• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    RP-HPLC雙波長(zhǎng)法測(cè)定四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

    2016-02-07 09:04:08包愛(ài)情陸春波林仙軍陳曉林蔡文金金香蓮
    中國(guó)獸藥雜志 2016年6期
    關(guān)鍵詞:穿心蓮內(nèi)酯獸藥

    包愛(ài)情,陸春波,林仙軍,陳曉林,蔡文金,金香蓮

    (1.浙江省獸藥飼料監(jiān)察所,杭州311101;2.上藥凱侖醫(yī)藥股份有限公司,杭州310000)

    RP-HPLC雙波長(zhǎng)法測(cè)定四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

    包愛(ài)情1,陸春波1,林仙軍1,陳曉林1,蔡文金1,金香蓮2

    (1.浙江省獸藥飼料監(jiān)察所,杭州311101;2.上藥凱侖醫(yī)藥股份有限公司,杭州310000)

    建立了反向高效液相色譜法檢測(cè)四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的方法。試驗(yàn)采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱( 4.6 mm × 250 mm,5 μm) ,以甲醇- 0.2%磷酸溶液梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫30 ℃;穿心蓮內(nèi)酯檢測(cè)波長(zhǎng)226 nm,脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測(cè)波長(zhǎng)252 nm;穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定范圍分別為2.32~37.14 μg/mL(r=1.0000),2.00~31.94 μg/mL(r=1.0000);加樣平均回收率分別為99.12%、98.84%;RSD分別為0.60%、0.62%;該方法方便、準(zhǔn)確、可靠,適用于測(cè)定四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。

    四味穿心蓮散;高效液相法;穿心蓮內(nèi)酯;脫水穿心蓮內(nèi)酯;

    四味穿心蓮散是以穿心蓮、辣蓼、大青葉、葫蘆茶四味藥材加工制成的中獸藥散劑,具有清熱解毒,除濕化滯的功效,用于瀉痢,積滯等。方中穿心蓮清熱解毒、消腫止痛,為君藥;葫蘆茶清熱解暑、消積利濕、殺蟲(chóng),辣蓼祛濕止瀉、散瘀止痛、祛風(fēng)殺蟲(chóng),共為佐使藥。諸藥合用,共奏清熱解毒、除濕化滯之功[1]。穿心蓮,又名春蓮秋柳,一見(jiàn)喜,欖核蓮、苦膽草、金香草、金耳鉤、印度草,苦草等。其中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯為穿心蓮的有效成份,具有祛熱解毒,消炎止痛之功效。穿心蓮內(nèi)酯更是對(duì)細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效,被譽(yù)為天然抗生素藥物[2-3]?!吨腥A人民共和國(guó)獸藥典》二○一○版二部(收載了四味穿心蓮散,對(duì)穿心蓮進(jìn)行了薄層鑒別,未對(duì)其進(jìn)行定量分析[4]。本文采用反向高效液相色譜法對(duì)四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定進(jìn)行了研究。

    1 材料

    1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀,配Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器,美國(guó)Waters公司; XS-205電子天平,瑞士METTLER TOLEDO公司;KQ-500E型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

    1.2 試劑與材料 甲醇為色譜純,Merck 公司,其余試劑均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為milli-Q 超純水。穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(來(lái)源:中國(guó)食品藥品檢定檢驗(yàn)院,批號(hào):110797-201108,含量:98.7%);脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(來(lái)源:中國(guó)食品藥品檢定檢驗(yàn)院,批號(hào):110854-201308,含量:99.7%)。四味穿心蓮散供試品(批號(hào)分別為20150901,20150902,20150903),由浙江A廠生產(chǎn);四味穿心蓮散供試品(批號(hào)分別為20160101,20160102,20160103),由浙江B廠生產(chǎn);四味穿心蓮散供試品(批號(hào)為20131001D),由河北C廠生產(chǎn)。自制樣品:中藥飲片購(gòu)于上藥凱侖醫(yī)藥股份有限公司,經(jīng)浙江省獸藥飼料監(jiān)察所鑒定,按相應(yīng)處方自制。

