頭孢噻吩鈉含量測定中HPLC方法的應(yīng)用研究

陳瑤

（泰州市人民醫(yī)院，江蘇泰州 225300）

頭孢噻吩鈉含量測定中HPLC方法的應(yīng)用研究

陳瑤

（泰州市人民醫(yī)院，江蘇泰州 225300）

目的探究分析頭孢噻吩鈉的臨床應(yīng)用及采用HPLC方法測量頭孢含噻吩鈉含量及所含物質(zhì)的價值。方法色譜柱：C18（4.6mm×250mm,5μm）流動相醋酸鈉溶液（采用17.0g的醋酸鈉并將其溶于790ml的水中，用冰醋酸將流動相溶液的PH值調(diào)節(jié)到5.8～6.0）—乙醇—乙腈（82∶2∶18），流動速度為：1.0ml/min，進樣量10μl，溫度：40℃。結(jié)果頭孢噻吩鈉在55.8μg/ml～464.4μg/ml之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。依據(jù)S/N＞3，進行計算，得出頭孢噻吩鈉的檢出限為3ng/mL。結(jié)論采用HPLC方法可以有效地測量出頭孢含噻吩鈉含量。

HPLC方法；頭孢噻吩鈉；含量

頭孢噻吩鈉是第一代頭孢菌素，抗菌譜比較廣泛[1-3]，此種藥物適用于治療呼吸道感染或者尿路感染以及軟組織感染等疾病。這些疾病都是由于耐藥性金黃色葡萄球菌和一些革蘭氏陰性桿菌引起的，而頭孢噻吩鈉可以對抗這兩種病菌。頭孢噻吩鈉是以抑制細胞壁合成使細胞內(nèi)物質(zhì)膨脹直至破裂溶解，從而達到清除病菌的效果的。HPLC屬于高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography）,也叫高壓液相色譜，是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上進一步研發(fā)引進了氣相色譜而得出的，高效液相色譜法最大的優(yōu)勢就是填料顆粒比較小且均勻[4]。本研究就針對HPLC在頭孢噻吩鈉含量測定中應(yīng)用的效果進行分析。

1 儀器和試藥

高效液相色譜儀（HPLC）采用HP1100高效液相色譜儀（源于美國Agilent公司）。頭孢噻吩鈉樣品（生產(chǎn)批號：020325、020327、020329）頭孢噻吩對照品（頭孢噻吩鈉計92%，中國藥品生物制品檢定所，生產(chǎn)批號為130407～200306）；其中乙腈為色譜純，醋酸鈉為分析純。色譜具有的條件：色譜柱：C18（4.6mm×250mm,5μm），流動相醋酸鈉溶液（采用17.0g的醋酸鈉并將其溶于790ml的水中，用冰醋酸將流動相溶液的PH值調(diào)節(jié)到5.8～6.0）—乙醇—乙腈（82∶2∶18）[5-6]，流動速度為：1.0ml/min，進樣量10μl，溫度：40℃。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜分離條件優(yōu)化分析檢測并考察緩沖鹽溶液濃度、PH值、有機改性劑對頭孢噻吩鈉色譜的影響，依據(jù)醋酸鹽的pKa值，選擇適當劑量的流動相醋酸鈉溶液，得出結(jié)果，醋酸鈉溶液的保留時間會隨著緩沖鹽濃度以及PH值的增大而升高，伴隨有機相的增加而PH值減小，并且流動相醋酸溶液的PH值的變化會對色譜峰的形態(tài)產(chǎn)生一定的影響。根據(jù)頭孢噻吩鈉以及相關(guān)物質(zhì)在流動相溶液作用的情況下保留的時間以及分離度和色譜峰的形態(tài)變化，選擇適合的頭孢噻吩鈉最佳色譜條件：流動相醋酸鈉溶液。

2.2 適用性實驗分析按照調(diào)配好的色譜進行實驗，頭孢噻吩對照品和頭孢噻吩鈉樣品的色譜由下圖中A、B兩條色譜圖表示，色譜圖C表示相關(guān)物質(zhì)，色譜圖D表示空白溶液。1表示頭孢噻吩鈉，2表示FACA，3、4均為是未知物質(zhì)，5表示TAC。由圖1中色譜圖的形態(tài)變化可以看出，有關(guān)物質(zhì)對測定頭孢噻吩鈉并無影響或干擾，頭孢噻吩鈉的色譜時間大約在9.2min，根據(jù)色譜柱的理論塔板數(shù)計算頭孢噻吩鈉的峰值，大約為7000，頭孢噻吩鈉色譜峰值對比最近雜志色譜的峰值，其分離度大于2.0。

