HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定的價值分析

金 冠 孫晉生

（吉林省神經(jīng)精神病醫(yī)院，吉林 四平 136000）

HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定的價值分析

金 冠 孫晉生

（吉林省神經(jīng)精神病醫(yī)院，吉林 四平 136000）

目的 探討HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定的價值。方法 本次醫(yī)學(xué)研究對堿化后的血清樣品乙醚萃取物進(jìn)行了有機(jī)相吹干檢測，按照1.5∶2∶45∶90∶55的冰乙酸∶正丁胺∶水∶乙腈：甲醇比例流動相，設(shè)定檢測波長為254 mm，VPODS柱。結(jié)果 人血清中阿米替林（AM）機(jī)器產(chǎn)物N-去甲阿米替林（N-AM）線性范圍為25～400 μg/L，日漸RSD為1.96%～9.59%以及4.59%～7.70%，日內(nèi)RSD分別為1.76%～9.46%以及5.52%～7.70%，回收率分別為109.9%～121.8%以及92.3%～125.7%。結(jié)論 HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定，重現(xiàn)性好、可操作性強(qiáng)，因而更加適用于人體藥物動力學(xué)。

HPLC；阿米替林；去甲阿米替林；濃度測定

阿米替林（AM）屬于一種三環(huán)類抗抑郁藥，能夠經(jīng)去甲腎上腺素、5-羥色胺作用，阻斷神經(jīng)末梢的再攝取過程，進(jìn)而提高突觸間隙的遞質(zhì)濃度，達(dá)到抗抑郁治療效果。AM作為一種三環(huán)類抗抑郁藥，其鎮(zhèn)靜催眠效果也較為理想，口服吸收率在90%以上。本次醫(yī)學(xué)研究就對HPLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定的價值進(jìn)行了分析，報道如下。

1　試藥與儀器

1.1試藥：本次醫(yī)學(xué)研究所用試藥包括：正丁胺、冰乙酸、醋酸鈉、乙腈、甲醇、乙醚為分析純，中國藥品生物制品檢定所提供的decipone安定（diazepam，100570-200401），N-去甲阿米替林（Acetexa，Allegron，Motipress，Motival，Nortrilen），以及阿米替林（Amitriptyline），Inc，09214390［1］。

1.2儀器：本次醫(yī)學(xué)研究所用儀器包括：天津市騰達(dá)過濾器件廠生產(chǎn)的隔膜真空泵，白洋離心機(jī)廠生產(chǎn)的B600 B型醫(yī)用低速離心機(jī)，北京市康林科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的氮吹儀江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器廠生產(chǎn)的XW-80A型旋渦混合器，以及日本島津LC-VP高效液相色譜儀［2］。

1.3方法

1.3.1配制溶液：取N-去甲阿米替林1 mg及阿米替林1 mg，溶于10 mL的甲醇中，獲得N-去甲阿米替林和阿米替林的0.1 mg/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品。內(nèi)標(biāo)應(yīng)用液：用甲醇將Risperidone儲備液稀釋為10.0 mg/L。

1.3.2色譜條件：柱溫：40 ℃，檢測波長：254 nm，流速：0.7 mL/min，1.5∶2∶45∶90∶55的冰乙酸∶正丁胺∶水∶乙腈∶甲醇比例流動相，色譜柱：C18ODS柱。

1.3.3標(biāo)本提取：L磨口帶塞離心管中取0.5 mL血清，加入4 mL乙醚、0.5 mL氫氧化鈉溶液、50 μL安定內(nèi)標(biāo)液，轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心5 min，混合3 min，置于40 ℃水浴中用氮氣吹干，用100 μL流動相溶解殘渣，取30 μL進(jìn)樣分析。

2　結(jié) 果

2.1阿米替林色譜圖：分別提取加藥血清和空白血清后，實施色譜分離處理。內(nèi)標(biāo)安定、阿米替林以及N-去甲阿米替林的保留時間分別為9.8、7.3、5.1 min，因而三種藥物均滿足基線分離標(biāo)準(zhǔn)［3］。