    2 方法與結(jié)果

    表1 梯度洗脫表

    2.2 溶液的制備

    2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯11.76 mg和脫水穿心蓮對(duì)照品10.01 mg,分別置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻。分別精密量取20 mL上述溶液于同一50 ml容量瓶,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為混合對(duì)照品貯備液。精密量取混合對(duì)照品貯備液6.0 mL,置10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即為混合對(duì)照品溶液。

    2.2.2 供試品溶液 取四味穿心蓮散1 g,精密稱定,置100 mL具塞錐形瓶中,精密加40%甲醇25 mL,超聲提取(功率250 W,頻率50 kHz)30 min,過(guò)濾,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。

    2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按處方比例自配不含穿心蓮的散劑,按其工藝制成陰性對(duì)照樣品,再按2.2.2項(xiàng)方法制備成陰性對(duì)照溶液。

    2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液注入液相色譜儀,進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,記錄穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的光譜圖(圖1~圖2);同時(shí)記錄混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液的色譜圖(圖3~圖8)。該色譜條件下,穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯分離度良好,與其他峰分離良好,理論塔板數(shù)均大于6000。陰性樣品在混合對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上無(wú)吸收峰,表明處方中的其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果并無(wú)干擾,滿足定量檢測(cè)需要。峰1為穿心蓮內(nèi)酯,峰2為脫水穿心蓮內(nèi)酯。

    圖1 穿心蓮內(nèi)酯光譜圖

    圖2 脫水穿心蓮內(nèi)酯光譜圖

    圖3 混合對(duì)照品226 nm色譜圖

    圖4 混合對(duì)照品252 nm色譜圖

    圖5 自制陽(yáng)性樣品226 nm色譜圖

    圖6 自制陽(yáng)性樣品252 nm色譜圖

    圖7 自制陰性樣品226 nm波長(zhǎng)色譜圖

    圖8 自制陰性樣品252 nm色譜圖

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 線性范圍 精密量取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯混合對(duì)照品貯備溶液(46.4、39.9 μg/mL)各0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分別置10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,按上述色譜條件,精密量取10 μL,記錄色譜圖,測(cè)定峰面積,以峰面積積分值(Y)對(duì)濃度(X,μg/mL)進(jìn)行線性回歸計(jì)算,方程為:

    穿心蓮內(nèi)酯:Y=41467.11X+1698.00

    (r=1.0000),線性范圍2.32~37.14 μg/mL;

    韓世玉等[6-11]研究表明,桑樹(shù)葉片生長(zhǎng)受桑樹(shù)種類或品種的影響;黃麗玲等[12-13]研究表明,桑樹(shù)葉片生長(zhǎng)受氣候條件的影響;許楠等[14-21]研究表明,桑樹(shù)葉片生長(zhǎng)受施肥水平等栽培管理水平的影響。桑樹(shù)新梢與葉片的生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)除受品種等內(nèi)部因素的影響外,還受氣候、土壤和栽培管理等外部因素影響。在生產(chǎn)中前一年要加強(qiáng)水肥管理,使樹(shù)體貯備足夠的養(yǎng)分,滿足次年新梢生長(zhǎng)和葉片生長(zhǎng)發(fā)育的養(yǎng)分需求。同時(shí)在新梢和葉片生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期加強(qiáng)水肥管理,為其提供良好的營(yíng)養(yǎng)條件。因此,在試驗(yàn)區(qū)條件下,合理施用催芽肥對(duì)促進(jìn)桑樹(shù)新梢和葉片生長(zhǎng)有著重要的作用。

    脫水穿心蓮內(nèi)酯:Y=33757.20X+8960.78

    (r=1.0000),線性范圍2.00~31.94 μg/mL。

    2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL,按上述色譜條件,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,計(jì)算結(jié)果,穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.32%,0.42%。

    2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(自制樣品),分別在0、1、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣10 μL,記錄色譜峰面積,計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積的RSD分別為0.54%、0.78%。結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定。

