• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白的研究進(jìn)展

    2016-02-03 10:05:13宋淑英張澤輝王莊徐煒閆明
    湖北畜牧獸醫(yī) 2015年12期
    關(guān)鍵詞:半胱氨酸豬瘟抗原

    宋淑英++張澤輝++王莊++徐煒++閆明

    摘要:對豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行了綜述,進(jìn)一步弄清了豬瘟病毒的結(jié)構(gòu),為豬瘟病毒的研究提供理論支撐。

    關(guān)鍵詞:豬;豬瘟病毒;研究進(jìn)展

    中圖分類號:S852.65+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B 文章編號:1007-273X(2015)12-0007-03

    豬瘟由豬瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)引起,是在豬間流行的一種重要傳染病?;钾i會出現(xiàn)運(yùn)動失調(diào)、后肢無力、高熱、皮膚出現(xiàn)出血點(diǎn)或出血斑等癥狀[1]。該病致死率高且難以清除,隱性感染或治愈豬通常會成為潛在感染源。在被感染豬的多個器官,如扁桃體、皮膚、淋巴、脾臟等,都能夠檢測出豬瘟病毒。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國每年因豬瘟而造成的損失高達(dá)100億元以上[2]。

    豬瘟造成的危害巨大,而其病原致病性,主要是通過病毒基因組RNA所編碼的蛋白實(shí)現(xiàn)的。研究表明,CSFV的基因組RNA主要由3部分組成,分別為3′非編碼區(qū)(3′-untranslated region, 3′UTR)、5′非編碼區(qū)(5′-untranslated region, 5′UTR)以及一個較大的開放閱讀框(ORF)[3]。在ORF編碼產(chǎn)生的蛋白中,結(jié)構(gòu)蛋白與病毒致病、免疫,以及防控疫苗研制等方面關(guān)系最為密切。本對CSFV結(jié)構(gòu)蛋白的研究進(jìn)展進(jìn)行介紹,為探明病毒致病機(jī)理,更好防控豬瘟提供理論依據(jù)。

    1 ORF

    CSFV的ORF位于病毒的5′UTR與3′UTR之間。病毒基因組RNA全長約為12.3 kB,其大部分為ORF。該ORF編碼一個由3 898個氨基酸所構(gòu)成的多聚蛋白(polyprotein,PPro)。該蛋白能夠被宿主細(xì)胞的信號肽酶及病毒自身合成的蛋白酶所識別、加工[4],進(jìn)而被分解為12種蛋白質(zhì)。按照編碼各種蛋白質(zhì)基因的順序,12種蛋白分別為Npro、C、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B。其中C、Erns、E1及E2為病毒結(jié)構(gòu)蛋白[5],其余8種為非結(jié)構(gòu)蛋白。結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白共同作用,參與病毒復(fù)制、傳播等過程。

    2 CSFV結(jié)構(gòu)蛋白

    2.1 C蛋白

    CSFV C蛋白,也稱核衣殼蛋白C。編碼該蛋白的基因大小為192 bp,是由PPro經(jīng)宿主細(xì)胞中的信號肽酶加工而成。構(gòu)成該蛋白的氨基酸具有較強(qiáng)的親水性。序列分析發(fā)現(xiàn),組成該蛋白的多為帶正電荷的精氨酸及賴氨酸殘基,推測可能與基因組RNA結(jié)合作用有關(guān)[6]。最近的研究發(fā)現(xiàn),C蛋白在黃病毒科中的丙型肝炎病毒中,具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的作用。C蛋白能夠有效的抑制基因組中核糖體結(jié)合位點(diǎn)的活性,使病毒的復(fù)制、翻譯過程受到抑制,降低病毒的增殖效率,呈現(xiàn)持續(xù)感染的狀態(tài)。但C蛋白在CSFV中是否存在同樣功能尚不清楚。

    2.2 Erns

    Erns蛋白存在于PPro的268~494位,由227個氨基酸殘基構(gòu)成,分子量為44~48 kDa之間。結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),該蛋白具有9個潛在的糖基化位點(diǎn),在病毒粒子中,通常以同源二聚體的形成存在[7],二聚體分子量約為100 kDa。被感染的細(xì)胞能夠分泌大量的Erns蛋白。