2.2最低檢測濃度和標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別取5份1 mL的空白血清，加入50 μL不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)液中，控制血清阿米替林和N-去甲阿米替林濃度在25～400 μg/L，適量內(nèi)標(biāo)加入后，根據(jù)“標(biāo)本提取”的規(guī)定步驟進(jìn)行色譜分離處理，繪制藥物濃度（Y）與內(nèi)標(biāo)峰面積和藥物峰面積（X）的線性回歸方程，以此為標(biāo)準(zhǔn)曲線，即：阿米替林r=0.997，Y=439.68X+9.39，N-去甲阿米替林r=0.994，Y=531.08X+11.97［4］，Cerum 25.00，A（AM/DIA）0.082，A（NAM/DIA）0.063，A（DIA）190163.1，A（AM）15655.3，A（NAM）12098-06；Cerum 50.00，A（AM/DIA）0.239，A（NAM/DIA）0.201，A（DIA）141082.8，A（AM）33750.1，A（NAM）28340.7；Cerum100.00，A（AM/DIA）0.389，A（NAM/DIA）0.281，A（DIA）126250.2，A（AM）49086.3，A（NAM）35497.1；Cerum200.00，A（AM/DIA）0.524，A（NAM/DIA）0.408，A（DIA）182207.1，A（AM）95510.4，A（NAM）74368.8；Cerum400.00，A（AM/DIA）1.129，A（NAM/DIA）0.936，A（DIA）190624.8，A（AM）215231.3，A（NAM）178479.4。

2.3精密度：不同天內(nèi)以及同一天內(nèi)分別對高、中、低各種濃度的加藥血清進(jìn)行測試，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算其濃度，最終獲得日間和日內(nèi)的RSD。日間精密度（RSD%）：AM-25 8.73，AM-200 5.34，AM-400 2.15，AM-25 3.58，AM-200 4.09，AM-400 5.54；日內(nèi)精密度（RSD%）：AM-25 6.61，AM-200 3.73，AM-400 2.56，AM-25 5.94，AM-200 5.10，AM-400 7.12。

2.4回收率：方法回收率：取1 mL空白血清，分別加入50 μL的NAM和AM對照品，根據(jù)樣品操作要求進(jìn)行測定，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對其進(jìn)行計算，獲得已知濃度與實測濃度的比值，也就是NAM和AM的方法回收率。Cerum 400 μg/L，NO1，C363.4NAM/ng，C365.0AM/ng，NO2，C403.3 NAM/ng，C376.7AM/ng，NO3，C 395.3NAM/ng，C390.8AM/ng，NO4，C410.4 NAM/ng，C378.9AM/ng，NO5，C 380.7NAM/ng，C407.3AM/ng。

萃取回收率：在空白血清中加入適量濃度不同的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，獲得高、中、低三種濃度的液體，根據(jù)標(biāo)本提取的程序，對色譜處理后的峰面積進(jìn)行測定，并直接測得其與標(biāo)準(zhǔn)液之間的峰面積比值。400 μg/L，R72.0NAM%，R80.2AM%，200 μg/L，R73.1NAM%，R78.9AM%，25 μg/L，R71.3NAM%，R73.7AM%。

3　討 論

高效液相色譜法是一種較為可靠且有效的體內(nèi)藥物及其代謝物檢測技術(shù)，能夠為臨床給藥方案制定、毒理、藥物代謝動力學(xué)監(jiān)測等提供可靠的臨床依據(jù)［5］。N-去甲阿米替林在254 nm處有次吸收，234 nm處有強(qiáng)吸收，但需要對254 nm處阿米替林的吸收進(jìn)行充分考慮，進(jìn)而避開甲醇的紫外吸收范圍，確定254 nm為紫外光譜掃描［6］?？偠灾琀PLC用于人血清中阿米替林及去甲阿米替林濃度測定，重現(xiàn)性好、可操作性強(qiáng)，因而更加適用于人體藥物動力學(xué)。

［1］ 曾麗娟，黃葉盛，龔小兵.多潘立酮聯(lián)合阿米替林治療功能性消化不良的meta分析［J］.內(nèi)科，2014，9（6）：653-654.

［2］ 許海龍，許建利，耿新龍.阿米替林聯(lián)合肝素鈉治療間質(zhì)性膀胱炎的臨床研究［J］.基層醫(yī)學(xué)論壇，2015，19（5）：581-582.

［3］ 羅琳，袁濤，宋莉.文拉法辛與阿米替林治療抑郁癥的成本-效果分析［J］.四川醫(yī)學(xué)，2009，30（2）：199-200.

［4］ 劉慶軍，姚繼春.帕羅西汀與阿米替林治療抑郁癥的療效對比分析［J］.中國實用醫(yī)藥，2010，5（7）：132-133.

［5］ 陳亮，謝亮，盧葭，等.西酞普蘭與阿米替林治療卒中后抑郁障礙的Meta分析［J］.中國藥房，2012，23（24）：2221-2222.

［6］ 翟麗麗.應(yīng)用Meta分析比較阿米替林與氟西汀治療抑郁癥的療效研究［J］.中國醫(yī)藥前沿，2012，7（16）：44-45.

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1671-8194（2016）28-0029-02