白細(xì)胞介素-8基因-781 C/T多態(tài)性與肝癌及鼻咽癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性

王俊利 韋葉生 唐毓金 韋貴將 胡仁統(tǒng) 覃海媚 陳啟威

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，廣東 廣州 510630)

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白細(xì)胞介素-8基因-781 C/T多態(tài)性與肝癌及鼻咽癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性

王俊利 韋葉生 唐毓金1韋貴將1胡仁統(tǒng)1覃海媚1陳啟威1

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，廣東 廣州 510630)

目的 探討腫瘤細(xì)胞侵襲相關(guān)因子白細(xì)胞介素(IL)-8遺傳多態(tài)性和廣西壯族人群肝癌與鼻咽癌易感性的關(guān)系。方法 收集廣西壯族肝癌患者260例與鼻咽癌患者251例，同時(shí)選取廣西壯族健康人群270例為對(duì)照。利用單堿基延伸PCR技術(shù)和DNA測序法，檢測廣西壯族肝癌患者、鼻咽癌患者和健康對(duì)照者的IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性，再用χ2檢驗(yàn)比較基因型和等位基因型分布頻率在病例組和對(duì)照組之間的差異。結(jié)果 IL-8基因位點(diǎn)-781 C/T在肝癌組和對(duì)照組之間的基因型和等位基因頻率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096；T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。同時(shí)，IL-8基因位點(diǎn)-781 C/T在鼻咽癌組和對(duì)照組之間的基因型和等位基因頻率分布也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279；T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。結(jié)論 在廣西壯族人群中，IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)的遺傳多態(tài)性可能和肝癌與鼻咽癌的易感性無關(guān)。

單核苷酸多態(tài)性；白細(xì)胞介素-8；肝癌；鼻咽癌

遺傳因素可能在肝癌和鼻咽癌發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用〔1～3〕。白細(xì)胞介素(IL)-8是由B淋巴母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞應(yīng)答抗原刺激產(chǎn)生的腫瘤侵襲相關(guān)因子，在腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲和血管生成等過程中發(fā)揮重要作用。肝癌等腫瘤組織和患者血漿中都伴有IL-8水平高表達(dá)，且IL-8的高表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移程度與預(yù)后呈正相關(guān)〔4,5〕。IL-8基因多態(tài)性也與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并且逐漸成為研究的熱點(diǎn)。但是，在廣西壯族人群中IL-8基因和肝癌與鼻咽癌這兩種區(qū)內(nèi)高發(fā)腫瘤的關(guān)系卻鮮有研究。為了研究在廣西壯族人群中IL-8基因和肝癌與鼻咽癌的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象 肝癌組為2010年3月1日至2014年12月31日來我院就診的260例肝癌患者，男136例，女124例；年齡32～85〔平均(53±11)〕歲。同期我院收治的251例鼻咽癌患者為鼻咽癌組，男161例，女90例；年齡29～89〔平均(50±14)〕歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者病理診斷為肝癌或鼻咽癌；三代世居廣西的壯族人群；未曾接受過放療和化療。選取2012年1月1日至2012年12月31日我院無惡性腫瘤史、三代世居廣西的壯族人群270例健康體檢者，男176名，女94名；年齡29～90〔平均(52 ± 15)〕歲。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)同意，所有患者知情同意。

1.2 提取基因組DNA 抽取2 ml靜脈血，用碘化鈉法提取細(xì)胞基因組DNA。

1.3 聚合酶鏈反應(yīng) 設(shè)計(jì)IL-8基因位點(diǎn)-781 C/T的PCR上游、下游引物及延伸引物，由上海英俊有限公司合成。-781 C/T的上游引物：5'-CTCTAACTCTTTATATAGGAATT-3'，下游引物：5'-GATTGATTTTATCAACAGGCA-3'。PCR反應(yīng)體系包括2.0 μl 0.3 mmol/L dNTPs，2.0 μl 10×PCR反應(yīng)緩沖液，1.0 μl上游引物，1.0 μl下游引物；1.0 U HotStar Taq DNA聚合酶及1.0 μl基因組DNA，用雙蒸水補(bǔ)到20 μl。PCR的反應(yīng)條件為94℃ 15 min，94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 20 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。PCR 產(chǎn)物于4℃保存。