    2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品(自制樣品),分別稱取6份,照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測(cè)定供試品溶液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果測(cè)得穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量分別為515.3、514.5、515.7、521.0、517.7、516.8 μg/g;脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量分別為339.2、341.8、345.2、345.5、338.3、343.9 μg/g;RSD分別為0.45%、0.24%。結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好。2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已知含量的四味穿心蓮散樣品(自制樣品) 0.5 g,共6份,置100 mL具塞錐形瓶中,精密加25 mL對(duì)照品溶液(稱取穿心蓮內(nèi)酯25.23 mg和脫水穿心蓮內(nèi)酯17.21 mg于同一100 mL容量瓶,甲醇溶解并稀釋至刻度,再精密量取10 mL于250 mL容量瓶中,用40%甲醇稀釋并定容到刻度),其余按2.2.2項(xiàng)同法處理后,測(cè)定并結(jié)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 四味穿心蓮散回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    2.5 樣品測(cè)定 取不同批號(hào)的四味穿心蓮散,按2.2.2項(xiàng)下方法處理,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算樣品中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(μg/g) n=3

    3 討論與小結(jié)

    3.1 波長(zhǎng)的優(yōu)化 在波長(zhǎng)選擇上,通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器(PDA)在200~400 nm進(jìn)行了全掃描,結(jié)果顯示穿心蓮內(nèi)酯在226 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收,脫水穿心蓮內(nèi)酯在252 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收波長(zhǎng),因此本文采用雙波長(zhǎng)法,使兩者均有最大吸收。

    3.2 提取方式的優(yōu)化 在提取方式選擇上,比較了浸漬、超聲和回流的提取效果,研究表明浸漬的提取效果略低于超聲與回流,而超聲與回流效果相當(dāng),但超聲操作比回流便捷,因此本文采取超聲作為提取方式。

    3.3 提取溶劑的優(yōu)化 在提取溶劑的選擇上,比較了20%甲醇,40%甲醇和60%甲醇的提取效果,研究表明當(dāng)提取溶劑為20%甲醇時(shí),提取效率顯著低于40%甲醇和60%甲醇;當(dāng)提取溶劑為60%甲醇時(shí),提取效果與40%甲醇無(wú)顯著差異,但雜質(zhì)干擾嚴(yán)重,表明以60%甲醇提取時(shí)會(huì)將散劑中的一些其他成分提取出來(lái)而增加干擾,因此選用40%甲醇作為提取溶劑。

    3.4 提取時(shí)間的優(yōu)化 在提取時(shí)間的選擇上,比較了15、30、45 min的提取效果,研究表明15min的提取效果顯著低于30、45 min,45 min的提取效果與30 min相當(dāng),因此本文選用30 min的提取時(shí)間。

    本文參考文獻(xiàn)[5-6]選用不同的比例的甲醇-水,甲醇-0.2%磷酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,結(jié)果表明,選用當(dāng)前試驗(yàn)的流動(dòng)相時(shí),樣品中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯分離效果好、無(wú)雜峰干擾且時(shí)間短。已報(bào)道的關(guān)于四味穿心蓮散成分含量測(cè)定的只有汪艷秋[7]等人開(kāi)發(fā)的HPLC法測(cè)定四味穿心蓮散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。本文開(kāi)發(fā)的方法所需時(shí)間大大縮短,單針時(shí)間從45 min減少為20 min,檢測(cè)效率大幅提高,更節(jié)省溶劑同時(shí)減少對(duì)環(huán)境的污染,尤其適用于大批量檢測(cè),且本文對(duì)自制陽(yáng)性樣品以及多個(gè)廠家樣品進(jìn)行了測(cè)定,通過(guò)數(shù)據(jù)的比較反映出不同廠家樣品的區(qū)別。

