骨髓增生異常綜合征患者骨髓血管新生及與臨床特征的關(guān)系

曾俊權(quán)

(井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，江西　吉安　343000)

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骨髓增生異常綜合征患者骨髓血管新生及與臨床特征的關(guān)系

曾俊權(quán)

(井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院血液內(nèi)科，江西吉安343000)

〔摘要〕目的探討骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓血管新生及與臨床特征的相關(guān)性。方法收集2008年5月至2014年5月該院收治的78例MDS患者以及39例急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)患者，并于同期隨機(jī)抽取80例健康體檢者作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)法分別對(duì)三組的骨髓活檢標(biāo)本進(jìn)行染色并計(jì)數(shù)微血管數(shù)，同時(shí)分析其與臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果MDS組、ANLL組以及對(duì)照組的骨髓微血管計(jì)數(shù)經(jīng)秩和檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MDS組骨髓微血管計(jì)數(shù)高于對(duì)照組而低于ANLL組。MDS低危組骨髓微血管計(jì)數(shù)低于高危組(P<0.05)。MDS患者骨髓微血管計(jì)數(shù)與性別、年齡、外周血中的白細(xì)胞、血小板以及血紅蛋白含量無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，與骨髓涂片中的原始細(xì)胞百分比有正相關(guān)性(r=0.386，P<0.05)。結(jié)論MDS患者骨髓中出現(xiàn)不同程度的血管新生，且骨髓原始細(xì)胞百分比越高，血管新生數(shù)量越多，對(duì)臨床治療MDS具有一定的指導(dǎo)意義。

〔關(guān)鍵詞〕骨髓增生異常綜合征；血管新生；微血管數(shù)

第一作者：曾俊權(quán)(1981-)，男，主治醫(yī)師，講師，主要從事惡性血液系統(tǒng)疾病發(fā)表機(jī)制的基礎(chǔ)及臨床方面的研究。

血管新生可能參與了腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程，如在骨髓瘤、淋巴瘤以及急性白血病等患者的骨髓中存在不同程度的血管新生〔1〕。骨髓增生異常綜合征(MDS)起源于造血肝細(xì)胞，是一組造血系統(tǒng)異質(zhì)性克隆增殖性疾病，隨著疾病的演變可能發(fā)展為急性白血病，嚴(yán)重威脅患者的健康〔2〕。關(guān)于MDS的發(fā)病機(jī)制，目前還未有定論。本研究擬從血管新生是否存在于MDS患者骨髓中這一問(wèn)題出發(fā)，初步探討MDS的發(fā)生機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料收集2008年5月至2014年5月我院血液科收治的MDS患者和急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)患者的骨髓活檢標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合MDS診斷標(biāo)準(zhǔn)〔3〕；②不合并其他可能影響本研究結(jié)果的血液系統(tǒng)疾病，如淋巴細(xì)胞白血病等；③符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求；④患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書(shū)。其中MDS組78例，根據(jù)1997年WHO標(biāo)準(zhǔn)〔4〕分為低危組和高危組，其中低危組51例，男33例，女18例；中位年齡53歲(21～72歲)；難治性貧血45例，環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞增多性難治性貧血6例。高危組27例，男21例，女6例；中位年齡56歲(19～78歲)；27例全部為原始細(xì)胞增多性難治性貧血患者。ANLL組患者39例，男27例，女12例；中位年齡45歲(20～76歲)；M0 5例，M1 8例，M2a 7例，M2b 9例，M3b 6例，M5b 4例。同期隨機(jī)抽取80例健康體檢供髓者作為對(duì)照組，男52例，女28例；中位年齡47歲(19～68歲)。

1.2試劑來(lái)源兔抗人凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(vWF)的多克隆抗體(上海基因有限公司)，EnVision免疫組化試劑盒(上海記憶有限公司)，正常的山羊血清(北京中山生物技術(shù)公司)，多聚賴氨酸膠(Sigma公司)，3,3-二氨基聯(lián)苯胺(Aangon公司)。

1.3標(biāo)本制作及免疫組化染色在無(wú)菌條件下收集骨髓組織活檢標(biāo)本，Bouin固定、脫鈣，石蠟包埋，切成厚度為4 μm的切片，貼在多聚賴氨酸膠處理過(guò)的載玻片上，免疫組織化學(xué)法進(jìn)行染色，具體操作按照試劑盒上的說(shuō)明進(jìn)行。免疫組化染色陽(yáng)性的血管瘤切片作為陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液(PBS)液代替一抗染色的患者骨髓標(biāo)本作為陰性對(duì)照。