    對Erns功能研究發(fā)現(xiàn),該蛋白除是一種囊膜蛋白外,同時具有核糖核酸酶活性,對尿嘧啶具有較高專一性。在pH 6.0~6.5時活性最高,Mn2+與Zn2+為酶活性強(qiáng)抑制劑,Ca2+與Mg2+對其抑制作用較弱。該蛋白具有較高的熱穩(wěn)定性,50~60 ℃時活性最強(qiáng),在65 ℃時仍能夠保持75%的酶活性,而在37 ℃時的活性能夠保持在86%左右[8]。

    Erns具有免疫抑制活性,同時具有一定神經(jīng)毒性及抗蠕蟲能力。蛋白的297位及346位氨基酸為酶活性必需氨基酸,該位點(diǎn)氨基酸發(fā)生突變后,Erns將失去核糖核酸酶活性,但仍能與相應(yīng)抗體結(jié)合。研究表明,Erns的核糖核酸酶活性在CSFV復(fù)制過程中具有重要作用,與自然宿主長期帶毒及隱性感染有關(guān)。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Erns對不同種屬的淋巴細(xì)胞蛋白合成均有較強(qiáng)的抑制作用,尤其是對人、豬、羊和牛的淋巴細(xì)胞增殖,能夠完全抑制其增殖[9]。在Erns蛋白346位的組氨酸對CSFV的致病性具有決定性作用,當(dāng)該位點(diǎn)發(fā)生氨基酸突變時,病毒的致病力將完全消失,突變病毒雖能夠在細(xì)胞中穩(wěn)定傳代,但產(chǎn)毒量顯著降低。在病毒侵入細(xì)胞的過程中,Erns也發(fā)揮了重要作用。研究表明,Erns蛋白能夠與位于細(xì)胞表面的膜蛋白相互作用。在豬腎細(xì)胞試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),CSFV與腎細(xì)胞結(jié)合是通過Erns蛋白與細(xì)胞表面中的硫酸乙酰肝素相互作用而實(shí)現(xiàn)的[10]。

    Erns蛋白能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生對CSFV的免疫能力。由于編碼Erns蛋白的核苷酸序列保守性相對較高,因此Erns可作為免疫防控豬瘟的靶蛋白。Erns的抗原決定簇可分為3個區(qū)域,AR1,AR2及AR3。3個區(qū)域單獨(dú)或共同都可以與感染CSFV的血清發(fā)生反應(yīng)。對Erns蛋白高級結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn),與其他核糖核酸酶不同,Erns具有一個C-端延伸區(qū)域、一個截短的N-端以及一個大的富含半胱氨酸的插入?yún)^(qū)域。其中C-端延伸區(qū)域和蛋白的跨膜定位有關(guān)[11]。

    2.3 E1

    E1蛋白是CSFV的囊膜糖蛋白,位于PPro的495~689位氨基酸之間,由195個氨基酸殘基構(gòu)成,蛋白骨架的分子量約為21.8 kDa。有3個潛在的N-糖基化位點(diǎn)。E1蛋白是由糖基化酶、宿主細(xì)胞的信號肽酶及蛋白水解酶共同加工、成熟的。E1和E2蛋白可以通過二硫鍵構(gòu)成異源的二聚體。E1存在于病毒囊膜內(nèi),無法誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生CSFV中和抗體[5]。

    2.4 E2

    E2蛋白同樣為病毒的囊膜糖蛋白,但與E1蛋白不同,E2是CSFV的主要保護(hù)性抗原蛋白。該蛋白由370個氨基酸殘基構(gòu)成,分子量約為41.5 kDa。蛋白位于PPro的690~1 060位氨基酸,存在5個潛在糖基化位點(diǎn),每個位點(diǎn)都可以與分子量為2 kDu~3 kDa的低聚糖結(jié)合[12]。在蛋白N-端存在4個主要抗原位點(diǎn),其上游為一段信號肽序列,C-端為一個由18個氨基酸組成的疏水側(cè)鏈而構(gòu)成的跨膜蛋白。E2蛋白同E1蛋白一樣,通常以二聚體形式存在于CSFV感染的細(xì)胞表面及病毒粒子內(nèi)。

