scFv-LAA0融合蛋白的制備及對(duì)人肺腺癌細(xì)胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用觀察

楊光勇，郭海濤，劉茜明，何光志

(貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽550002)

scFv-LAA0融合蛋白的制備及對(duì)人肺腺癌細(xì)胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用觀察

楊光勇，郭海濤，劉茜明，何光志

(貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽550002)

目的 制備重組抗白介素4受體(IL-4R)單鏈抗體基因與竹葉青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)的融合蛋白(scFv-LAAO融合蛋白)，并觀察其對(duì)人肺腺癌細(xì)胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用。方法 ①采用重疊延伸PCR技術(shù)將抗IL-4R單鏈抗體與竹葉青蛇毒LAAO基因連接成scFv-LAAO融合基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-scFv-LAAO，轉(zhuǎn)染BL21(DE3)原核表達(dá)菌，誘導(dǎo)表達(dá)scFv-LAAO融合蛋白，用SDS-PAGE法檢測(cè)scFv-LAAO融合蛋白的分子量，用Western blotting法檢測(cè)scFv-LAAO融合蛋白的His-tag表達(dá)。②設(shè)空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組和融合蛋白組(包括高、中、低劑量融合蛋白組)，分別用培養(yǎng)基、2.0 mg/mL環(huán)磷酰胺及4.0、2.0、1.0 mg/mL的scFv-LAAO融合蛋白培養(yǎng)人肺腺癌H460細(xì)胞，用MTT法測(cè)算環(huán)磷酰胺組和高、中、低劑量融合蛋白組細(xì)胞增殖抑制率。取75只小鼠，建立荷肺腺癌動(dòng)物模型，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組和融合蛋白組(包括高、中、低劑量融合蛋白組)，分別腹腔注射生理鹽水、0.1 mL/10 g體質(zhì)量的環(huán)磷酰胺和100、50和20 mg/kg的scFv-LAAO融合蛋白，1次/d，連用10 d后停藥，停藥7 d后稱量各組小鼠瘤重，計(jì)算環(huán)磷酰胺組和高、中、低各劑量融合蛋白組抑瘤率；同時(shí)統(tǒng)計(jì)存活時(shí)間。結(jié)果 scFv-LAAO融合基因長(zhǎng)度2 000～3 000 bp。用融合基因轉(zhuǎn)染BL21(DE3)原核表達(dá)菌后，將細(xì)菌裂解從裂解液中分離出的蛋白分子量86 kD，與scFv-LAAO融合蛋白分子量相符，且用Western blotting法在分離到的蛋白中檢出scFv-LAAO融合蛋白組氨酸標(biāo)簽。環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組人肺腺癌H460細(xì)胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存時(shí)間相比，P均>0.05；環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存時(shí)間高于低、中劑量融合蛋白組，P均<0.05；低劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存時(shí)間低于中劑量融合蛋白組，P均<0.05。結(jié)論 成功制備scFv-LAAO融合蛋白。scFv-LAAO融合蛋白可以抑制人肺腺癌細(xì)胞H460、小鼠肺腺癌增殖。