    當(dāng)前,我國(guó)中獸藥散劑多數(shù)采取顯微鑒別及薄層鑒別控制處方中各味藥材,未對(duì)中藥成分進(jìn)行定量測(cè)定。中藥材由于產(chǎn)地、氣候等因素的影響,差異往往很大,如本文中七批企業(yè)樣品,含量差異很大,究其原因,很可能是因?yàn)樗幉漠a(chǎn)地、氣候等因素的影響,但也不能排除個(gè)別企業(yè)不按照處方進(jìn)行制備。因此探索對(duì)中獸藥散劑中各味中藥的有效成分進(jìn)行的定量分析研究,有利于提高中獸藥散劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制,進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量。本文開(kāi)發(fā)的方法,操作簡(jiǎn)便快捷,方法可行可靠,可為制定四味穿心蓮散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

    [1] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典二○一○年版二部[S].[2] Jiun-Han C,George H, An-Rong L,etal.Andrographolide suppresses endothelial cell apoptosis via activation of phosphatidyl inositol-3-kinase/Akt pathway [J]. Biochemical pharmacology, 2004,67(7): 1337-1345.

    [3] Yi-Feng X,Bu-Qing Y, Yi-Dan L,etal. Andrographolide attenuates inflammation by inhibition of NF-kappa B activation through covalent modification of reduced cysteine 62 of p50 [J]. Journal of immunology, 2004,173(6): 4207-4217.

    [4] 中國(guó)獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典獸藥使用指南二○一○年版中藥卷[S].

    [5] 反任睿 , 張園園. 反向高效液相色譜法測(cè)定喉舒寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J]. 中南藥學(xué), 2011, 9(4): 271-273.

    [6] 馬冬云 , 姜文艷. 雙波長(zhǎng) HPLC 法同時(shí)測(cè)定止痢寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J]. 中國(guó)藥師, 2012, 15(4): 497-499.

    [7] 汪艷秋, 樓步青, 汪芳, 等. 獸用中成藥四味穿心蓮散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究[J],中國(guó)獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 2013, 6: 37-40.

    (編輯:侯向輝)

    Determination of Andrographolide and Dehydroandrographolide in Siwei Chuanxinlian San by Dual-wavelength RP-HPLC

    BAQ Ai-qing1, LU Chun-bo1, LIN Xian-jun1, CHEN Xiao-lin1,CAI Wen-jin1,JIN Xiang-lian2

    (1.ZhejiangProvinceInstituteofVeterinaryDrugandFeedstuff,Hangzhou311101,China;2.ShangyaoKailunPharmaceuticalCoLtd,Hangzhou31000,China)

    To establish a RP- HPLC method for determination of andrographolide and ehydroandrographolide in Siwei Chuanxinlian San,analysis was performed on a C18 column ( 250 mm × 4.6 mm,5 μm) with a gradient elution mode of methanol-0.2% phosphoric acid at a flow rate of 1.0 mL/min and a column temperature of 30 ℃. The determination wave length of andrographolide was 226 nm while dehydroandrographolide was 252 nm. The linear range was 2.32~37.14 μg /mL(r=1.0000) and 2.00~31.94μg /mL (r=1.0000), and the average recovery was 99.12% and 98.84% withRSDof 0.60% and 0.62%, respectively.This method was convenient, accurate and reliable for the determination of andrographolide anddehydroandrographolide in Siwei Chuanxinlian San.