    E2蛋白含有刺激產(chǎn)生病毒中和抗體的抗原決定簇,可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對CSFV的中和抗體。研究發(fā)現(xiàn),E2蛋白抗原區(qū)域均存在于蛋白的N-端和690~866位氨基酸殘基區(qū)間,共包括4個部分,即A、B、C和D。而蛋白的其他區(qū)域不參與形成抗原表位構(gòu)象。A區(qū)又可以分為3個亞區(qū),A1,A2和A3。在這些區(qū)域中,A1,A2保守性較高,B、C、D及A3容易發(fā)生變異。A1,B和C區(qū)為中和性抗原表位。另外,在E2蛋白的羧基端995~998位處,是一個以YYEP為核心序列的線性表位,該表位在整個瘟病毒屬中具有較高的同源性,為瘟病毒屬所共有的抗原表位。保護(hù)性試驗(yàn)表明,由A,B,C,D 4個抗原區(qū)域中任一區(qū)域誘導(dǎo)的免疫反應(yīng),都能夠使豬獲得對CSFV強(qiáng)毒株的免疫能力[13]。

    位于E2蛋白829~837位的氨基酸序列在CSFV中具有較高的保守性,而與瘟病毒屬中的其他病毒差異性則較大。因此可根據(jù)該段序列設(shè)計(jì)針對性的診斷及免疫試劑。而位于E2 N-端690~812位的123個氨基酸殘基中,推測含有與IgG結(jié)合區(qū)域,該區(qū)域與其他瘟病毒無交叉反應(yīng)[14],可用于CSFV血清學(xué)檢測。

    在E2蛋白中共有15個半胱氨酸,其中位于蛋白N-端的6個半胱氨酸在蛋白形成正確折疊構(gòu)象中起重要作用。位于695和737位的半胱氨酸是B及C區(qū)與單抗結(jié)合的必需基團(tuán),而位于792、818及856位的半胱氨酸與A區(qū)及D區(qū)的抗體結(jié)合有關(guān)。因此推測,可將E2蛋白的抗原性分為兩個相對獨(dú)立的結(jié)構(gòu)單元,一個由B區(qū)和C區(qū)構(gòu)成的保守性相對較低的單元,另一個由A區(qū)和D區(qū)構(gòu)成的高度保守單元。其中B區(qū)與C區(qū)通過2個靠近N-端的半胱氨酸形成的二硫鍵連接,A區(qū)與D區(qū)則通過其他3個半胱氨酸形成的2對二硫鍵連接[15]。

    E2蛋白與CSFV對宿主細(xì)胞的識別與吸附能力有關(guān),能夠決定病毒對細(xì)胞的感染傾向性。研究發(fā)現(xiàn),E2蛋白能夠與宿主細(xì)胞膜中的低密度脂蛋白受體結(jié)合。而對病毒結(jié)構(gòu)蛋白E1、E2和Erns研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)只存在E1和E2蛋白時,病毒就可以感染細(xì)胞,Erns為病毒感染的非必需蛋白。在結(jié)構(gòu)蛋白中E2蛋白比較容易發(fā)生變異,而E2功能又與病毒感染以及抗體生成有關(guān),因此E2的變異性,能夠使CSFV對環(huán)境有較強(qiáng)的適應(yīng)性,同時又能使免疫疫苗失效[11~13]。

    3 展望

    豬瘟病毒對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大威脅,但其具體的致病機(jī)制仍不明確。目前,疫苗免疫仍是防控豬瘟最有效的方式之一。而隨著對病毒基因組RNA及相關(guān)蛋白研究的不斷深入,使探明病毒致病機(jī)制、有效防控豬瘟成為可能。在CSFV結(jié)構(gòu)蛋白中,E2蛋白由于與免疫應(yīng)答有關(guān),對其結(jié)構(gòu)及功能的研究比較深入。同時,隨著對病毒其他結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白的結(jié)構(gòu)、功能的不斷研究,防控豬瘟的思路和方法也將逐漸拓寬。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 陶玉順,黃 濤,袁東波,等. 目前我國豬瘟的流行現(xiàn)狀及防控措施[J]. 畜牧與獸醫(yī),2008,40(8):90-95.