抗白介素4受體單鏈抗體；竹葉青蛇毒LAAO；白細(xì)胞肺腫瘤；肺腺癌；細(xì)胞增殖

竹葉青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)對(duì)多種癌細(xì)胞具有直接殺傷和誘導(dǎo)調(diào)亡的作用，但對(duì)正常細(xì)胞也有殺傷作用[1]；白介素4受體(IL-4R)在癌細(xì)胞上特異性過度表達(dá)，是抗癌藥物作用的良好靶標(biāo)[2]。構(gòu)建抗IL-4R單鏈抗體與竹葉青蛇毒LAAO的融合蛋白，有助于實(shí)現(xiàn)竹葉青蛇毒LAAO對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷。目前尚未有構(gòu)建抗IL-4R單鏈抗體與竹葉青蛇毒LAAO的融合蛋白，并將其用于靶向治療肺腺癌的相關(guān)報(bào)道。本研究采用分子生物學(xué)手段將編碼抗IL-4R單鏈抗體片段基因(scFv)和編碼竹葉青蛇毒LAAO的基因構(gòu)建成復(fù)合基因scFv-LAAO，插入載體pET-28a使BL21(DE3)原核表達(dá)菌表達(dá)融合蛋白，并觀察scFv-LAAO融合蛋白對(duì)人肺腺癌細(xì)胞H460、小鼠肺腺癌增殖抑制作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 E.coli BL21(DE3)由本實(shí)驗(yàn)室保存。pET-28a由上海英駿生物公司提供。Anti-6×His tag抗體 (HRP)與Rabbit anti-mouse antibody購(gòu)自Abcam公司?？敲顾刭?gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司，XhoⅠ內(nèi)切酶與EcoRⅠ內(nèi)切酶購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司。SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、考馬斯亮藍(lán)R250與ECL Plus熒光檢測(cè)試劑ECL超敏發(fā)光液、蛋白Marker PR1800、4×蛋白上樣緩沖液 購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司。PVDF膜購(gòu)自Millipore公司；健康昆系小鼠(4～6周齡、體質(zhì)量18～20 g、雄性、清潔級(jí))和人肺腺癌細(xì)胞株H460購(gòu)自中科院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2 scFv-LAAO融合蛋白的制備

1.2.1 竹葉青蛇毒LAAO基因設(shè)計(jì)與合成 竹葉青蛇毒LAAO基因序列已在之前的實(shí)驗(yàn)中得到，見參考文獻(xiàn)[3]，在LAAO序列5′端加上帶有一段與抗IL-4R單鏈抗體scFv基因序列相同的重疊序列(40 bp)以及一段連接肽基因，另外在重疊序列-linker-LAAO基因序列的3′端加上XhoⅠ酶切位點(diǎn)。

1.2.2 引物設(shè)計(jì) 設(shè)計(jì)引物F1和引物F2去除抗IL-4R單鏈抗體scFv基因序列的Xho I酶切位點(diǎn)；設(shè)計(jì)引物F1和F3，通過重疊延伸RCR(SOE-PCR)技術(shù)連接抗IL-4R單鏈抗體(scFv)與竹葉青蛇毒LAAO基因成融合基因scFv-LAAO。委托上海英俊生物公司合成的引物序列如下：引物F1：5′-GAATTCATGGCCCAGGTCCAGCT-3′；引物F2：5′-GCTGAAACGGGCGGCCGCAGAA-3′；引物F3：5′-ATGACGATGAACTTTAACTCGAG-3′。

1.2.3 scFv與竹葉青蛇毒LAAO基因的連接 參考文獻(xiàn)[4]方法制備scFv基因，其5′端帶有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)。與LAAO連接之前用引物F1、F2去除XhoⅠ酶切位點(diǎn)，反應(yīng)體系參照參考文獻(xiàn)[5]。scFv與LAAO的SOE-PCR反應(yīng)體系參照參考文獻(xiàn)[5]，PCR產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳并用膠回收試劑盒回收基因片段。

1.2.4 pET-28a載體/scFv-LAAO基因片段的雙酶切與目的片段回收 反應(yīng)體系參照參考文獻(xiàn)[5]，雙酶切體系按照限制性內(nèi)切酶XhoⅠ與EcoRⅠ說明書操作。取酶切得到的scFv-LAAO基因片段進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳分別回收目的片段。按照同樣方法對(duì)pET-28a載體進(jìn)行雙酶切和回收目的片段。

