體外診斷試劑用純化水標(biāo)準(zhǔn)比較

蔡江波 江蘇省食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)證審評(píng)中心 （南京 210002）

體外診斷試劑用純化水標(biāo)準(zhǔn)比較

蔡江波 江蘇省食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)證審評(píng)中心 （南京 210002）

對(duì)體外診斷試劑用純化水三個(gè)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)指標(biāo)和試驗(yàn)方法進(jìn)行比較，根據(jù)影響水質(zhì)的因素和產(chǎn)品特性確定適用標(biāo)準(zhǔn)及執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)需采取的措施。

體外診斷試劑 純化水 標(biāo)準(zhǔn)

近年來(lái)體外診斷試劑行業(yè)發(fā)展迅速，各種新技術(shù)、新方法的運(yùn)用使體外診斷試劑在疾病的預(yù)測(cè)、預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測(cè)、預(yù)后觀察和健康狀態(tài)評(píng)價(jià)等方面發(fā)揮了重要作用。作為體外診斷試劑產(chǎn)品的組成部分或者生產(chǎn)過(guò)程中使用的工藝用水，純化水的質(zhì)量直接影響試劑檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

純化水質(zhì)量應(yīng)滿足法規(guī)和產(chǎn)品質(zhì)量的要求。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范體外診斷試劑現(xiàn)場(chǎng)檢查指導(dǎo)原則》中明確要求，體外診斷試劑工藝用水應(yīng)符合《藥典》或GB/T6682或YY/T1244等標(biāo)準(zhǔn)要求，中國(guó)藥典2015年版于2015年12月1日實(shí)施，GB/T6682-2008《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》于2008年11月1日實(shí)施，YY/T1244-2014《體外診斷試劑用純化水》作為第一個(gè)專門針對(duì)體外診斷試劑制定的純化水標(biāo)準(zhǔn)也于2015年7月1日實(shí)施。純化水既作為參與反應(yīng)物質(zhì)的溶劑，也用于制備樣本稀釋液、緩沖液，水中雜質(zhì)可干擾檢驗(yàn)結(jié)果，還可影響配套檢驗(yàn)分析儀器的管道系統(tǒng)和機(jī)械部件。本文根據(jù)臨床檢驗(yàn)的目的、方法、配套儀器要求，通過(guò)對(duì)YY/T1244-2014、GB/ T6682-2008、中國(guó)藥典2015年版三者的比較，確定作為產(chǎn)品組成部分的純化水的適用標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品符合技術(shù)要求、臨床檢驗(yàn)需要。

1.影響水質(zhì)指標(biāo)的因素

純化水常見制備方法有蒸餾法、反滲透法、離子交換法、電除鹽法等。經(jīng)過(guò)水系統(tǒng)處理后，純化水中仍存在顆粒物、離子、有機(jī)物、氣體、微生物等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的含量可通過(guò)pH值、電導(dǎo)率、總有機(jī)碳或易氧化物、不揮發(fā)物、微生物等指標(biāo)來(lái)反映。產(chǎn)品技術(shù)原理、預(yù)期用途不同，雜質(zhì)對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的影響不同，其中離子、有機(jī)物、微生物、氣體等雜質(zhì)對(duì)試劑的分析性能影響較大，不揮發(fā)物、可溶性硅含量可對(duì)部分產(chǎn)品分析性能產(chǎn)生影響。

1.1 電導(dǎo)率

電導(dǎo)率表示純化水的導(dǎo)電性能，水的純度越高，電導(dǎo)率越小。電導(dǎo)率大小與水中氣體、雜質(zhì)離子含量、pH值有關(guān)。氣體如CO2、Cl2等溶于水會(huì)改變pH值、離子濃度，使電導(dǎo)率升高。雜質(zhì)離子的增加會(huì)使電導(dǎo)率升高，不同離子含量、不同種類的離子對(duì)試劑分析性能的影響不同。對(duì)同種離子項(xiàng)目如鈣、鎂、磷、氯等無(wú)機(jī)離子測(cè)定時(shí)，測(cè)定結(jié)果會(huì)升高，并影響定標(biāo)。作為激活劑參與酶促反應(yīng)，離子含量高時(shí)會(huì)導(dǎo)致酶活性測(cè)定值升高，如Ca2+、Mg2+、Cl-等。作為抑制劑許多重金屬對(duì)酶有抑制作用，降低酶活性。離子含量高易與蛋白質(zhì)結(jié)合變性，堵塞儀器管道，改變比色杯顏色，導(dǎo)致空白吸光度升高。此外，電導(dǎo)率大小亦與溫度相關(guān)，隨溫度升高而增大。