    [2] 謝金文,王金良,董 林,等. 豬瘟病毒E2基因主要抗原區(qū)的克隆及原核表達(dá)[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2012(1):10-14.

    [3] 劉 寧,石洪艷,陳建飛,等. 豬瘟病毒衣殼蛋白的細(xì)胞核定位研究[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,36(1):71-73.

    [4] SAWFORD K, GEONG M, BULU P M, et al. An investigation of classical swine fever virus seroprevalence and risk factors in pigs in East Nusa Tenggara, eastern Indonesia[J]. Prev Vet Med, 2015,119(3-4):190-202.

    [5] 崔照瓊,張以芳. 豬瘟病毒E2基因的克隆和原核表達(dá)[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2015(5):173-176.

    [6] 張 雙,郭 慧,徐 浩,等. 新型豬瘟疫苗的研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)雜志,2015,51(1):72-76.

    [7] TARRADAS J, TORRE ME D L , ROSELL R, et al. The impact of CSFV on the immune response to control infection[J]. Virus Res, 2014,24(185):82-91.

    [8] 毛澤明,加春生,毛澤天,等. 規(guī)模化豬場豬瘟發(fā)病新特征及預(yù)防[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2014(1):46-47.

    [9] 董炳梅,張春玲,魏 鳳,等. 豬瘟病毒E2蛋白靶向化樹突狀細(xì)胞疫苗的制備及對家兔的免疫效果[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,34(5):695-670.

    [10] HUA R H, HUO H, LI Y N, et al. Generation and efficacy evaluation of recombinant classical swine fever virus E2 glycoprotein expressed in stable transgenic mammalian cell line[J]. PLoS One, 2014,9(9):e106891.

    [11] HE L, ZHANG Y, FANG Y, et al. Classical swine fever virus induces oxidative stress in swine umbilical vein endothelial cells[J]. BMC Vet Res, 2014,2(10):279-288.

    [12] 張秀峰,劉玉茹,高云航. 規(guī)?;i場豬瘟超前免疫對抗體水平的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2013(2):84-85.

    [13] LI L, WU R, ZHENG F, et al. The N-terminus of classical swine fever virus (CSFV) nonstructural protein 2 modulates viral genome RNA replication[J]. Virus Res, 2015,29(2):90-99.

    [14] HUANG Y L, DENG M C, WANG F I, et al. The challenges of classical swine fever control: modified live and E2 subunit vaccines[J]. Virus Res, 2014,22(179):1-11.

    [15] 凌理軍,李 素,董 泓,等. 豬瘟病毒E2蛋白與豬RACK1相互作用的鑒定[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012,34(4):279-282.