1.2.5 重組質(zhì)粒pET-28a-scFv-LAAO的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化 按照快速DNA連接試劑盒說明書連接pET-28a-scFv-LAAO融合基因，反應(yīng)體系參照其說明書。參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》[6]，將pET-28a重組質(zhì)粒scFv-LAAO導(dǎo)入E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，復(fù)蘇后進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.6 重組質(zhì)粒酶切鑒定鑒定 挑取10個(gè)單菌落用裝有15 mL的TB培養(yǎng)液(卡那霉素50 μg/mL)的100 mL培養(yǎng)瓶中，于37 ℃環(huán)境下震蕩培養(yǎng)至OD600為0.6～0.8，用高純質(zhì)粒小量制備試劑盒提取質(zhì)粒。先后用限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和XhoⅠ對(duì)該質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定；將成功酶切的質(zhì)粒送上海英駿生物公司測(cè)序，利用DNA Star7.10軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行蛋白質(zhì)氨基酸序列翻譯，并對(duì)翻譯結(jié)果進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。

1.2.7 重組毒素scFv-LAAO抗體蛋白的誘導(dǎo)表達(dá) 以參考文獻(xiàn)[7,8]及Novagen公司的pET系統(tǒng)操作手冊(cè)為指導(dǎo)。挑取平板上的單個(gè)菌落接種至裝有10 mL的TB培養(yǎng)基(含卡那霉素50 μg/mL)的50 mL錐形瓶中于37 ℃ 振蕩培養(yǎng)至OD600為0.4～0.6， 加入終濃度為1 mmol/L的IPTG，于37 ℃ 快速振蕩培養(yǎng)誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)3 h。

1.2.8 scFv-LAAO融合蛋白鑒定 以參考文獻(xiàn)[8]為指導(dǎo)，將誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)3 h的菌體裂解并離心，將上清液和沉淀溶解液分別進(jìn)行SDS-PAGE分析。確定為可溶性表達(dá)后，取100 μL上清液取加入20 μL的4×蛋白上樣緩沖液(含DTT)混合，于沸水中加熱使蛋白變性，冷卻至常溫后進(jìn)行離心，取上清液用SDS-PAGE方法分離樣品中的蛋白。進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)所得蛋白分子量并用Western blotting法檢測(cè) scFv-LAAO融合蛋白組氨酸標(biāo)簽。

1.3 不同濃度scFv-LAAO融合蛋白培養(yǎng)的人肺腺癌H460細(xì)胞增殖情況觀察 采用MTT法。用低血清RPMI1640 培養(yǎng)基將培養(yǎng)的人肺腺癌細(xì)胞株H460稀釋至(1～2)×105/mL，每孔 100 μL接種于 96 孔培養(yǎng)板，在5%的CO2濃度培養(yǎng)箱中于37 ℃培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后棄培養(yǎng)液。設(shè)空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組和融合蛋白組(包括高、中、低劑量融合蛋白組，分別加入含scFv-LAAO融合蛋白R(shí)PMI1640培養(yǎng)基用低終濃度為4.0、2.0、1.0 mg/mL)?？瞻讓?duì)照組加入等量的RPMI1640 培養(yǎng)基。每組每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行孔，培養(yǎng)4 h取出培養(yǎng)板，每孔加入50 μL的MTT(1 mg/mL), 4 h后棄MTT，加入DMSO 100 μL/孔溶解formazan結(jié)晶。環(huán)磷酰胺組用藥劑量終濃度為2.0 mg/mL，處理方法同融合蛋白組。用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組每孔的OD490值，根據(jù)OD490值各組增殖抑制率。增殖抑制率(%)=[(對(duì)照組OD值-藥物作用組OD值)/對(duì)照組OD值] ×100%。

