嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對5種作物病原菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力

劉潤強,曹前輝,王清峻,陳錫嶺

(1.河南科技學(xué)院 資源與環(huán)境學(xué)院, 河南 新鄉(xiāng) 453003； 2.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局，河南 輝縣 453600；3.河南淇林園林科技有限公司, 河南 鄭州 450045)

嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對5種作物病原菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力

劉潤強1,曹前輝2,王清峻3,陳錫嶺1

(1.河南科技學(xué)院 資源與環(huán)境學(xué)院, 河南 新鄉(xiāng) 453003； 2.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局，河南 輝縣 453600；3.河南淇林園林科技有限公司, 河南 鄭州 450045)

采用室內(nèi)菌絲生長速率法，以草莓枯萎病菌、西瓜炭疽病菌、煙草猝倒病菌、葡萄霜霉病菌和月季灰霉病菌為作用目標，研究嘧菌環(huán)胺和纈霉威混配對5種病菌的聯(lián)合毒力，為嘧菌環(huán)胺和纈霉威混配使用提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果顯示，嘧菌環(huán)胺對5種病菌的有效中質(zhì)量濃度(EC50)為0.19 ～1.92 mg/L，纈霉威對5種病菌的EC50為0.23～1.02 mg/L；當嘧菌環(huán)胺和纈霉威的混配比例為15∶1時，對草莓枯萎病菌的共毒系數(shù)最大，為217.70；混配比例為8∶1時，對西瓜炭疽病菌的共毒系數(shù)最大，為203.59；混配比例為3∶1時，對煙草猝倒病菌的共毒系數(shù)最大，為196.29；混配比例為1∶6時，對葡萄霜霉病菌的共毒系數(shù)最大，為201.98；混配比例為9∶1時，對月季灰霉病菌的共毒系數(shù)最大，為202.56。表明嘧菌環(huán)胺和纈霉威按適當比例混配對5種病原菌具有明顯的增效作用。

嘧菌環(huán)胺； 纈霉威； 草莓枯萎病菌； 西瓜炭疽病菌； 煙草猝倒病菌； 葡萄霜霉病菌； 月季灰霉病菌； 增效作用

嘧菌環(huán)胺(cyprodinil，CAS號121552-61-2)是一種蛋氨酸生物合成抑制劑，同三唑類、咪唑類、嗎啉類、苯基吡咯類等無交互抗性，具有保護、治療、葉片穿透及根部內(nèi)吸活性[1]?？蛇M行葉面噴霧或種子處理，也可作種衣劑用藥[2]。纈霉威(carbamic acid，CAS號140923-17-7)為氨基酸酯類衍生物，具有獨特的全新仿生結(jié)構(gòu)，使其作用機制區(qū)別于其他防治卵菌綱的殺菌劑，具體為作用于真菌細胞壁和蛋白質(zhì)的合成，能抑制孢子的侵染和萌發(fā)，同時能抑制菌絲體的生長，導(dǎo)致其變形、死亡[3]。其對霜霉科和疫霉屬真菌引起的病害具有很好的治療和鏟除作用[4]。嘧菌環(huán)胺雖應(yīng)用較廣泛，但單獨使用容易使病原菌產(chǎn)生抗性；纈霉威雖然藥效高，但殺菌譜較窄。從農(nóng)藥應(yīng)用的角度來看，長期單一使用某一種農(nóng)藥，都容易引起防效降低、用量增大、產(chǎn)生抗藥性、持效期縮短等問題，殘留風險加大，不利于環(huán)境和諧發(fā)展[5]。尋求科學(xué)、合理的農(nóng)藥復(fù)配，是解決這一問題較好的辦法。為了提高嘧菌環(huán)胺和纈霉威的應(yīng)用潛力和對不同病原菌的防治效果，將嘧菌環(huán)胺和纈霉威進行復(fù)配，測定復(fù)配藥劑對草莓枯萎病菌、西瓜炭疽病菌、煙草猝倒病菌、葡萄霜霉病菌和月季灰霉病菌等5種作物病原菌的聯(lián)合毒力，旨在明確兩者不同比例混配對5種病原菌的增效作用，篩選出最佳配比，為2種藥劑的實際混配應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試藥劑

