半枝蓮多糖抗肝癌作用的研究

王 瑩

通遼市職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系 內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市 028000

半枝蓮多糖抗肝癌作用的研究

王 瑩

通遼市職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系 內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市 028000

目的：探討半枝蓮多糖抗肝癌作用,觀察其對(duì)H22荷瘤小鼠的增效減毒作用及對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2增殖的抑制作用。方法：將肝癌H22荷瘤小鼠，24h后隨機(jī)分組，連續(xù)給藥8天，剝離腫瘤，計(jì)算抑瘤率,并檢測(cè)半枝蓮多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞Hep G2增殖的影響。結(jié)果：半枝蓮多糖與環(huán)磷酰胺聯(lián)用對(duì)H22荷瘤小鼠有增效減毒的作用，其對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2增殖的抑制作用顯著。結(jié)論：初步表明半枝蓮多糖具有抗肝癌的作用。

半枝蓮多糖；抑瘤率；增效減毒

半枝蓮(Scutellaria barbata D. Don)屬于唇形科植物干燥全草，性寒。近年來(lái)半枝蓮的研究多集中在抗腫瘤方面,臨床上常用于肝癌、肺癌、胃癌等多種癌癥防治，但具體的抗癌機(jī)制尚不明確[1]。本研究觀察了半枝蓮多糖對(duì)H22荷瘤小鼠增效減毒作用和對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2抑瘤率的影響，以探討半枝蓮多糖抗肝癌作用初步機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

隨著藥物劑量的增加抑制腫瘤作用越明顯。

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明種小鼠，購(gòu)自內(nèi)蒙古民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；肝癌細(xì)胞株H22、肝癌細(xì)胞Hep G2由中科院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù)提供。

1.2 儀器與試劑

半枝蓮飲片由北京同仁堂藥店提供；胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)GIBCO公司),細(xì)胞培養(yǎng)板(美國(guó)Costar公司),血球基數(shù)儀(上海精密儀器廠)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 半枝蓮多糖對(duì)腫瘤小鼠的腫瘤抑制作用

取正常小鼠30只，皮下接種H22腫瘤細(xì)胞，48h后隨機(jī)分成5組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照，高、中、低劑量組給不同劑量的半枝蓮多糖（分別為85.84 mg.kg-1、28.32 mg.kg-1、10.54 mg.kg-1）和環(huán)磷酰胺（15 mg.kg-1），陽(yáng)性對(duì)照組給環(huán)磷酰胺（15 mg.kg-1），陰性對(duì)照組給等容量的生理鹽水，給藥第7天，稱重后，頸椎脫臼處死小鼠，剝離腫瘤計(jì)算抑瘤率。

2.2 半枝蓮多糖對(duì)肝腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用

將培養(yǎng)2-3天生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人肝癌HepG2細(xì)胞，清洗、消化，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/mL，制成單細(xì)胞混懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度，均勻接種細(xì)胞于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液100μL。將培養(yǎng)板放入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12h。高、中、低劑量組分別加入不同濃度的半枝蓮多糖100μL，陰性對(duì)照組加入等量培養(yǎng)基，每個(gè)濃度平行接種5個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h。每孔加入20μL MTT溶液，繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)。棄去上清液，每孔加入150μL DMSO，震蕩15 min，用酶聯(lián)檢測(cè)免疫儀于492nm檢測(cè)各孔的吸光值（OD值），取5孔的平均值，計(jì)算抑瘤率[2]。

細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(IR%)=(1-OD實(shí)驗(yàn)組/ OD對(duì)照組)×100%

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 半枝蓮多糖對(duì)H22荷瘤小鼠增效減毒作用

由表1可知，與陰性對(duì)照組比較，高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均能明顯減小H22荷瘤小鼠的瘤重。高、中、低劑量組的腫瘤抑制率均比陽(yáng)性對(duì)照組有所升高，且高劑量組效果尤為明顯。結(jié)果表明半枝蓮多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的腫瘤有抑制作用，與環(huán)磷酰胺合用有增效減毒作用。

表1：H22荷瘤小鼠抑瘤作用（）

表1：H22荷瘤小鼠抑瘤作用（）

組別 瘤重 抑瘤率陰性對(duì)照組0.94±0.12 CTX組0.51±0.10**45.74高劑量組0.31±0.54**67.02中劑量組0.37±0.07**60.64低劑量組0.43±0.12**54.26

3.2 半枝蓮多糖對(duì)Hep G2肝癌細(xì)胞抑制作用

表2顯示，半枝蓮多糖高、中、低劑量組抑瘤率分別為45.96%、33.36%、30.03%，與陰性對(duì)照組比較，半枝蓮多糖低、中劑量組抗肝腫瘤作用明顯，而高劑量組具有非常顯著性差異。由此表明，高、中、低劑量半枝蓮多糖對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的生長(zhǎng)增值具有顯著的抑制作用，且

表2：Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的影響（）

表2：Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的影響（）

組別 濃度（ug.mL-1）OD492抑制率（%）陰性對(duì)照組01.175±0.171 2000.635±0.20445.96半枝蓮多糖組1000.783±0.15233.36 500.838±0.06930.03

4 討論與小結(jié)

半枝蓮在臨床應(yīng)用比較廣泛，主要化學(xué)成分的研究比較充分，但對(duì)半枝蓮單味藥的抗腫瘤作用有效成分及作用機(jī)制的研究尚不明確。本文對(duì)半枝蓮多糖的抗肝癌作用進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)表明半枝蓮多糖在50-200μg.mL-1濃度下對(duì)肝癌Hep G2細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，而且隨著藥物濃度的增加對(duì)腫瘤抑制率增大。半枝蓮多糖對(duì)H22荷瘤小鼠也有較好的抗腫瘤作用，與環(huán)磷酰胺合用抑制腫瘤作用明顯增強(qiáng)，且高劑量組的抑瘤率較好，與陰性對(duì)照組平均瘤重比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，半枝蓮多糖對(duì)抗肝癌藥物有增效減毒的作用。以上實(shí)驗(yàn)初步表明，半枝蓮多糖具有抗肝癌的作用,為今后半枝蓮抗腫瘤機(jī)制研究提供了理論依據(jù)和應(yīng)用價(jià)值。

[1]顧琳娜,顧昊.天然抗腫瘤藥物篩選方法的研究進(jìn)展.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)[J].2009,28(04):496-497.

[2]王萍.半枝蓮抗癌成分研究.山東師范大學(xué)[J].2010,28(04):496-497.

王瑩，現(xiàn)為內(nèi)蒙古通遼職業(yè)學(xué)院講師，藥物分析，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)碩士畢業(yè)。

●文章為省級(jí)課題的內(nèi)容。