    猜你喜歡
    半胱氨酸豬瘟抗原
    豬瘟爆發(fā),豬肉還敢吃嗎?
    幸福(2019年12期)2019-05-16 02:27:44
    豬瘟病毒感染的診治
    西安地區(qū)同型半胱氨酸參考區(qū)間的初步建立
    淺談豬瘟防治
    梅毒螺旋體TpN17抗原的表達(dá)及純化
    結(jié)核分枝桿菌抗原Lppx和MT0322人T細(xì)胞抗原表位的多態(tài)性研究
    同型半胱氨酸與慢性心力衰竭合并腎功能不全的相關(guān)性分析
    APOBEC-3F和APOBEC-3G與乙肝核心抗原的相互作用研究
    86例同型半胱氨酸與腦梗死相關(guān)性分析
    鹽酸克倫特羅人工抗原的制備與鑒定
    少妇粗大呻吟视频| 国产在线观看jvid| 日本黄色视频三级网站网址| 999精品在线视频| 欧美在线黄色| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 最新美女视频免费是黄的| 亚洲专区字幕在线| 18禁观看日本| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 午夜福利在线观看吧| 国产精品亚洲av一区麻豆| 9色porny在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| av欧美777| 亚洲九九香蕉| 久久这里只有精品19| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲成人国产一区在线观看| a在线观看视频网站| 久久久国产一区二区| 99国产精品99久久久久| www.自偷自拍.com| 淫秽高清视频在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 性少妇av在线| 韩国av一区二区三区四区| 又紧又爽又黄一区二区| 午夜影院日韩av| 国产精品九九99| 91国产中文字幕| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲专区国产一区二区| 色哟哟哟哟哟哟| 久久青草综合色| 日日干狠狠操夜夜爽| 五月开心婷婷网| 午夜亚洲福利在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 日本a在线网址| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美在线一区亚洲| 久久午夜亚洲精品久久| x7x7x7水蜜桃| 精品福利永久在线观看| а√天堂www在线а√下载| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 午夜福利在线免费观看网站| av视频免费观看在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品一区二区三区四区五区乱码| 91国产中文字幕| 一级片免费观看大全| 国产精品久久视频播放| 久久久久国内视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产三级在线视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 97碰自拍视频| 欧美乱色亚洲激情| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品二区激情视频| 免费观看人在逋| 午夜精品在线福利| www国产在线视频色| 亚洲欧美激情综合另类| 天天添夜夜摸| 日本黄色日本黄色录像| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲av美国av| 一级片免费观看大全| 黄色片一级片一级黄色片| 制服人妻中文乱码| 精品国产乱子伦一区二区三区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 级片在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲人成电影观看| 大香蕉久久成人网| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产亚洲欧美精品永久| 国产片内射在线| 99国产精品99久久久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 日日爽夜夜爽网站| 一二三四在线观看免费中文在| 午夜影院日韩av| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| а√天堂www在线а√下载| 国产精品久久视频播放| 成人手机av| 在线观看午夜福利视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美精品一区二区免费开放| 国产麻豆69| 9色porny在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 超色免费av| 免费av中文字幕在线| 在线观看舔阴道视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产97色在线日韩免费| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 超碰97精品在线观看| 成人三级黄色视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产又爽黄色视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产高清国产精品国产三级| 身体一侧抽搐| 99国产综合亚洲精品| 性欧美人与动物交配| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线观看一区二区三区激情| 免费看十八禁软件| 脱女人内裤的视频| 免费少妇av软件| 人成视频在线观看免费观看| 高清在线国产一区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩欧美三级三区| 性少妇av在线| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲激情在线av| 国产精品 国内视频| 女人被狂操c到高潮| 国产乱人伦免费视频| 黑人操中国人逼视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜激情av网站| 在线观看免费视频日本深夜| 免费高清视频大片| 香蕉丝袜av| 女人被狂操c到高潮| 99国产精品一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲国产精品合色在线| www.999成人在线观看| 视频区图区小说| 午夜91福利影院| 成人三级黄色视频| 午夜精品在线福利| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一进一出好大好爽视频| 男人操女人黄网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 免费在线观看黄色视频的| 伦理电影免费视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩欧美三级三区| 日本黄色日本黄色录像| 90打野战视频偷拍视频| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 两个人看的免费小视频| 午夜激情av网站| 国产精品影院久久| 久久精品国产清高在天天线| 国产成人精品在线电影| 亚洲av成人av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久亚洲真实| 视频区图区小说| 久久青草综合色| 亚洲中文字幕日韩| 精品人妻1区二区| 一级a爱片免费观看的视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久影院123| 看片在线看免费视频| av电影中文网址| 一级黄色大片毛片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久天堂一区二区三区四区| 99国产综合亚洲精品| 欧美色视频一区免费| 亚洲国产欧美网| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品久久视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 