1.4微血管的判斷標(biāo)準(zhǔn)以微血管計(jì)數(shù)代表血管新生，微血管的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕：被vWF抗體標(biāo)記過(guò)染色為棕黃色的內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)，當(dāng)它和周?chē)⒀?、幼稚?xì)胞以及其他的骨髓連接組織成分分離清除，則計(jì)數(shù)為一根微血管。在光學(xué)顯微鏡低倍鏡(×100)下對(duì)骨髓全片進(jìn)行掃視后，在高倍鏡(×400)視野下對(duì)骨髓微血管數(shù)量進(jìn)行連續(xù)計(jì)數(shù)，并將其計(jì)算為平均值，以微血管數(shù)/×400視野表達(dá)。同時(shí)兩位相對(duì)較專業(yè)的人員在雙盲情況下對(duì)骨髓微血管數(shù)量分別計(jì)數(shù)，最后取兩人的計(jì)數(shù)平均值作為最終骨髓切片的微血管數(shù)量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件多組獨(dú)立樣本的比較采用非參數(shù)的Mann-Whitney比較，兩兩比較采用Krusal-Wallis法，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)。

2結(jié)果

2.1MDS患者的骨髓微血管形態(tài)通過(guò)vWF標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下呈棕褐色(光鏡下，×400)：(1)MDS患者的骨髓標(biāo)本中可以發(fā)現(xiàn)不同大小腔隙或者無(wú)腔隙的微血管；(2)ANLL患者的骨髓標(biāo)本中有較多的微血管，腔隙較小甚至無(wú)腔隙；(3)對(duì)照組的骨髓標(biāo)本中幾乎很少出現(xiàn)微血管。

2.2各組骨髓微血管計(jì)數(shù)的比較MDS組、ANLL組以及對(duì)照組的骨髓微血管計(jì)數(shù)經(jīng)秩和檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MDS低危組骨髓微血管計(jì)數(shù)低于高危組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組骨髓微血管計(jì)數(shù)(只/×400視野)

與ANLL組、對(duì)照組比較：1)P<0.05，與低危組比較：2)P<0.05

2.3MDS患者骨髓微血管計(jì)數(shù)與臨床特征的相關(guān)性分析MDS患者骨髓微血管計(jì)數(shù)與性別、年齡、外周血中的白細(xì)胞、血小板以及血紅蛋白含量無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，與骨髓涂片中的原始細(xì)胞百分比呈正相關(guān)(r=0.386，P<0.05)。

3討論

MDS是臨床血液科常見(jiàn)的血液系統(tǒng)疾病，是起源于造血干細(xì)胞的獲得性克隆性疾病，主要特征為造血干細(xì)胞出現(xiàn)異?？寺?，造血功能發(fā)生紊亂而出現(xiàn)無(wú)效造血，同時(shí)伴有不同程度的外周血造血細(xì)胞減少以及血細(xì)胞分化障礙等〔6〕。因此，一旦發(fā)生MDS，將對(duì)患者的健康和生命質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。目前臨床常采用誘導(dǎo)分化或者造血干細(xì)胞移植等治療MDS，但是結(jié)果卻不甚理想，仍然有部分MDS患者由于治療無(wú)效而惡化為急性白血病〔7〕。新生血管是指從已經(jīng)存在的血管中再芽生出新的毛細(xì)血管，Kizaki〔8〕研究證實(shí)成人急性髓細(xì)胞白血病患者骨髓微血管密度高于正常人，并且當(dāng)患者獲得完全緩解后骨髓微血管增生程度與對(duì)照組近似，提示白血病的發(fā)病機(jī)制可能與血管新生存在某種聯(lián)系，從而使新生血管給進(jìn)入血液循環(huán)中的腫瘤提供營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。智亞芹等〔9〕采用Ⅷ因子相關(guān)抗原對(duì)MDS患者的骨髓活檢標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)MDS患者的微血管密度高于正常對(duì)照組。Savic等〔10〕也發(fā)現(xiàn)MDS患者的骨髓微血管密度高于正常對(duì)照組。那么可以試想，MDS患者的骨髓中是否確實(shí)存在血管新生的可能，它是否參與了MDS的病理發(fā)生過(guò)程，目前該問(wèn)題已經(jīng)引起了相關(guān)研究人員的極大關(guān)注。

本研究結(jié)果顯示，采用因子Ⅷ相關(guān)抗原標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞是檢測(cè)骨髓微血管最有效的方法之一〔11〕，并且MDS患者存在血管新生，隨著病情加重，血管新生的數(shù)量呈逐漸增加的趨勢(shì)，與有關(guān)研究〔12〕結(jié)果一致。Vaughn等〔13〕研究證實(shí)骨髓微血管密度和骨髓中的原始細(xì)胞的比例呈正相關(guān)，本研究也得到相似結(jié)果，提示血管新生在MDS發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。

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〔2014-11-15修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R551.3

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)22-6526-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.102