    Siwei Chuanxinlian San; HPLC; andrographolide; dehydroandrographolide

    包愛(ài)情,碩士,從事獸藥檢測(cè)工作。E-mail:baoaiqing@126.com

    2016-04-07

    A

    1002-1280 (2016) 06-0056-05

    S859.2

    猜你喜歡
    穿心蓮內(nèi)酯獸藥
    獸藥殘留檢測(cè)中的優(yōu)化與應(yīng)用
    穿心蓮內(nèi)酯滴丸
    穿心蓮內(nèi)酯固體分散體的制備
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:27
    中獸藥在家禽養(yǎng)殖中的作用與應(yīng)用
    蒙藥如達(dá)七味散中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測(cè)定
    獸藥
    消炎止咳片穿心蓮中脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的HPLC分析
    α-甲氧甲?;?γ-丁內(nèi)酯和α-乙氧甲?;?γ-丁內(nèi)酯的合成及表
    熱處理對(duì)穿心蓮內(nèi)酯降解的影響
    中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:48
    獸藥GSP認(rèn)證后的思考
    国产精品一二三区在线看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av片东京热男人的天堂| 国产精品一区二区免费欧美 | 99国产综合亚洲精品| 丝袜人妻中文字幕| 精品欧美一区二区三区在线| 真人做人爱边吃奶动态| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久狼人影院| 大型av网站在线播放| 成人黄色视频免费在线看| www.精华液| 搡老熟女国产l中国老女人| 韩国高清视频一区二区三区| 搡老岳熟女国产| 视频区欧美日本亚洲| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 超碰成人久久| 波多野结衣av一区二区av| 国产在线免费精品| 久久久国产成人免费| 成人影院久久| 亚洲欧美激情在线| 国产av一区二区精品久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 99香蕉大伊视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品人妻在线不人妻| 精品国产乱码久久久久久男人| 最黄视频免费看| 欧美另类一区| 97人妻天天添夜夜摸| 波多野结衣av一区二区av| 午夜福利免费观看在线| 人人妻人人澡人人看| 天堂8中文在线网| av免费在线观看网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品av久久久久免费| 免费观看a级毛片全部| 国产精品一区二区在线不卡| 老司机在亚洲福利影院| av视频免费观看在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲天堂av无毛| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 手机成人av网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人影院久久| 国产男人的电影天堂91| 老司机午夜十八禁免费视频| 香蕉丝袜av| av有码第一页| 99re6热这里在线精品视频| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费少妇av软件| 高清av免费在线| 精品久久久久久电影网| 欧美日韩视频精品一区| 最近最新免费中文字幕在线| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 亚洲 国产 在线| 亚洲中文字幕日韩| 丰满饥渴人妻一区二区三| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲成人免费av在线播放| 男人舔女人的私密视频| 久久久精品区二区三区| 欧美人与性动交α欧美软件| 91大片在线观看| av一本久久久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产区一区二久久| 老司机福利观看| 各种免费的搞黄视频| 精品欧美一区二区三区在线| 精品欧美一区二区三区在线| 国产男人的电影天堂91| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品免费大片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美国产精品一级二级三级| 国产亚洲欧美精品永久| 人人澡人人妻人| 热99国产精品久久久久久7| 午夜精品国产一区二区电影| www.999成人在线观看| 大型av网站在线播放| 日韩制服骚丝袜av| 中文字幕高清在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲精品一二三| 免费观看人在逋| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产黄频视频在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 久久九九热精品免费| 精品国产一区二区久久| 亚洲成人手机| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91国产中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产精品1区2区在线观看. | www.熟女人妻精品国产| www日本在线高清视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 咕卡用的链子| 久久久久久人人人人人| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日本wwww免费看| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 多毛熟女@视频| av不卡在线播放| 日本91视频免费播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 黄色视频在线播放观看不卡| 两个人免费观看高清视频| 亚洲七黄色美女视频| 精品久久久久久电影网| 国产精品久久久久成人av| 新久久久久国产一级毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 99热国产这里只有精品6| xxxhd国产人妻xxx| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产男女内射视频| 亚洲三区欧美一区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 69精品国产乱码久久久| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产有黄有色有爽视频| 十分钟在线观看高清视频www| 精品国产国语对白av| 日韩制服丝袜自拍偷拍| www.av在线官网国产| 久久九九热精品免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美一级毛片孕妇| 我要看黄色一级片免费的| 久久精品国产a三级三级三级| 国产三级黄色录像| 三级毛片av免费| 脱女人内裤的视频| av天堂在线播放| 成人免费观看视频高清| 操出白浆在线播放| 亚洲av片天天在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美精品一区二区大全| 欧美另类一区| 99久久人妻综合| 女性生殖器流出的白浆| 在线观看免费午夜福利视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品国产a三级三级三级| 视频区欧美日本亚洲| 免费在线观看黄色视频的| 精品第一国产精品| 黄色 