病患兒的出生，在妊娠中期抽取羊水細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析，是一項準(zhǔn)確、安全的預(yù)防措施。三體型的發(fā)生與母親年齡密切相關(guān)，本文檢出三體型18例，其中≥35歲的高齡孕婦10例占55.5%(10/18)。其產(chǎn)生的原因是由于生殖細(xì)胞老化或受到某些因素的影響，在減數(shù)分裂時染色體發(fā)生不分離，當(dāng)它與正常的精子或卵子結(jié)合，就會產(chǎn)生三體型[4]。本文18例三體型，其中11例三體型患者是高齡孕婦，因此，對高齡孕婦在妊娠中期進(jìn)行產(chǎn)前診斷非常必要。

性染色體異常是人類染色體畸變的一種，主要包括數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常。數(shù)目異常有性染色體單體，主要為45，XO(Turner綜合征)；性染色體三體主要為47，XXY(克氏綜合征)；47，XYY(超雄綜合征)；47，XXX(超雌綜合征)。Turner綜合征又稱先天性卵巢發(fā)育不良，是最常見的性染色體疾病，在女性中發(fā)病率約為1/2 500，是女性原發(fā)性閉經(jīng)的重要因素，引起X染色體異常原因是患者的雙親之一的細(xì)胞分裂過程中的X染色體不分離所致[5]。 47，XXY是以睪丸發(fā)育障礙和不育為主要特征，無生育能力，精液檢查無活動精子。部分患者智力發(fā)育低于正常，為輕度智能障礙。本文有14例性染色體異常，其中8例選擇終止妊娠；1例45，XO/46，Xi(X)兒宮內(nèi)死亡；2例47，XYY繼續(xù)妊娠；3例Y倒位與父親核型相同選擇繼續(xù)妊娠。

染色體結(jié)構(gòu)異常是指染色體或染色單體經(jīng)過斷裂-重?fù)Q或互換機(jī)制可產(chǎn)生染色體畸變及染色單體畸變。本文發(fā)現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)異常15例，占異常核型的16.85%，主要有易位、染色體部分增加、缺失和倒位。檢出胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常，應(yīng)建議雙親進(jìn)行外周血染色體檢查，確定胎兒染色體異常來源[6]，若雙親染色體正常，B超提示胎兒未見異常情況，則建議繼續(xù)妊娠。本文15例結(jié)構(gòu)異常有3例選擇終止妊娠，均為染色體片段增加，影響生長發(fā)育。

染色體多態(tài)性在普通人群中的發(fā)生率為2.6%[7]。本文染色體多態(tài)性44例，發(fā)生率為1.91%。在產(chǎn)前診斷核型分析中，多態(tài)性變異很常見，如inv(9)、ps+/pstk+、1/9/16qh+等都屬于正常變異，從分子水平上看異染色質(zhì)所含DNA主要是非編碼的高度重復(fù)序列，不含有結(jié)構(gòu)基因，沒有轉(zhuǎn)錄活性，因此認(rèn)為異染色質(zhì)是多余的，無特殊功能，無表型效應(yīng)[8]。

染色體嵌合體是指同一個體內(nèi)存在兩個或兩個以上不同細(xì)胞系。嵌合體分真性嵌合和假性嵌合，前者通常發(fā)生在合子形成后卵裂或胚胎正常發(fā)育早期，部分細(xì)胞同源染色體不分離或丟失；后者則來源于不同合子的兩個或兩個以上細(xì)胞系，染色體畸變隨機(jī)發(fā)生。Hsu等[9]報告羊水細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)真性嵌合體為0.2%。本文6例嵌合體，同意進(jìn)行臍帶血復(fù)查染色體核型的僅有3例，2例染色體核型與初次相符，1例染色體為正常核型。胎兒外不重要的細(xì)胞增殖、細(xì)胞體外培養(yǎng)畸變、染色體制片等多種因素均可導(dǎo)致假性嵌合體的發(fā)生[10]，因此羊水細(xì)胞培養(yǎng)建立兩個或兩個以上的獨(dú)立培養(yǎng)基，兩名技術(shù)人員分兩線進(jìn)行操作和閱片，出現(xiàn)嵌合體現(xiàn)象時視具體情況增加細(xì)胞計數(shù)。不進(jìn)行臍帶血穿刺的嵌合體核型應(yīng)進(jìn)行隨訪，尤其是性染色體的嵌合體，隨訪時間應(yīng)延長至青春期[11]。

綜上所述，羊水染色體核型分析是檢查染色體異常和多態(tài)性的重要依據(jù)，對孕婦是否繼續(xù)妊娠具有重要的、決定性的指導(dǎo)意義[12]。對具有產(chǎn)前診斷指征者進(jìn)行羊水染色體核型分析，是提高出生人口出生素質(zhì)，控制和減少出生缺陷發(fā)生的有效措施。

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廣西貴港市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項目(貴科攻1302004)

吳漢鋒(1977～)，女，本科，主管檢驗技師，研究方向：醫(yī)學(xué)細(xì)胞遺傳學(xué)。

R 714.5

A

0253-4304(2016)07-1001-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.07.32

2016-02-10

2016-05-05)