98%嘧菌環(huán)胺原藥由江蘇豐登作物保護股份有限公司提供，95%纈霉威原藥由拜耳(中國)有限公司提供。

1.2 供試菌株

草莓枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp. Fragariae)、西瓜炭疽病菌[Colletotrichumorbiculare(Berk.& Ment.) Arx]、葡萄霜霉病菌[Plasmoparaviticola(Berk.et Curtis) Berl. et de Toni]、煙草猝倒病菌[Pythiumaphanidermatum(Edson) Fitzpatrick]和月季灰霉病菌(BotrytiscinereaPers)為廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所王彥輝博士惠贈。試驗前，將供試菌株接種在PDA平板培養(yǎng)基中，置于20～25 ℃條件下培養(yǎng)48 h進行活化，然后轉(zhuǎn)移到斜面培養(yǎng)基上4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗方法

1.3.1 單劑抑制作用測定 參照NY/T 1156.2—2006《殺菌劑室內(nèi)生物測定試驗準則》[6]，采用含藥培養(yǎng)基生長速率法進行測定[7]。在預(yù)備試驗的基礎(chǔ)上，確定嘧菌環(huán)胺和纈霉威藥劑的最低抑制質(zhì)量濃度(MIC)。以MIC為依據(jù)將嘧菌環(huán)胺和纈霉威的乙醇水(V∶V=3∶7)溶液配制的母液用無菌水分別配成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00、10.00 mg/L系列質(zhì)量濃度梯度。向直徑為9 cm的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)注入1 mL上述不同質(zhì)量濃度的待測藥液，倒入融化好的5 mL PDA 培養(yǎng)基(55～65 ℃)，混勻，制成含藥平板培養(yǎng)基，對照加入等量的滅菌蒸餾水代替藥液，每個處理重復(fù)3 次。于培養(yǎng)基平面接種直徑為5 mm 的菌餅，置于25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)6 d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算殺菌劑對病菌菌絲生長的抑制率[8]。抑制率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑×100%。由處理質(zhì)量濃度的對數(shù)值和相應(yīng)的抑制概率值求出毒力回歸方程，并計算有效中質(zhì)量濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(r)[9]，數(shù)據(jù)處理由SAS 6.12統(tǒng)計軟件完成。

1.3.2 混劑聯(lián)合毒力測定 根據(jù)單劑毒力測定結(jié)果，以嘧菌環(huán)胺和纈霉威的有效中質(zhì)量濃度為基礎(chǔ)，按不同質(zhì)量配比進行藥劑配制。對草莓枯萎病菌的配比為1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、15∶1；對西瓜炭疽病菌的配比為1∶12、1∶8、1∶4、1∶1、4∶1、8∶1、12∶1；對煙草猝倒病菌的配比為1∶12、1∶9、1∶3、1∶1、3∶1、9∶1、12∶1；對葡萄霜霉病菌的配比為1∶9、1∶6、1∶3、1∶1、3∶1、6∶1、9∶1；對月季灰霉病菌的配比為1∶9、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、9∶1。各個配比的藥劑質(zhì)量濃度梯度均設(shè)定為0.05、0.10、0.50、2.50、5.00 mg/L。按生長速率法進行測定并求出毒力回歸方程、EC50值及r[10]。根據(jù)單劑和混劑的EC50值計算共毒系數(shù)(CTC)：CTC =實測(A+B)毒力指數(shù)ATI /理論(A+B)毒力指數(shù)TTI ×100。其中，ATI=標準藥劑EC50/復(fù)配藥劑EC50×100%；TTI=A的毒力指數(shù)×A在混劑中的百分含量+B的毒力指數(shù)×B在混劑中的百分含量[11]。采用共毒系數(shù)法評價藥劑混用的聯(lián)合毒力作用，即CTC≤80為拮抗作用，80

2 結(jié)果與分析

2.1 嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對草莓枯萎病菌的聯(lián)合毒力

由表1可知，嘧菌環(huán)胺和纈霉威單劑對草莓枯萎病菌的EC50值分別為0.19 mg/L和1.02 mg/L。

當二者以1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1和15∶1比例進行混配，對草莓枯萎病菌均表現(xiàn)出增效作用，且CTC值隨著嘧菌環(huán)胺在混劑中比例的增加而增大，其中嘧∶纈(“嘧菌環(huán)胺∶纈霉威”的簡寫，下同)=15∶1時，混配增效作用最明顯，其共毒系數(shù)為217.70。綜合考慮，采用嘧菌環(huán)胺與纈霉威防治草莓枯萎病以(1∶5)～(15∶1)復(fù)配較好。

