普洱茶水浸液對脫礦牙釉質再礦化的掃描電鏡觀察

楊華甫，田富明，梁迎東，陳 瑩，藍 海

（大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000）

普洱茶水浸液對脫礦牙釉質再礦化的掃描電鏡觀察

楊華甫，田富明，梁迎東，陳 瑩，藍 海*

（大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000）

目的：觀察普洱茶生茶、熟茶不同濃度水浸提取液處理人工齲后的表面形態(tài)，為天然防齲藥物的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。方法：利用化學試劑人工培養(yǎng)釉質脫礦模型，以水為提取液分別提取生茶、熟茶96、48、24、12、6 mg∕mL為實驗溶液，20 mg∕mL氟化鈉為陽性對照，去離子水為陰性對照，共分為12組，經(jīng)體外pH循環(huán)后在掃描電鏡下觀察。結果：生茶組和熟茶組均隨著濃度的增加牙釉質表面的沉積物越多越均勻致密，達96 mg∕mL時有大量規(guī)則的結晶生成，熟茶組比生茶組的沉積物更多更厚。氟化鈉組大量的固體物質沉積，但結晶不緊密；去離子水組也有少許稀疏的沉積物，表面不平整，和脫礦后的差別不大。結論：普洱茶生茶和熟茶水提取液均對人工脫礦釉質有再礦化作用，但低濃度效果不明顯。

普洱茶；脫礦；再礦化；掃描電鏡

齲病已被公認為世界上一種最常見的慢性感染性疾病，它是發(fā)生于牙齒硬組織中的一種疾病，我國人群患齲齒率為40%，在各種疾病的發(fā)病率中位居前列，而且分布較為廣泛。其發(fā)病機制為：口腔中的常駐變形鏈球菌和血鏈球菌通過發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)生酸性物質，使菌斑的pH下降到5以下從而導致牙齒硬組織的酸蝕而脫礦，有機物分解至齲損形成〔1〕。

普洱茶是山茶科山茶屬多年生、常綠、大葉種喬木。普洱茶含有茶多酚、茶生物堿、茶氨酸、礦質元素、維生素、氟化物等生理活性物質〔2〕，其中茶多酚是普洱茶最主要的活性成分，鄒盛勤通過實驗證實，茶多酚有抑菌抗炎、抗菌防齲的作用〔3〕。茶葉中氟的質量分數(shù)高達1×10-4～2×10-4，遠高于其他植物。氟能增強牙釉質結構，提高其抗酸能力，達到預防齲齒的目的。本實驗通過掃描電鏡觀察普洱生茶、熟茶處理牙釉質齲表面，比較各種溶液處理下釉質表面結構變化，探索普洱茶對釉質齲的再礦化作用。

1 材料

1.1儀器YMP-2B金相試樣磨拋機（蘇州歐卡精密光學儀器有限公司）；電子天平（波特樂-托利多儀器有限公司）；303-A-I型熱點恒溫培養(yǎng)箱（蕭山永發(fā)電氣有限公司）；pH-25數(shù)字酸度計（上海鵬順科學儀器有限公司）；SY5200D超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；S-3400N型掃描電鏡（日立）。

1.2藥品普洱生茶、熟茶均購于大理沃爾瑪超市，由普洱市圣普茶葉有限公司生產(chǎn)的圣邦普洱茶禮盒（2011年5月28日生產(chǎn)）。

1.3試劑CaCl2、NaH2PO4、CH3COOH、KCl、NaOH、生理鹽水、去離子水，以上試劑均為分析純。

1.4脫礦液、再礦化液的配制脫礦液2.2 mmol∕L CaCl2，2.2 mmol∕L NaH2PO4，50 mmol∕L CH3COOH，用CH3COOH調至pH為4.5。再礦化液：1.5mmol∕LCaCl2，0.9 mmol∕L NaH2PO4，0.15 mol∕L KCl，用KOH調至pH為7.0〔4〕。