免费不卡黄色视频| 国产乱人伦免费视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 色老头精品视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美一级毛片孕妇| 91字幕亚洲| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日韩欧美在线二视频| 亚洲国产精品合色在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区二区三区综合在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | x7x7x7水蜜桃| 99久久精品国产亚洲精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 多毛熟女@视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 99精品在免费线老司机午夜| 精品高清国产在线一区| 午夜日韩欧美国产| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美日韩精品网址| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 老汉色∧v一级毛片| 国产三级在线视频| 亚洲国产精品999在线| 亚洲三区欧美一区| e午夜精品久久久久久久| 伦理电影免费视频| 不卡av一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 免费高清在线观看日韩| 精品无人区乱码1区二区| 日韩免费高清中文字幕av| 一区二区日韩欧美中文字幕| 极品教师在线免费播放| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品国产高清国产av| 久久人人97超碰香蕉20202| www.999成人在线观看| 高清毛片免费观看视频网站 | 欧美中文综合在线视频| 性色av乱码一区二区三区2| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产片内射在线| 丝袜美足系列| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品久久电影中文字幕| 日韩欧美国产一区二区入口| 母亲3免费完整高清在线观看| 高清av免费在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品电影一区二区在线| 长腿黑丝高跟| 亚洲五月婷婷丁香| √禁漫天堂资源中文www| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲片人在线观看| 一级片免费观看大全| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品av久久久久免费| 国产亚洲欧美98| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 天天添夜夜摸| 黄片大片在线免费观看| 久久这里只有精品19| 最近最新中文字幕大全电影3 | 校园春色视频在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 超碰成人久久| 国产99白浆流出| 亚洲欧美日韩无卡精品| av视频免费观看在线观看| 国产精品二区激情视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲片人在线观看| 亚洲国产看品久久| 长腿黑丝高跟| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲自拍偷在线| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品在线观看二区| 国产一区二区三区视频了| 精品一品国产午夜福利视频| 久久中文字幕一级| 亚洲免费av在线视频| av电影中文网址| 99在线人妻在线中文字幕| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 欧美日韩av久久| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品野战在线观看 | 久久 成人 亚洲| 亚洲视频免费观看视频| 多毛熟女@视频| 精品人妻1区二区| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 丝袜美足系列| 国产免费现黄频在线看| 亚洲色图综合在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 色在线成人网| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产片内射在线| 一级黄色大片毛片| 亚洲男人天堂网一区| 天天添夜夜摸| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 看免费av毛片| 国产成人欧美| 国产成人精品在线电影| 免费在线观看日本一区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品国产av在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产真人三级小视频在线观看| 久久性视频一级片| 不卡av一区二区三区| 日韩三级视频一区二区三区| 老司机福利观看| 欧美日韩黄片免| 国产精品日韩av在线免费观看 | 中亚洲国语对白在线视频| 搡老乐熟女国产| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 欧美乱妇无乱码| 真人做人爱边吃奶动态| 五月开心婷婷网| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲av美国av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美大码av| 午夜福利一区二区在线看| 婷婷丁香在线五月| 久久狼人影院| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 高清av免费在线| 亚洲成人免费av在线播放| 精品无人区乱码1区二区| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 成人三级黄色视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产在线观看jvid| 久久久国产成人精品二区 | √禁漫天堂资源中文www| 国产一区在线观看成人免费| 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看免费视频网站a站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 99re在线观看精品视频| 性欧美人与动物交配| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩有码中文字幕| av电影中文网址| 日韩欧美三级三区| 久久狼人影院| 99精国产麻豆久久婷婷| 老司机福利观看| 老司机在亚洲福利影院| 99国产精品免费福利视频| 国产亚洲欧美98| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 十分钟在线观看高清视频www| 国产乱人伦免费视频| 日韩三级视频一区二区三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久久久久久精品吃奶| 成人精品一区二区免费| 一进一出好大好爽视频| 女人被狂操c到高潮| 亚洲五月色婷婷综合| 免费高清在线观看日韩| 黄片播放在线免费| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 波多野结衣一区麻豆| 高清欧美精品videossex| 亚洲av美国av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品国产区一区二| 电影成人av| 一区二区三区国产精品乱码| 久久中文看片网| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩中文字幕欧美一区二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 