视频免费看| av有码第一页| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产又爽黄色视频| 国产精品 国内视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 水蜜桃什么品种好| 久久久欧美国产精品| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品一区二区在线不卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产av精品麻豆| 国产麻豆69| 欧美另类亚洲清纯唯美| 狂野欧美激情性bbbbbb| 深夜精品福利| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲色图综合在线观看| av天堂在线播放| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产男人的电影天堂91| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本91视频免费播放| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费av片在线观看野外av| 麻豆av在线久日| 国产高清videossex| 男男h啪啪无遮挡| 九色亚洲精品在线播放| 中文字幕最新亚洲高清| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91九色精品人成在线观看| 成年av动漫网址| 国产又色又爽无遮挡免| 叶爱在线成人免费视频播放| a级毛片在线看网站| 老司机午夜福利在线观看视频 | 最新在线观看一区二区三区| 国产在视频线精品| 亚洲第一青青草原| 亚洲五月婷婷丁香| 午夜福利视频精品| 青春草视频在线免费观看| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜免费鲁丝| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品国产av在线观看| 电影成人av| 免费av中文字幕在线| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品二区激情视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 精品久久久精品久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 青青草视频在线视频观看| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品美女久久av网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 免费日韩欧美在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 最近最新免费中文字幕在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久国产欧美日韩av| 大香蕉久久成人网| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产福利在线免费观看视频| 欧美久久黑人一区二区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国精品久久久久久国模美| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女边摸边吃奶| 天堂8中文在线网| 国产一级毛片在线| 日韩欧美免费精品| 男女高潮啪啪啪动态图| 中文字幕制服av| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品免费大片| 美女视频免费永久观看网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 2018国产大陆天天弄谢| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久久水蜜桃国产精品网| 日本wwww免费看| 五月天丁香电影| 宅男免费午夜| av片东京热男人的天堂| 久久国产精品影院| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久ye,这里只有精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成人国语在线视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 中国美女看黄片| 国产麻豆69| 窝窝影院91人妻| 热99国产精品久久久久久7| 久久亚洲精品不卡| 日本一区二区免费在线视频| 国产精品99久久99久久久不卡| www.999成人在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 精品高清国产在线一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 日本a在线网址| 久久午夜综合久久蜜桃| 丝袜喷水一区| 国产av又大| 午夜91福利影院| 两个人免费观看高清视频| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久久水蜜桃国产精品网| 成人国语在线视频| 国产成人欧美| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 电影成人av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av在线老鸭窝| 嫁个100分男人电影在线观看| 99国产精品99久久久久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲免费av在线视频| 欧美精品亚洲一区二区| 免费高清在线观看日韩| 国产精品免费大片| 好男人电影高清在线观看| 国产成人精品无人区| 黄片播放在线免费| avwww免费| 久久香蕉激情| 老司机亚洲免费影院| 在线精品无人区一区二区三| 两人在一起打扑克的视频| 99热全是精品| 国产免费福利视频在线观看| 午夜福利视频精品| 精品人妻1区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产福利在线免费观看视频| kizo精华| 这个男人来自地球电影免费观看| 9色porny在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲欧美精品永久| 国产亚洲精品一区二区www | 丰满饥渴人妻一区二区三| 美女中出高潮动态图| 男女下面插进去视频免费观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美性长视频在线观看| 精品一区二区三卡| 国产免费福利视频在线观看| 成人三级做爰电影| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品.久久久| 夫妻午夜视频| 日韩一区二区三区影片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品少妇久久久久久888优播| 男人添女人高潮全过程视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品免费视频内射| 久久女婷五月综合色啪小说| 黄色a级毛片大全视频| 欧美97在线视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 久久久欧美国产精品| 一本色道久久久久久精品综合| 免费在线观看影片大全网站| 18在线观看网站| 中文字幕精品免费在线观看视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产激情久久老熟女| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲国产av新网站| 婷婷色av中文字幕| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 免费黄频网站在线观看国产| 99香蕉大伊视频| 久久人人爽人人片av| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产在视频线精品| 