1.4 不同濃度scFv-LAAO融合蛋白腹腔注射后荷人肺腺癌小鼠的抑瘤率和存活時(shí)間觀察 將75只健康昆系小鼠動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組和融合蛋白組(包括高、中、低劑量融合蛋白組)，每組15只。將人肺癌H460細(xì)胞復(fù)蘇后進(jìn)行培養(yǎng)，調(diào)整活細(xì)胞數(shù)至1×106/mL，在小鼠右腋下注射接種0.2 mL/只，3周后荷瘤肺癌小鼠出現(xiàn)腫塊。高、中、低劑量融合蛋白組小鼠腹腔注射scFv-LAAO融合蛋白100、50和20 mg/kg；環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰胺10 mg/kg，用量為0.1 mL/10 g體質(zhì)量。各組每天給藥1次，連續(xù)10 d。停藥第7 d后，每組處死5只小鼠，剖取瘤塊進(jìn)行稱重。腫瘤抑制率(%)=(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%。余下小鼠停藥后，繼續(xù)觀察小鼠存活天數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 scFv-LAAO融合蛋白的構(gòu)建結(jié)果 對(duì)通過SOE-PCR連接的scFv-LAAO基因進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果在2 000～3 000 bp有一條明顯的條帶，與預(yù)期2 355 bp長(zhǎng)度相似，表明scFv與LAAO兩段基因連接成功。用限制性內(nèi)切酶XhoⅠ和EcoRⅠ對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳后在2 000～3 000 bp有一條明顯的條帶，符合插入的scFv-LAAO片段大小。將成功酶切的質(zhì)粒送上海英駿生物公司測(cè)序，通過Geneious9.1.2軟件分析scFv-LAAO序列共計(jì)2 355 bp，利用DNA Star7.10軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行蛋白質(zhì)氨基酸序列翻譯，結(jié)果scFv-LAAO序列能編碼785個(gè)氨基酸，蛋白分子量在86 kD左右?？捡R斯亮藍(lán)染色結(jié)果表明分離到的蛋白以可溶性形式表達(dá)，分子量為86 kD。Western blotting法檢測(cè)到分離到的蛋白的scFv-LAAO融合蛋白組氨酸標(biāo)簽。

2.2 各組人肺腺癌H460細(xì)胞增殖抑制率比較 環(huán)磷酰胺組和低、中、高劑量融合蛋白組人肺腺癌H460細(xì)胞增殖抑制率分別為55.29%±0.83%、25.88%±0.57%、52.35%±0.57%、59.41%±0.57%，環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率相比，P>0.05；環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率高于低、中劑量融合蛋白組，P均<0.05；低劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率低于中劑量融合蛋白組，P均<0.05。

2.3 各組小鼠的抑瘤率和存活時(shí)間比較 環(huán)磷酰胺組和低、中、高劑量融合蛋白組小鼠抑瘤率和存活時(shí)間見表1。環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組小鼠抑瘤率、存活時(shí)間相比，P均>0.05；環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組抑瘤率、存活時(shí)間高于低、中劑量融合蛋白組，P均<0.05；低劑量融合蛋白組抑瘤率、存活時(shí)間低于中劑量融合蛋白組，P均<0.05。

表1 環(huán)磷酰胺組和低、中、高劑量融合蛋白組小鼠抑瘤率和存活時(shí)間比較±s)