91av网站免费观看| 曰老女人黄片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 不卡一级毛片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成在线人永久免费视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜免费激情av| 不卡一级毛片| 精品国产一区二区久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 十分钟在线观看高清视频www| 国产成人系列免费观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 1024香蕉在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 女性生殖器流出的白浆| 无限看片的www在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久精品亚洲av国产电影网| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 看黄色毛片网站| 亚洲人成77777在线视频| xxxhd国产人妻xxx| 一a级毛片在线观看| 后天国语完整版免费观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区| 性少妇av在线| 久久精品91蜜桃| 人成视频在线观看免费观看| 国产1区2区3区精品| 午夜免费观看网址| 日本wwww免费看| 国产乱人伦免费视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 黑丝袜美女国产一区| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美一级毛片孕妇| 欧美一区二区精品小视频在线| 中国美女看黄片| 看黄色毛片网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 美女大奶头视频| 免费在线观看亚洲国产| 欧美一区二区精品小视频在线| 十八禁人妻一区二区| 成年版毛片免费区| 黑人操中国人逼视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产亚洲欧美98| 麻豆久久精品国产亚洲av | 中文字幕高清在线视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 黄片播放在线免费| 欧美黄色片欧美黄色片| 两个人看的免费小视频| 久久中文看片网| 久久热在线av| 99热只有精品国产| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日本 av在线| 欧美一级毛片孕妇| 精品一区二区三卡| 大码成人一级视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 午夜日韩欧美国产| 国产av一区二区精品久久| 日本三级黄在线观看| 午夜福利欧美成人| 校园春色视频在线观看| 丁香欧美五月| 女同久久另类99精品国产91| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲av成人一区二区三| 日本欧美视频一区| 精品久久蜜臀av无| 亚洲第一av免费看| 女警被强在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产麻豆69| 村上凉子中文字幕在线| 性欧美人与动物交配| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品久久久久久电影网| 男人舔女人的私密视频| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区激情视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 曰老女人黄片| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美人与性动交α欧美软件| av有码第一页| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲精品一区av在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 波多野结衣av一区二区av| 老司机福利观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 色尼玛亚洲综合影院| 国产91精品成人一区二区三区| 黄色丝袜av网址大全| 宅男免费午夜| 久久热在线av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品野战在线观看 | www.熟女人妻精品国产| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 少妇的丰满在线观看| 亚洲成人久久性| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| www.www免费av| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美乱妇无乱码| 色哟哟哟哟哟哟| 久9热在线精品视频| 妹子高潮喷水视频| 后天国语完整版免费观看| 男人舔女人的私密视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲人成电影免费在线| 日韩精品青青久久久久久| 欧美黄色淫秽网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 1024香蕉在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 成在线人永久免费视频| 老司机亚洲免费影院| 欧美在线一区亚洲| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品成人在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久精品成人免费网站| av免费在线观看网站| 中国美女看黄片| 黄色成人免费大全| 久久久久国内视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久久国产成人免费| 嫩草影视91久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产成人系列免费观看| 人妻久久中文字幕网| 亚洲熟妇熟女久久| 精品福利观看| 久久这里只有精品19| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲成人久久性| 午夜久久久在线观看| videosex国产| 午夜两性在线视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩av久久| 免费在线观看亚洲国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产看品久久| 一级毛片高清免费大全| 99riav亚洲国产免费| 亚洲国产精品999在线| 99精品在免费线老司机午夜| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 最新美女视频免费是黄的| 日本a在线网址| 好男人电影高清在线观看| 搡老乐熟女国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产高清视频在线播放一区| www.精华液| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美日韩黄片免| 亚洲国产中文字幕在线视频| 天天添夜夜摸| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精品久久久久久成人av| 淫秽高清视频在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 很黄的视频免费| 99国产精品免费福利视频| 97人妻天天添夜夜摸| 操美女的视频在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| www日本在线高清视频|