1.4 單堿基延伸反應(yīng)和電泳測序 使用蝦堿酶及外切酶Ⅰ純化PCR產(chǎn)物，用SNaPshot Multiplex kit(ABI公司)行延伸反應(yīng)。用蝦堿酶純化延伸產(chǎn)物，之后在ABI 3130XL上樣，用Gene Mapper 4.0分析電泳結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0及SHEsis軟件。計(jì)量資料比較行t檢驗(yàn)，群體代表性用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。基因型、等位基因型分布頻率與鼻咽癌發(fā)生的關(guān)系用二分類非條件Logistic回歸進(jìn)行分析，用OR及95%置信區(qū)間(CI)代表相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度。

2 結(jié) 果

2.1 IL-8基因多態(tài)性檢測結(jié)果 IL-8基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為203 bp。ABI 3130XL的單核苷酸多態(tài)性(SNP)分型結(jié)果表明，-781 C/T位點(diǎn)的基因型包括CC、CT和TT三種。

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測 經(jīng)過χ2檢驗(yàn)，IL-8基因位點(diǎn)-781 C/T的基因型和等位基因型頻率在對(duì)照組和肝癌組與鼻咽癌組分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，所選取的樣本具有代表性和可比性。

2.3 IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性和肝癌易感性的關(guān)系 IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)3種基因型CC、CT、TT在肝癌組中分布頻率為39.6%(103例)、51.9%(135例)、8.5%(22例)，在對(duì)照組分別為40.0%(108例)、45.9%(124例)、14.1%(38例)；等位基因C在肝癌組和對(duì)照組中頻率分別為65.6%(341例)、63.0%(340例)，等位基因T在肝癌組和對(duì)照組中頻率分別為34.4%(179例)、37.0%(200例)。若以IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)CC基因型的OR值為1，那么CT和TT基因型均不增加肝癌易感性(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加肝癌易感性(T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。

2.4 IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性和鼻咽癌易感性的關(guān)系 IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)3種基因型CC、CT、TT在鼻咽癌組中分布頻率為33.9%(85例)、50.2%(126例)、15.9%(40例)，等位基因C和T在鼻咽癌組中頻率分別為59.0%(296例)、41.0%(206例)。若以IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)CC基因型的OR=1，CT及TT基因型均不增加鼻咽癌易感性(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加鼻咽癌易感性(T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。

3 討 論

IL-8是由B淋巴母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞應(yīng)答抗原刺激所產(chǎn)生的一種腫瘤細(xì)胞侵襲相關(guān)因子，在腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲和血管生成等過程中發(fā)揮重要作用，因而在腫瘤研究中具有重要的價(jià)值〔6，7〕。多年研究成果表明，肝癌等腫瘤組織和患者血漿中都伴有IL-8水平高表達(dá)，且IL-8的高表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移程度與預(yù)后呈正相關(guān)〔4，5〕。

IL-8基因位于人染色體4q13-q21區(qū)域，由1個(gè)啟動(dòng)子、3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子構(gòu)成。IL-8基因內(nèi)含子區(qū)-781 C/T發(fā)生突變，可引發(fā)基因剪接信號(hào)的改變，從而影響IL-8 的功能，進(jìn)一步影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性可能會(huì)與腫瘤的易感性有一定關(guān)系。目前有一些文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨肉瘤和肝癌等腫瘤的易感性的關(guān)系〔8～10〕。但是，IL-8基因多態(tài)性與廣西壯族人群肝癌和鼻咽癌易感性的關(guān)系尚未定論。來自中國西安的Liu等〔8〕應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性方法分別檢測300例中國陜西人群神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者和300例健康對(duì)照者的IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性，結(jié)果提示IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的易感性無關(guān)。而在一個(gè)關(guān)于IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性與骨肉瘤易感性的研究中，來自天津的Chen等的研究團(tuán)隊(duì)的研究結(jié)果也提示了IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性與骨肉瘤易感性無關(guān)〔7〕。本項(xiàng)研究結(jié)果結(jié)合這兩項(xiàng)研究結(jié)果，可以謹(jǐn)慎推測IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性可能與中國人群罹患肝癌、鼻咽癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和骨肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。但是和本次研究結(jié)果有差異的是，來自中國臺(tái)灣的Chien等〔10〕通過檢測131例肝癌患者和340例對(duì)照者IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)多態(tài)性發(fā)現(xiàn)，IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)TT基因型相比于CC基因型顯著降低人群罹患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)性。分析上述結(jié)果不一致的原因可能為：(1)不同地區(qū)人群遺傳異質(zhì)性，(2)研究樣本數(shù)量不足導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)偏差。