3 討論

將兩段基因連接形成新的融合基因最常用的和效果最好的方法為SOE-PCR，這項(xiàng)技術(shù)在醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)研究等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[9～11]。SOE-PCR的主要原理是用PCR方法將兩段基因擴(kuò)增出一段長(zhǎng)約40 bp的堿基序列重疊區(qū)，再通過兩段基因的上、下游引物進(jìn)行連接與擴(kuò)增[12～14]。因竹葉青蛇毒LAAO基因是由人工合成的，故在LAAO基因的5′端設(shè)計(jì)了與scFv的3′端的重疊區(qū)，作為兩段基因的連接橋梁，同時(shí)在基因序列3′端加上了XhoⅠ酶切位點(diǎn)，還加上了一條連接肽保證蛋白形成時(shí)正確空間折疊。以上修改簡(jiǎn)化了SOE-PCR的操作過程和引物設(shè)計(jì)，其中40 bp堿基序列重疊區(qū)的長(zhǎng)度有利于兩段基因的成功連接[14]。scFv對(duì)腫瘤組織的穿透力強(qiáng)，可以與其他效應(yīng)分子連接成抗腫瘤融合蛋白等特點(diǎn)，是保持抗體親和性和特異性的最小功能性抗體片段[15,16]，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)研究領(lǐng)域。本研究結(jié)果顯示，IL-4R單鏈抗體與scFv-LAAO融合基因長(zhǎng)度2 000～3 000 bp。用融合基因轉(zhuǎn)染BL21(DE3)原核表達(dá)菌后，從細(xì)菌培養(yǎng)液上清中分離出的蛋白分子量86 kD，與scFv-LAAO融合蛋白分子量相符，且用Western blotting法在分離到的蛋白中檢出scFv-LAAO融合蛋白組氨酸標(biāo)簽。表明我們成功將scFv與竹葉青蛇毒LAAO基因通過SOE-PCR技術(shù)進(jìn)行連接，用pET28a載體搭載scFv-LAAO融合基因，最后利用BL21(DE3)表達(dá)菌表達(dá)出了scFv-LAAO融合蛋白。

研究表明，蛇毒中的LAAO是一種有潛力的抗腫瘤制劑，將其開發(fā)為一種新型的抗腫瘤藥具有廣闊的臨床應(yīng)用前景[3,17]。張玉潔等[18]分離純化竹葉青蛇毒LAAO，發(fā)現(xiàn)其具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡和抗菌作用；重組竹葉青蛇毒LAAO對(duì)腫瘤細(xì)胞有顯著的增殖抑制殖作用[1]。然而，竹葉青蛇毒LAAO對(duì)腫瘤殺傷作用沒有選擇性。而IL-4R在癌細(xì)胞上特異性過度表達(dá)，是抗癌藥物的良好靶標(biāo)[2]。因此，本研究結(jié)合兩者的特性，制備了scFv-LAAO融合蛋白，并觀察其體內(nèi)外抗癌作用。本研究結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺組和高劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存時(shí)間高于低、中劑量融合蛋白組；低劑量融合蛋白組H460細(xì)胞增殖抑制率、小鼠抑瘤率和生存時(shí)間低于中劑量融合蛋白組。表明scFv-LAAO融合蛋白在體內(nèi)外均有抗肺腺癌作用。筆者認(rèn)為scFv-LAAO融合蛋白的抗癌機(jī)制為，通過其抗IL-4R單鏈抗體svFv部分選擇性結(jié)合腫瘤細(xì)胞上的IL-4R，并通過竹葉青蛇毒LAAO部分發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。scFv-LAAO融合蛋白具有一定抗腫瘤作用，可進(jìn)一步研究其作用機(jī)制與效果，開發(fā)新型的抗癌藥或診斷試劑。scFv-LAAO融合蛋白相比目前市場(chǎng)上的單克隆抗體，對(duì)抗原的親和力高，分子量小,細(xì)胞膜穿透力強(qiáng)，易滲透腫瘤組織，抗原性弱，排異反應(yīng)小。本研究為開發(fā)利用scFv-LAAO融合蛋白提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為進(jìn)一步研制新型的抗腫瘤藥物打下了良好的基礎(chǔ)。

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Preparation of scFv-LAAO fusion protein and its anti-proliferative effect on human lung adenocarcinoma H460 cells and mouse lung adenocarcinoma cells

YANGGuangyong,GUOHaitao,LIUQianming,HEGuangzhi

(GuiYangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang550002,China)