圖1 色譜圖

2.3 線性范圍檢出限和測量精密度稱取頭孢噻吩對照品44.64mg，并精密測量，將其加入100ml的容器中，倒入流動相醋酸鈉溶液進行稀釋，直至稀釋溶液達到100ml刻度處，將溶液均勻搖晃，將配好的溶液作為儲備溶液；采用精密的測量方法將儲備液分為五份不同體積的溶液到20ml的容器中，以流動相溶液進行稀釋，最后得到五份不同濃度的溶液即55.8μg/ml、111.6μg/ml、223.2μg/ml、357.1μg/ml、464.4μg/ml，并將這五份溶液作為標準溶液，精確量取不同濃度的五份溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，平行3次，并記錄色譜圖。通過觀察峰值和峰面積對濃度進行計算。由線性方程可得出頭孢噻吩鈉在55.8μg/ ml～464.4μg/ml之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。依據(jù)S/N＞3，進行計算，得出頭孢噻吩鈉的檢出限為3ng/mL。經(jīng)過精確的測量量取濃度為0.21mg/ mL的頭孢噻吩對照品溶液，分析色譜圖并測定峰面積，計算得出峰面積的RSD為0.83%。

2.4 含量測量通過精密的測量稱取10mg的頭孢噻吩鈉，將其放入50ml的棕色容器瓶中，加入流動相溶液進行稀釋，直至稀釋溶液達到50ml刻度處，將溶液均勻搖晃，將配好的溶液作為供應(yīng)實驗的溶液，按照上面的方法配制出對照溶液，精確量取兩種濃度的溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，平行3次，并記錄色譜圖。結(jié)果見表1。有關(guān)物質(zhì)的測定：選取頭孢噻吩鈉10.05mg，再進行精密的測量，將其放入10ml的棕色容器瓶中，加入流動相溶液進行稀釋，直至稀釋溶液達到10ml刻度處，將溶液均勻搖晃，作為對照溶液。精確量取10μL的對照溶液和供應(yīng)實驗溶液，注入高效液相色譜儀，平行3次，并記錄色譜圖，結(jié)果見表1。

2.5 穩(wěn)定性測量實驗精確的測量同一批次的樣品，采用流動相溶液進行稀釋，將其濃度稀釋到1mg/ml，進行穩(wěn)定性測試，按照資料1中的色譜條件進行檢測，可得出結(jié)果如表2所示：

表1 有關(guān)物質(zhì)的測量

表2 穩(wěn)定性測量結(jié)果

2.6 專屬性試驗

2.6.1 酸破壞實驗稱取25mg的頭孢噻吩鈉樣品，將樣品溶于5ml的0.1mol/L的鹽酸溶液中，再將溶解的溶液放置在水溫60℃的溫水中，持續(xù)30min，而后將溶液取出，加上0.1mol/L的氫氧化鈉溶液，讓兩者進行中和反應(yīng)，再加上流動相醋酸鈉溶液（其濃度為1mg/ml），將溶解中和好的溶液按照調(diào)配好的色譜進行實驗，并記錄色譜的形態(tài)，如圖2B所示。

2.6.2 堿破壞性實驗同樣稱取25mg的頭孢噻吩鈉樣品，將樣品溶于5ml的0.1mol/L的氫氧化鈉溶液中，再將溶解的溶液放置在水溫60℃的溫水中，持續(xù)30min，而后將溶液取出，加上0.1mol/L的鹽酸溶液，讓兩者進行中和反應(yīng)，再加上流動相醋酸鈉溶液（其濃度為1mg/ml），將溶解中和好的溶液按照調(diào)配好的色譜進行實驗，并記錄色譜的形態(tài)，如圖2C中顯示。

2.6.3 高溫破壞實驗稱取25mg的頭孢噻吩鈉樣品，將樣品加入流動相醋酸鈉溶液進行稀釋，稀釋成濃度為1mg/ml，將稀釋后的溶液放入105℃的烘箱中，持續(xù)6h，而后將溶液按照調(diào)配好的色譜進行實驗，并記錄色譜的形態(tài)，如圖2D顯示。