1.2 總有機(jī)碳、易氧化物

總有機(jī)碳是以碳的含量來(lái)反映水中有機(jī)化合物含量，以此作為有機(jī)物污染程度的依據(jù)。有機(jī)物一般來(lái)自原水、制水系統(tǒng)，水中微生物及其代謝產(chǎn)物也會(huì)增加水中有機(jī)物含量，因此，總有機(jī)碳含量與純化水中有機(jī)物、微生物及細(xì)菌內(nèi)毒素含量相關(guān)。有機(jī)物具有螯合作用，可能與Ca2+、Mg2+螯合，影響電解質(zhì)的測(cè)定。有機(jī)物易黏附在儀器管網(wǎng)上，使管道系統(tǒng)和反應(yīng)杯難以清洗。

易氧化物是對(duì)易氧化的未知雜質(zhì)的總稱，由于不能準(zhǔn)確反映水中有機(jī)物質(zhì)含量，正逐步被總有機(jī)碳檢測(cè)代替。

1.3 微生物

純化水的微生物主要是細(xì)菌、真菌，大部分為革蘭氏陰性菌。細(xì)菌易形成生物膜，在生長(zhǎng)過(guò)程中分泌內(nèi)毒素、酶、離子、DNA、RNA等產(chǎn)物，污染水質(zhì)、堵塞腔管。含有微生物及代謝產(chǎn)物的水進(jìn)入生化分析儀，使吸光度升高；進(jìn)入高效液相色譜柱，可造成色譜柱阻塞，分析過(guò)程中產(chǎn)生假峰；影響DNA測(cè)序時(shí)的曲線峰；干擾酶的測(cè)定；影響免疫分析，如堿性磷酸酶可影響酶免疫和化學(xué)發(fā)光分析。

2.標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍

中國(guó)藥典2015年版作為制藥行業(yè)的法定標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定純化水是由飲用水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其他適宜的方法制得的制藥用水，不含任何添加劑，也可以作為試驗(yàn)用水（特殊規(guī)定除外）。YY/T1244-2014為推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定純化水由飲用水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其他適宜的方法制得，不含任何添加劑，可用于體外診斷試劑生產(chǎn)、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一般試劑配制、儀器及器械清洗，試劑生產(chǎn)有特殊要求的，參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或制定特殊要求。GB/T6682-2008屬于推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中二級(jí)水可用多次蒸餾或離子交換等方法制取，一般可用于常規(guī)臨床生化免疫檢測(cè)、無(wú)機(jī)痕量分析及各種容器器皿的清洗等。

中國(guó)藥典從制藥用水的角度制定技術(shù)指標(biāo)，GB/ T 6682-2008從分析實(shí)驗(yàn)室的角度制定指標(biāo)，YY/T 1244-2014則從體外診斷試劑產(chǎn)品角度制定技術(shù)指標(biāo)。

3.技術(shù)指標(biāo)

三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)指標(biāo)不盡相同。中國(guó)藥典2015年版有10個(gè)技術(shù)指標(biāo)，YY/T1244-2014、GB/T6682-2008二級(jí)水分別有5個(gè)技術(shù)指標(biāo)，對(duì)酸堿度、硝酸鹽、亞硝酸鹽、氮均不作要求。YY/T1244-2014的技術(shù)指標(biāo)在中國(guó)藥典中均有規(guī)定，但部分項(xiàng)目限值不同。GB/T6682-2008根據(jù)分析實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn)增加了一些指標(biāo)，如吸光度、可溶性硅，對(duì)微生物限度等指標(biāo)不作要求。

3.1 電導(dǎo)率

中國(guó)藥典2015年版明確了不同溫度（0～100°C）時(shí)的電導(dǎo)率限值，其中25°C時(shí)電導(dǎo)率≤0.51 mS/ m，YY/T1244-2014、GB/T6682-2008二級(jí)水只明確了25°C時(shí)的電導(dǎo)率≤0.1mS/m，要求顯著高于中國(guó)藥典2015年版。對(duì)于其他溫度的電導(dǎo)率限值，GB/ T6682-2008、YY/T1244-2014采用溫度換算計(jì)算限值。

3.2 總有機(jī)碳、易氧化物

YY/T1244-2014與中國(guó)藥典2015年版對(duì)總有機(jī)碳和易氧化物指標(biāo)要求二選一即可，GB/ T6682-2008只要求檢測(cè)易氧化物質(zhì)含量，不檢測(cè)總有機(jī)碳含量。根據(jù)試驗(yàn)方法計(jì)算，中國(guó)藥典2015年版、YY/T1244-2014易氧化物要求一致，但低于GB/T6682-2008二級(jí)水的要求（以o計(jì)，含量≤0.08mg/L）。