表1 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對草莓枯萎病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

注：“嘧∶纈”為“嘧菌環(huán)胺∶纈霉威”的簡寫，下表同。

2.2 嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對西瓜炭疽病菌的聯(lián)合毒力

由表2可知，嘧菌環(huán)胺和纈霉威單劑對西瓜炭疽病菌的EC50值分別為1.92 mg/L和0.43 mg/L。當二者以1∶12、1∶8、1∶4、1∶1、4∶1、8∶1和12∶1比例進行混配，對西瓜炭疽病菌均表現(xiàn)出增效作用，其中嘧∶纈=8∶1時，混配增效作用最明顯，其共毒系數(shù)為203.59。綜合考慮，采用嘧菌環(huán)胺與纈霉威防治西瓜炭疽病以(1∶4)～(12∶1)復(fù)配較好。

表2 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對西瓜炭疽病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

2.3 嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對煙草猝倒病菌的聯(lián)合毒力

由表3可知，嘧菌環(huán)胺與纈霉威單劑對煙草猝倒病菌的EC50值分別為1.08 mg/L和0.58 mg/L。當二者以1∶12、1∶9、1∶3、1∶1、3∶1、9∶1和12∶1比例進行混配，對煙草猝倒病菌均表現(xiàn)出增效作用，其中嘧∶纈=3∶1時，混配增效作用最明顯，其共毒系數(shù)為196.29。綜合考慮，采用嘧菌環(huán)胺與纈霉威防治煙草猝倒病以(1∶9)～(9∶1)復(fù)配較好。

表3 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對煙草猝倒病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

續(xù)表3 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對煙草猝倒病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

2.4 嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對葡萄霜霉病菌的聯(lián)合毒力

由表4可知，嘧菌環(huán)胺與纈霉威單劑對葡萄霜霉病菌的EC50值分別為1.92 mg/L和0.23 mg/L。當二者以1∶9、1∶6、1∶3、1∶1、3∶1和6∶1比例進行混配，對葡萄霜霉病菌表現(xiàn)出增效作用，以9∶1混配時毒力表現(xiàn)為相加作用，其中嘧∶纈=1∶6時，混配增效作用最明顯，其共毒系數(shù)為201.98。綜合考慮，采用嘧菌環(huán)胺與纈霉威防治葡萄霜霉病以(1∶6)～(3∶1)復(fù)配較好。

表4 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對葡萄霜霉病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

2.5 嘧菌環(huán)胺和纈霉威復(fù)配對月季灰霉病菌的聯(lián)合毒力

由表5可知，嘧菌環(huán)胺與纈霉威單劑對月季灰霉病菌的EC50值分別為0.40 mg/L和0.94 mg/L。當二者以1∶9、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1和9∶1比例進行混配，對月季灰霉病菌均表現(xiàn)出增效作用，其中嘧∶纈=9∶1時，混配增效作用最明顯，其共毒系數(shù)為202.56。綜合考慮，采用嘧菌環(huán)胺與纈霉威防治月季灰霉病以(1∶5)～(9∶1)復(fù)配較好。

表5 嘧菌環(huán)胺與纈霉威混配對月季灰霉病菌的聯(lián)合毒力測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