2.6.4 氧化破壞實驗稱取25mg的頭孢噻吩鈉樣品，將樣品放到密封的容器里，并加入1ml的雙氧水（H2O2），讓兩者反應(yīng)，持續(xù)10min，再加入流動相醋酸鈉溶液，將其稀釋到濃度為1mg/ ml，而后將溶液按照調(diào)配好的色譜進行實驗，并記錄色譜的形態(tài)，如圖2E顯示。

圖2 色譜圖

結(jié)合實驗結(jié)果和圖2中的色譜形態(tài)可以得出，通過強化分解產(chǎn)生的峰態(tài)，并不影響頭孢噻吩鈉的含量測定，通過專屬性的實驗可以看出，在高溫和氧化的作用下，加大了頭孢噻吩鈉降解的程度，由圖可知色譜的峰值逐漸降低，在高溫條件的作用下，有雜質(zhì)峰出現(xiàn)，且峰值面積有所增加，噻吩-2-乙酰氯的的色譜峰的峰位與雜質(zhì)峰出現(xiàn)的位置一致，可判定噻吩-2-乙酰氯可能就是使頭孢噻吩鈉降解的物質(zhì)，這種實驗方法為研究該藥物的降解物提供了依據(jù)[5-7]。

3 討論

綜上所述，本研究以資料1中的色譜條件為基礎(chǔ)，進行了一系列的測試和實驗，得出在頭孢噻吩鈉中有兩個雜質(zhì)峰，通過專屬性的實驗，得出結(jié)果，即在一些高溫、氧化、酸堿條件的作用下，頭孢噻吩鈉的色譜峰會有不穩(wěn)定的現(xiàn)象。采用醋酸鈉溶液作為流動相溶液，其結(jié)果顯示色譜峰的形態(tài)和分離效果比較明顯，但是流動相溶液組分的色譜條件還是比較復雜。最終可得出結(jié)論，采用HPLC方法可以有效測量出頭孢含噻吩鈉含量。

[1]高景會,史靜杰,王蕊,等.HPLC和MS法研究頭孢噻吩鈉有關(guān)物質(zhì)的種類與含量[J].中國藥師,2016,19 (2)：274-276.

[2]李玲玲,周勁康.HPLC法測定頭孢噻吩鈉含量的改進[J].今日藥學,2014(12):873-874.

[3]李蔚,朱捷,張妍.注射用頭孢噻吩鈉含量測定及與3種大輸液的配伍穩(wěn)定性分析[J].第三軍醫(yī)大學學報,2011(12):1313-1314.

[4]張輝,呂文博.高效液相色譜法測定注射用拉氧頭孢鈉含量[J].科學中國人,2014(12)：178.

[5]劉守瓊,汪健,姚迅,等.HPLC法同時測定頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉注射劑中頭孢哌酮鈉和舒巴坦鈉含量[J].中外食品工業(yè):下,2015(3)：41-42.

[6]董超琪,袁華峰,屈蓉.高效液相色譜法測定注射用頭孢曲松鈉含量的不確定度評定[J].中國藥業(yè), 2014(22):45-47.

[7]劉亞妮,馬林,劉金梅,等.高效液相色譜法測定人血漿中頭孢替坦二鈉含量的不確定度[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2013(20):1695-1698.

（責任編輯 楊荔晴）

Application of HPLC Method for Determination the Content of Cefalotin Sodium

CHEN Yao
(Taizhou People’s Hospital,Taizhou Jiangsu 225300,China)

Objective To explore the value of the HPLC method for the determination of the content and the content of the sodium containing thiophene.Methods Column:C18(4.6mm*250mm,5 m)mobile phase(so?dium acetate solution with sodium acetate 17.0g and its soluble 790ml with acetic acid water,the mobile phase pH value of the solution is adjusted to 5.8-6.0)ethanol acetonitrile(82:2:18),flow rate:1.0ml/min,in the sam?ple volume of 10 m,temperature:40 degrees.Results A good linear relationship was found between 55.8 g/m and 464.4 g/ml.According to S/N>3,calculation,the detection limit of the detection of the sodium is 3ng/ mL.ConclusionThe HPLC method can be used to effectively measure the content of the sodium containing thiophene.

HPLC method;cefalotin sodium;content

R927.2

A

1671-0142（2016）06-0051-03

陳瑤（1987-）,女,江蘇泰州人,主管藥師.