1.5實驗溶液的配制稱取普洱生茶19.20 g裝入燒杯中加入250 mL去離子水，煮沸1 min，得到200 mL的茶水（因茶葉在沸水中展開要吸收一部分水以及水沸騰蒸發(fā)一部分，所以得到大約200 mL茶水），冷卻至室溫，然后倍比稀釋得到96、48、24、12、6 mg∕mL的生茶溶液，同法制得熟茶各濃度的實驗溶液，密封保存。

2 方法

2.1脫礦標本的制備市場購買新鮮牛切牙100顆從牙頸部截去牙根取出牙髓和軟組織，用水清洗干凈后用超聲清洗5 min，在陰暗處晾干，用拋光機和碳化硅砂紙在流水條件下一次磨平，挑選出無齲齒、氟斑、裂痕的牙齒84顆，開窗3 mm×3 mm，其余部分用無色抗酸指甲油封住。放入100 mL的脫礦液中，置于恒溫箱中37℃恒溫10 d，換液5 d∕次。

2.2體外pH循環(huán)將標本隨機分為12組并進行編號，每組7顆進行體外pH循環(huán)。過程為：先用100 mL的脫礦液處理4 h，然后分別用100 mL的實驗溶液處理6 h，再浸入100 mL的再礦化中過夜，每換一種溶液前用大量的蒸餾水振蕩沖洗5 min，連續(xù)循環(huán)10 d。用肉眼和掃描電鏡觀察脫礦表面〔5〕。

3 結果

3.1肉眼觀察牙齒釉質表面平整，普洱茶溶液組開窗區(qū)域變?yōu)榧t棕色，并且隨著濃度的增加而顏色加深，熟茶組比生茶組顏色深，而氟化鈉和去離子水組表面顏色沒有明顯變化。

3.2掃描電鏡觀察生茶組和熟茶組均隨著濃度的增加牙釉質表面的沉積物越多越均勻致密，達96 mg∕mL時有大量規(guī)則的結晶生成，但從圖中可看出，熟茶組比生茶組的沉積物更多更厚。氟化鈉組大量的固體物質沉積，但結晶不緊密；去離子水組也有少許稀疏的沉積物，表面不平整，和脫礦后差別不大。見圖1。

圖1 不同濃度處理液處理脫礦牙釉質表面掃描電鏡觀察結果（×5.00 K,SE）

4 討論

牙齒每天都在進行脫礦和再礦化的過程并保持動態(tài)平衡。在此過程中，如果脫礦占據(jù)主導作用，將會導致牙釉質缺損。相反，如果再礦化占據(jù)主導作用，牙釉質處于一個被修復的過程〔6〕。如果一個藥物只要對脫礦過程有抑制或對再礦化過程有促進作用，那么這個藥物就對牙釉質礦化方面有積極作用，進而抑制齲病的發(fā)生發(fā)展〔7〕。

通過掃描電鏡圖像提示，普洱茶生茶、熟茶均對牙齒有再礦化作用，但熟茶再礦化作用明顯優(yōu)于生茶。有文獻報道，熟茶的最高氟含量是生茶的32.7倍〔8〕，而氟能使牙釉質的主要成分羥基磷灰石生成穩(wěn)定性強、晶格更小、硬度更高的氟磷灰石，使牙釉質表面存在的脫礦-再礦化這一可逆的生物化學反應向著再礦化方向進行〔9〕，利于防齲。另外，普洱熟茶在發(fā)酵的過程中形成了大量的茶褐素較未發(fā)酵普洱生茶提高了8.23倍〔10-11〕，而茶褐素可以和再礦化液中Ca2+結合〔12〕，形成難溶的配位復合物，因此也有利于再礦化。但飲茶濃度過高，對牙齒的著色影響程度大，影響美觀。

〔1〕BANKOVA V S，DE CASTRO S L，MARCUCCI M C. Propolis：recent advances in chemistry and plant origin〔J〕. Apidologie，2000，31（1）：3-15.