3.3 不揮發(fā)物

中國(guó)藥典2015年版、GB/T6682-2008對(duì)該指標(biāo)名稱有區(qū)別，前者為不揮發(fā)物，后者為蒸發(fā)殘?jiān)夹g(shù)指標(biāo)值相同，YY/T1244-2014則不作要求。

3.4 微生物限度

中國(guó)藥典2015年版對(duì)微生物的要求為需氧菌總數(shù)≤100CFU/ml，需氧菌總數(shù)是指能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。YY/T1244-2014要求為微生物總數(shù)≤50 CFU/mL，由于引用中國(guó)藥典2010年版，微生物總數(shù)應(yīng)是細(xì)菌、霉菌、酵母菌總數(shù)。GB/T6682-2008對(duì)微生物限度不作要求。

4.試驗(yàn)方法

YY/T1244-2014、GB/T6682-2008均未對(duì)酸堿度、硝酸鹽、亞硝酸鹽、氮提出要求，因此僅對(duì)三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)共有指標(biāo)的試驗(yàn)方法作比較。YY/ T1244-2014對(duì)規(guī)范性引用文件的規(guī)定是“凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件”，因此，總有機(jī)碳、易氧化物、微生物限度三個(gè)項(xiàng)目檢驗(yàn)方法均為中國(guó)藥典2010年版。

4.1 電導(dǎo)率

YY/T1244-2014、GB/T6682-2008都規(guī)定了25°C時(shí)的電導(dǎo)率，要求采用具有溫度補(bǔ)償功能的電導(dǎo)率儀或裝有在線熱交換器的電導(dǎo)率儀，使測(cè)量時(shí)溫度控制在25°C±1°C，也可記錄水溫度，采用溫度換算的方法，GB/T6682-2008提供了換算公式。由于水的電導(dǎo)率采用溫度修正的計(jì)算方法所得數(shù)值誤差較大，中國(guó)藥典2015年版四部通則0681制藥用水電導(dǎo)率測(cè)定方法則采用非溫度補(bǔ)償方式，采用離線或在線電導(dǎo)率儀測(cè)試，測(cè)定的電導(dǎo)率值應(yīng)不大于測(cè)定溫度時(shí)的限度值。

4.2 總有機(jī)碳、易氧化物

YY/T1244-2014采用中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅧR制藥用水中總有機(jī)碳測(cè)定方法的試驗(yàn)方法，與中國(guó)藥典2015年版四部通則0682制藥用水中總有機(jī)碳測(cè)定方法相同，根據(jù)水生產(chǎn)條件和具體情況采用離線或在線檢測(cè)。

對(duì)于易氧化物的檢測(cè)，三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試原理相同，YY/T1244-2014與中國(guó)藥典2015年版的試驗(yàn)方法完全相同，GB/T6682-2008采用的純化水樣本用量、高錳酸鉀滴定量、煮沸時(shí)間與前兩者均不相同。

4.3 不揮發(fā)物

中國(guó)藥典2015年版、GB/T6682-2008采用的樣本量不同，前者為100ml，后者為1000ml。由于取樣量不同，采用的試驗(yàn)方法亦不同，前者采用蒸發(fā)皿蒸發(fā)至恒重，后者由于樣本量大，采用先旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)后蒸發(fā)皿蒸發(fā)的方式。

4.4 微生物限度

中國(guó)藥典2015年版微生物限度采用四部通則1105薄膜過(guò)濾法，采用R2A瓊脂培養(yǎng)基，30°C～35°C培養(yǎng)不少于5天，檢測(cè)需氧菌總數(shù)。YY/T1244-2014采用中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法中薄膜過(guò)濾法，細(xì)菌采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基30°C～35°C培養(yǎng)3天，霉菌及酵母菌采用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基23°C～28°C培養(yǎng)5天，檢測(cè)細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)，兩者的培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間差異較大。此外，培養(yǎng)基適用性檢查采用的試驗(yàn)菌株、培養(yǎng)基也發(fā)生了變化。中國(guó)藥典2010年版純化水要求中未明確計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查方法，而附錄ⅪJ中適用性檢查規(guī)定試驗(yàn)菌有大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉5種，培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，2015年版則明確R2A瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查時(shí)選用銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌。由于培養(yǎng)體系的變化，新方法更利于微生物的檢出，在污染菌的檢出率上與2010年版中國(guó)藥典相比顯著提高，能更好地反映微生物污染的真實(shí)情況。