五月开心婷婷网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 777米奇影视久久| 欧美日韩黄片免| 中文欧美无线码| 精品福利观看| 国产福利在线免费观看视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲av日韩在线播放| 99久久综合免费| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费在线观看黄色视频的| 99热全是精品| 1024视频免费在线观看| 一本久久精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人a∨麻豆精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久 | 啦啦啦啦在线视频资源| 又大又爽又粗| 老司机在亚洲福利影院| 日本a在线网址| 天堂8中文在线网| 亚洲视频免费观看视频| 男女国产视频网站| 国产av一区二区精品久久| 少妇的丰满在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品99久久99久久久不卡| 天堂中文最新版在线下载| 多毛熟女@视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产在视频线精品| 日韩三级视频一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 国产又爽黄色视频| 国产成人欧美在线观看 | 国产一区二区 视频在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一边摸一边做爽爽视频免费| 伊人亚洲综合成人网| 欧美性长视频在线观看| 久久中文字幕一级| 精品一区在线观看国产| 亚洲成人免费av在线播放| 国产麻豆69| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲欧美激情在线| 久久久久国内视频| 精品国产国语对白av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲久久久国产精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线天堂中文资源库| 久久综合国产亚洲精品| 满18在线观看网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲成国产人片在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 精品福利永久在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲av成人一区二区三| 美女中出高潮动态图| 亚洲七黄色美女视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久视频综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产黄色免费在线视频| 亚洲成人手机| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 午夜精品国产一区二区电影| 最新的欧美精品一区二区| av在线播放精品| 91成人精品电影| 久久性视频一级片| 大片免费播放器 马上看| videos熟女内射| 后天国语完整版免费观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精品欧美亚洲77777| 看免费av毛片| 久久中文看片网| 高清av免费在线| 少妇精品久久久久久久| 女警被强在线播放| 中文字幕制服av| a在线观看视频网站| 久久精品国产综合久久久| 国产在线观看jvid| 丁香六月欧美| 午夜福利影视在线免费观看| 国产av一区二区精品久久| 精品久久久久久电影网| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜福利乱码中文字幕| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久热爱精品视频在线9| www.av在线官网国产| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 免费观看av网站的网址| 夫妻午夜视频| 国产在线一区二区三区精| 18在线观看网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产在视频线精品| 91精品三级在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 美国免费a级毛片| 在线精品无人区一区二区三| 一进一出抽搐动态| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲第一av免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 热re99久久国产66热| 一区福利在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 天天操日日干夜夜撸| 在线观看舔阴道视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日本av免费视频播放| 水蜜桃什么品种好| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 老司机影院成人| 国产欧美亚洲国产| av一本久久久久| 国产精品久久久av美女十八| 成人国语在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 男人操女人黄网站| 免费日韩欧美在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 久久国产精品人妻蜜桃| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99香蕉大伊视频| 另类精品久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 男男h啪啪无遮挡| 十八禁网站免费在线| 婷婷丁香在线五月| 亚洲少妇的诱惑av| 99精品久久久久人妻精品| 99热全是精品| 久久中文字幕一级| xxxhd国产人妻xxx| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 午夜福利乱码中文字幕| 各种免费的搞黄视频| 少妇粗大呻吟视频| 18在线观看网站| netflix在线观看网站| 日本五十路高清| 大陆偷拍与自拍| 午夜福利在线观看吧| 色综合欧美亚洲国产小说| 美国免费a级毛片| 国产成人系列免费观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 男女国产视频网站| 国产精品国产三级国产专区5o| 男女免费视频国产| 国产成人精品久久二区二区免费| 他把我摸到了高潮在线观看 | 90打野战视频偷拍视频| 人妻久久中文字幕网| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本a在线网址| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 黄色视频不卡| 多毛熟女@视频| 午夜影院在线不卡| 国产精品偷伦视频观看了| a 毛片基地| 91av网站免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 男女午夜视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 丰满饥渴人妻一区二区三| 俄罗斯特黄特色一大片| 高清av免费在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产国语露脸激情在线看| 悠悠久久av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 18禁国产床啪视频网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 99国产精品免费福利视频| 天堂8中文在线网| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久亚洲国产成人精品v|