Objective To prepare the fusion protein of recombinant anti-interleukin-4 receptor (IL-4R) single antibody gene and Trimeresurus stejnegeri venom L-amino acid oxidase (LAAO) gene (scFv-LAAO fusion protein), and then to observed its anti-proliferative effect on human lung adenocarcinoma H460 cells and mouse pulmonary adenocarcinoma cells. Methods ① We connected IL-4R scFv gene and LAAO gene to make the scFv-LAAO fusion gene by splicing overlapping extension PCR (SOE-PCR), constructed the pET28a-scFv-LAAO recombinant plasmid, and then used the plasmid to transfect the BL21(DE3) prokaryotic expression bacterium and induced it to express the scFv-LAAO fusion protein. The molecular weight of scFv-LAAO fusion protein was detected by SDS-PAGE, and the expression of His-tag of scFv-LAAO fusion protein was detected by Western blotting. ② Setting the control group, cyclophosphamide group and fusion protein group (including high-dose group, medium-dose group and low-dose group), and in the six groups we separately cultured the human lung adenocarcinoma cells H460 with cell culture medium, cyclophosphamide (2.0 mg/mL), and scFv-LAAO fusion protein (4.0, 2.0 and 1.0 mg/mL). We detected and calculated the inhibition rates of cell proliferation of the cyclophosphamide group and fusion protein group (high-dose group, medium-dose group and low-dose group) by MTT. Seventy-five mice were selected to establish the animal models of lung adenocarcinoma, and then were randomly divided into the control group, cyclophosphamide group and fusion protein group (including high-dose group, medium-dose group and low-dose group), and the six groups were separately given physiological saline, cyclophosphamide (0.1 mL/10g), scFv-LAAO fusion protein (100, 50 and 20 mg/kg) through intraperitoneal injection once per day for 10 days. Seven days after drug withdrawal, we weighed the mice of each group, calculated the anti-tumor rate of cyclophosphamide group, high-dose group, medium-dose group and low-dose group of fusion protein, at the same time we recorded the survival time of statistics. Results The length of scFv-LAAO fusion gene was 2 000～3 000 bp. After the prokaryotic expression bacterium BL21(DE3) was transfected by the fusion gene, the fusion protein scFv-LAAO was extracted from the supernatant of bacteria lysate, and its molecular weight was about 86 kD, which coincided with scFv-LAAO fusion protein, and the His-tag of scFv-LAAO fusion protein was detected by Western bloting. No significant difference was found in the cell proliferation inhibition rate, anti-tumor rate and survival time of human lung adenocarcinoma H460 cells between the cyclophosphamide group and high-dose fusion protein group (allP>0.05). The cell proliferation inhibition rate, anti-tumor rate and survival time of human lung adenocarcinoma H460 cells of the cyclophosphamide group and high-dose fusion protein group was higher than that of the medium-dose and low-dose fusion protein groups (allP<0.05). Meanwhile, the cell proliferation inhibition rate, anti-tumor rate and survival time of the low-dose group was lower than that of the medium-dose group (allP<0.05).Conclusion The scFv-LAAO fusion protein is successfully prepared, and ScFv-LAAO fusion protein can inhibit the proliferation of human lung adenocarcinoma H460 cells and mouse lung adenocarcinoma cells.

anti-interleukin-4 receptor single antibody; Trimeresurus stejnegeri venom L-amino acid oxidase; lung neoplasms; pulmonary adenocarcinoma; cell proliferation

貴州省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目(20113020)；貴州省科學(xué)技術(shù)基金資助項(xiàng)目(20122075)；貴州省委組織部高層次人才科研條件

特助經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目(TZJF201128);貴州省教育廳創(chuàng)新群體重大研究項(xiàng)目(201636)。

楊光勇(1988-)，男，碩士，助理實(shí)驗(yàn)師，主要研究方向?yàn)榉肿由飳W(xué)。E-mail: 768305874@qq.com

簡(jiǎn)介：何光志(1977-)，男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合基礎(chǔ)。E-mail: heguangzhi7711@sina.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.47.002

R392.11;Q789;Q939.48

A

1002-266X(2016)47-0004-05

2016-07-11)