檢驗(yàn)環(huán)境要求亦不同。2010年版微生物限度檢查要求在10000級(jí)下的局部100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，2015年版要求在受控潔凈環(huán)境下（不低于D級(jí)）的局部不低于B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。

5.應(yīng)對(duì)措施

檢驗(yàn)分析系統(tǒng)日趨整體化、自動(dòng)化，檢測(cè)靈敏度也越來(lái)越高，為避免雜質(zhì)干擾導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏倚，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品檢驗(yàn)?zāi)康?、原水水質(zhì)情況、純化水制備方法的特點(diǎn)選擇適用的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范生產(chǎn)、儲(chǔ)存、使用過(guò)程，定期進(jìn)行水質(zhì)相關(guān)指標(biāo)監(jiān)測(cè)評(píng)估和分析，掌握變化趨勢(shì)，確保持續(xù)穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合要求的純化水。YY/T1244-2014、中國(guó)藥典2015年版都是新標(biāo)準(zhǔn)，提高了電導(dǎo)率和微生物限度指標(biāo)，如果企業(yè)在質(zhì)量管理體系文件中規(guī)定純化水符合這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中之一，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)時(shí)需要考慮以下內(nèi)容：

5.1 制水系統(tǒng)

如果產(chǎn)品對(duì)電導(dǎo)率有較高要求，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注純化水電導(dǎo)率能否滿足產(chǎn)品和標(biāo)準(zhǔn)要求，必要時(shí)增加去離子設(shè)備如增加EDI單元（連續(xù)電除鹽）進(jìn)行系統(tǒng)改造。如產(chǎn)品要求使用低微生物污染的純化水，根據(jù)微生物污染情況調(diào)整或更換水系統(tǒng)中與微生物污染控制相關(guān)的預(yù)處理、制備、儲(chǔ)存、輸送系統(tǒng)，并長(zhǎng)期跟蹤監(jiān)測(cè)。

5.2 檢驗(yàn)儀器、方法

中國(guó)藥典2015年版與2010年版的微生物限度試驗(yàn)方法變化較大。中國(guó)藥典2015年版對(duì)微生物限度試驗(yàn)方法的試驗(yàn)環(huán)境、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)時(shí)間、溫度等變化使微生物更容易檢出，采用新方法需要進(jìn)行微生物限度檢驗(yàn)的計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)、培養(yǎng)基適用性檢查等工作，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果修訂相應(yīng)的檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書。同時(shí)對(duì)新增的培養(yǎng)基供應(yīng)商進(jìn)行評(píng)估審核，確定合格供應(yīng)商名單。

5.3 文件修訂、人員培訓(xùn)

對(duì)質(zhì)量管理體系文件中涉及純化水的文件進(jìn)行修訂，包括技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、作業(yè)指導(dǎo)書、記錄等，同時(shí)按新修訂文件要求對(duì)純化水制備、檢驗(yàn)等相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)、考核。

[1] YY/T1244-2014,體外診斷試劑用純化水[S]

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典2010年版(二部)

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典2015年版(四部)

[4] GB/T 6682-2008,分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法[S]

[5] 李婧, 黃孝菊, 高功剛. 水質(zhì)對(duì)電解質(zhì)鈣、鎂、磷檢測(cè)結(jié)果的影響[J]. 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥, 2013,20(15)：80-81

[6] 周炳燁, 王志新. 純水質(zhì)量對(duì)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)的影響[J]. 現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2010,25(1)：150-152

[7] 叢玉隆. 實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)(下冊(cè))第2版[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2013：727

[8] 李玨, 洪利婭, 王知堅(jiān)等. 制藥用水微生物限度檢查新方法的研究[J]. 藥物分析雜志, 2014,34(2)：376-379

[9] 郭準(zhǔn), 毛省俠. 體外診斷試劑工藝用水質(zhì)量控制的必要性及方法分析[J]. 中國(guó)藥業(yè), 2013,22(22)：5-7

The Comparison of Standards of Pure Water for IVD Use

CAI Jiang-bo Center for Certifcation and Evaluation, JSFDA (Nanjing 210002)

The article compares technical indexes and test methods of three current standards of pure water for in vitro diagnostic reagent use, chooses the right standard according to factors effecting water quality and product feature, and takes measures to meet requirements of standards.

in vitro diagnostic reagent, pure water, standard

1006-6586(2016)11-0070-04

TH776

A

2016-09-28