目前市場上纈霉威的復(fù)配產(chǎn)品主要有纈霉威+丙森鋅、纈霉威+氟吡菌胺，主要用于葡萄、馬鈴薯、番茄、黃瓜、柑橘、煙草等，防治霜霉病、炭疽病和疫病等[13]。嘧菌環(huán)胺的復(fù)配產(chǎn)品主要有嘧菌環(huán)胺+糠菌唑、嘧菌環(huán)胺+環(huán)戊唑菌、嘧菌環(huán)胺+苯并噻二唑類衍生物及嘧菌環(huán)胺+抑霉唑等，主要用于蘋果斑點落葉病、香蕉葉斑病、香蕉黑星病、梨黑星病、葡萄灰霉病、水稻紋枯病、番茄灰霉病的防治，尤其對于葡萄和番茄的灰霉病、梨與香蕉的黑星病的防治效果突出[14]。本研究通過室內(nèi)生物測定表明，將嘧菌環(huán)胺與纈霉威按適當比例混配對草莓枯萎病菌、西瓜炭疽病菌、葡萄霜霉病菌、煙草猝倒病菌和月季灰霉病菌這5種不同病原菌都具有明顯的增效作用，可作為篩選和評價藥劑增效組合的依據(jù)。其增效作用機制可能是兩者混合使用后增加了藥劑對病菌的作用位點和作用途徑，從而提高了對病菌的毒力。其中纈霉威作用機制為作用于真菌細胞壁和蛋白質(zhì)的合成，能抑制孢子的侵染和萌發(fā)，同時具有內(nèi)吸性，能滲入植物角質(zhì)層后攻擊已經(jīng)侵染的真菌菌絲從而達到治療作用，并且它對真菌孢子具有鏟除作用，因而共同完成“內(nèi)在的保護”；全新結(jié)構(gòu)使其作用機制區(qū)別于目前所有防治卵菌綱的殺菌劑，因此無交互抗性，是抗性治理的理想用藥[15]。而嘧菌環(huán)胺能夠抑制真菌水解酶分泌和蛋氨酸的生物合成，兼具觸殺和持效雙重特性，應(yīng)用適期廣，無論在真菌侵染早期如孢子萌發(fā)、芽管生長以及侵入葉部，還是在菌絲生長期都能提供非常好的保護和治療作用，另外其有優(yōu)異的內(nèi)吸活性，能被植物快速吸收，并能在葉部均勻地向頂部傳遞[16]。在復(fù)配時2種有效成分功效互補，達到協(xié)同增效的目的，同時也可有效避免病原菌抗性的產(chǎn)生，延長2種藥劑的使用壽命。二者混配對以上5種作物病害的實際防治效果，還有待進一步的深入研究。

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Laboratory Co-toxicity of Cyprodinil and Carbamic Acid Complex against Pathogenic Fungi on Five Kinds of Crops

LIU Runqiang1,CAO Qianhui2,WANG Qingjun3，CHEN Xiling1

(1.College of Resources and Environment,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China; 2.Huixian Agricultural Bureau of Henan Province,Huixian 453600,China； 3.Henan Qilin Garden Technology Co.Ltd.,Zhengzhou 450045,China)

The synergistic activity of cyprodinil and carbamic acid complex againstFusariumoxysporumf.sp. Fragariae,Colletotrichumorbiculare(Berk.& Ment.) Arx,Plasmoparaviticola(Berk.et Curtis) Berl. et de Toni,Pythiumaphanidermatum(Edson) Fitzpatrick andBotrytiscinereaPers,the pathogenic fungi on 5 kinds of crops,strawberry,watermelon,grape,tobacco,and rose,respectively,was studied based on the mycelial growth method in the laboratory.The bioassay results showed that the EC50values of cyprodinil against 5 fungi ranged from 0.19 mg/L to 1.92 mg/L,and the EC50values of carbamic acid against 5 fungi ranged from 0.23 mg/L to 1.02 mg/L.When the ratio of cyprodinil and carbamic acid was 15∶1，the co-toxicity cofficient(CTC) against mycelial growth ofFusariumoxysporumf.sp.Fragariae was maximum(217.70)；When the ratio of the mixture was 8∶1, the CTC against mycelial growth ofColletotrichumorbiculare(Berk.& Ment.) Arx was maximum(203.59); When the ratio of the mixture was 3∶1,the CTC against mycelial growth ofPythiumaphanidermatum(Edson) Fitzpatrick was maximum(196.29);When the ratio of the mixture was 1∶6,the CTC against mycelial growth ofPlasmoparaviticola(Berk.et Curtis) Berl. et de Toni was maximum(201.98)；When the ratio of the mixture was 9∶1, the CTC against mycelial growth ofBotrytiscinereaPers was maximum(202.56).The results suggested that cyprodinil and carbamic acid had significant synergistic activity against 5 different fungi when combined by appropriate ratio.

cyprodinil; carbamic acid;Fusariumoxysporum;Colletotrichumorbiculare;Pythiumaphanidermatum;Plasmoparaviticola;Botrytiscinerea; synergistic activity

2016-04-24

河南科技學(xué)院高層次人才引進啟動項目(103010615001)；河南省博士后基金項目(159831)

劉潤強(1983-)，男，河南許昌人，講師，博士，主要從事農(nóng)藥復(fù)配及農(nóng)藥殘留分析檢測方面的研究。 E-mail：liurunqiang1983@126.com

時間：2016-09-06 17:55:58

S481+.3

A

1004-3268(2016)10-0093-05

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1092.S.20160906.1755.001.html