〔2〕張新富，龔加順，周紅杰，等.云南普洱茶中多酚類物質與品質的關系研究〔J〕.食品科學，2008，29（4）：230-233.

〔3〕鄒盛勤.茶葉的藥用成分、藥理作用及應用研究進展〔J〕.中國茶葉加工，2004（3）：35-37.

〔4〕楊曉莉，王芳芹，張俊，等.紫地榆不同溶劑提取物對防齲活性部位的研究〔J〕.中成藥，2014，36（10）：2074-2078.

〔5〕陳菲菲，汪大照，張向宇，等.五倍子牙膏對釉質礦化作用的影響〔J〕.口腔醫(yī)學研究，2011，27（4）：269-271.

〔6〕COULTHWAITE L，PRETTY I A，SMITH P W，et al. The microbiological origin of fluorescence observed in plaque on dentures during QLF analysis〔J〕.Caries Res，2006，40（2）：112-116.

〔7〕李新尚，馮錦虹，林靜，等.維藥沒食子對牙釉質脫礦與再礦化作用的掃描電鏡觀察〔J〕.中華老年口腔醫(yī)學雜志，2011，9（5）：261-264.

〔8〕王白娟，趙艷，戴富強，等.云南普洱茶氟含量研究〔J〕.廣東農(nóng)業(yè)科學，2010，37（5）：45-46.

〔9〕房思思，張麗萍，劉璐.氟的生物學作用：氟對骨的作用〔J〕.微量元素與健康研究，2011，28（4）：62-64.

〔10〕周斌星，孔令波，李發(fā)志.普洱茶（熟茶）發(fā)酵過程中不同堆層主要生化成分的變化〔J〕.江西農(nóng)業(yè)學報，2010，22（7）：63-68.

〔11〕房賢坤，陳杰，姜吉，等.普洱生茶快速發(fā)酵法制備茶褐素〔J〕.大連工業(yè)大學學報，2012，31（2）：103-106.

〔12〕周花香.普洱茶茶褐素與褐煤黃腐酸對金屬離子絡合作用的對比研究〔D〕.昆明：昆明理工大學，2012.

Scanning Electron Microscopic Observation of the Remineralization Effect of Pu'er Tea Aqueous Extract on Demineralized Enamel

Yang Huafu,Tian Fuming,Liang Yingdong,Chen Ying,Lan Hai*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To observe the surface of artificial caries that treated by different concentration of raw and ripe Pu'er tea aqueous extracts for providing a theoretical basis for the research and development of natural anti-caries drug.Methods: Demineralizated enamel cultured by chemical reagents was used as model.With water as the extract,raw and ripe tea with 96，48，24，12，6 mg∕mL were used as test solution.20 mg∕mL NaF as the positive control group and deionized water as the negative control group were divided into 12 groups and observed by scanning electron microscopy after pH extracorporeal circulation.Results:With the increasing concentration of raw and ripe tea,the sediments on enamel surface were more uniform and compact and a large number of regular crystallization generated when the concentration reached up to 96 mg∕mL,and ripe tea group had more and thicker sediments than raw tea;NaF group also had a lot of sediments,but was not compact;deionized water group only had a few sparse sediments with uneven surface,and had little difference after demineralization.Conclusion:Raw and ripe Pu'er tea aqueous extract had the remineralization effect on artificial demineralized enamel,but the low concentration was ineffective.

Pu'er tea;demineralization;remineralization;scanning electron microscope

R780.1

A

2096-2266（2016）12-0050-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2016.12.012

（責任編輯 李 楊）

大理大學大學生科研基金資助項目（KYSX20155096）

2016-02-29

2016-04-11

楊華甫，2012級藥物制劑專業(yè)本科生. *通信作者：藍海，教授.