綜上所述，肝癌和鼻咽癌是由多種多基因多位點(diǎn)突變、環(huán)境刺激以及它們之間的相互作用引起的一種復(fù)雜疾病，其中遺傳因素在它們發(fā)病過程中可能起著重要作用。在廣西壯族人群中，IL-8基因-781 C/T位點(diǎn)遺傳多態(tài)性和肝癌與鼻咽癌的易感性無關(guān)。鑒于本研究收集的樣本數(shù)目較少，也僅選擇了IL-8 基因的1個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，所以只能視其為一個(gè)初步研究，今后將進(jìn)一步擴(kuò)大檢測樣本數(shù)量和檢測位點(diǎn)，同時(shí)納入不同地域和不同種族的人群進(jìn)行深入研究。

1 Khalifa RH,Bahgat DM,Darwish HA,etal.Significant association between FasL gene-844T/C polymorphism and risk to hepatocellular carcinoma in Egyptian patients〔J〕.Immunol Lett,2016;172(1):84-9.

2 毛盈穎,丁 燁,陳 坤.長鏈非編碼RNA遺傳多態(tài)性與惡性腫瘤易感性的關(guān)系〔J〕.中華腫瘤雜志,2013;35(11):801-3.

3 魯明騫,孔慶志,許新華,等.MKK4基因啟動(dòng)子區(qū)-1304T/G多態(tài)性與散發(fā)性鼻咽癌易感性的關(guān)系〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2016;30(4):287-90.

4 葉英楠,龍欣欣,于文文,等.肝細(xì)胞肝癌組織表達(dá)IL-8 對(duì)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的影響〔J〕.實(shí)用腫瘤雜志,2014;29(6):522-6.

5 An H,Zhu Y,Xie H,etal.Increased expression of interleukin-8 is an independent indicator of poor prognosis in clear-cell renal cell carcinoma〔J〕.Tumour Biol,2016;37(4):4523-9.

6 龍欣欣，葉英楠，李 慧,等.NTS/IL-8信號(hào)通路與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展〔J〕.山東醫(yī)藥,2014;54(30):93-4.

7 Zhu B,Lin N,Zhang M,etal.Activated hepatic stellate cells promote angiogenesis via interleukin-8 in hepatocellular carcinoma〔J〕.Journal of translational medicine,2015;13:365-9.

8 Liu H,Mao P,Xie C,etal.Association between interleukin 8-251 T/A and +781 C/T polymorphisms and glioma risk〔J〕.Diagn pathol,2015;10(2):138-42.

9 Chen Y,Yang Y,Liu S,etal.Association between interleukin 8-251 A/T and +781 C/T polymorphisms and osteosarcoma risk in Chinese population:a case-control study〔J〕.Tumour biology,2016;37(5):6191-6.

10 Chien MH,Yeh CB,Li YC,etal.Relationship of interleukin-8 gene polymorphisms with hepatocellular carcinoma susceptibility and pathological development〔J〕.J Surgic Oncol,2011;104(7):798-803.

〔2016-04-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

國家自然科學(xué)基金(81560461,81260315)；廣西自然科學(xué)基金(2012GXNSFAA053169)

韋葉生(1969-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主任技師，主要從事鼻咽癌的基礎(chǔ)與臨床研究。

王俊利(1979-)，男，在讀博士，副主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤的臨床分子診斷研究。

R73

A

1005-9202(2016)20-5045-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.049

1 右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院