姚冬穎

(邢臺(tái)市人民醫(yī)院病理科，河北　邢臺(tái)　054031)

?

食管鱗癌組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達(dá)及臨床意義

姚冬穎

(邢臺(tái)市人民醫(yī)院病理科，河北邢臺(tái)054031)

〔摘要〕目的研究Bmi-1、P16和CyclinD1在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化EliVision兩步法檢測(cè)100例食管鱗癌和30例正常食管黏膜組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達(dá)。結(jié)果①在食管鱗癌和正常食管組織中，Bmi-1、P16、CyclinD1陽性率差異顯著(P<0.05)。②Bmi-1的表達(dá)程度與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，P16的表達(dá)程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，CyclinD1的表達(dá)程度與浸潤(rùn)深度密切相關(guān)(P<0.05)。③Bmi-1和CyclinD1的表達(dá)與P16的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論Bmi-1、P16和CyclinD1的異常表達(dá)參與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，聯(lián)合檢測(cè)Bmi-1、P16和CyclinD1的表達(dá)可作為食管鱗癌早期診斷和治療的參考指標(biāo)。

〔關(guān)鍵詞〕食管鱗癌；Bmi-1；P16；CyclinD1；免疫組化

食管癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)居惡性腫瘤的第6位〔1〕。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多階段長(zhǎng)期逐步演進(jìn)的過程，細(xì)胞周期調(diào)控與之密切相關(guān)。G1/S調(diào)控點(diǎn)是細(xì)胞周期中最為重要的調(diào)控點(diǎn)，影響決定細(xì)胞周期的時(shí)間〔2〕。Bmi-1是一種原癌基因，主要通過P16-CyclinD1/CDK4/6-Rb細(xì)胞周期通路來調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和衰老。食管癌最常見的組織類型是鱗狀細(xì)胞癌，本研究通過檢測(cè)Bmi-1、P16和CyclinD1在食管鱗癌中的表達(dá)，探討食管癌可能的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料選取2012年3月至2013年6月期間邢臺(tái)市人民醫(yī)院食管癌手術(shù)切除標(biāo)本100例，術(shù)后病理證實(shí)均為鱗狀細(xì)胞癌。男66例，女34例；年齡29～82歲，中位年齡64歲，60歲以下45例，60歲及以上55例；高分化23例，中分化39例，低分化38例；浸潤(rùn)深度未達(dá)纖維膜40例，達(dá)到纖維膜60例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例；按2010年美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)(AJCC)制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ+Ⅱ期43例，Ⅲ+Ⅳ期57例。另取正常食管黏膜30例作為對(duì)照(距腫瘤5 cm以上未受累殘端)。所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療及中醫(yī)中藥治療。

1.2試劑兔抗人Bmi-1多克隆抗體(稀釋度1∶100)購自美國(guó)Abcam公司，鼠抗人P16單克隆抗體(即用型)、兔抗人CyclinD1單克隆抗體(即用型)、DAB顯色劑及免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3方法兩組標(biāo)本均常規(guī)取材，10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋。每例選取有代表性的蠟塊做4 μm厚連續(xù)切片，備做HE及免疫組化染色。采用免疫組化Elivision兩步法，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，高溫抗原修復(fù)，DAB顯色，PBS(磷酸鹽緩沖液)代替一抗作陰性對(duì)照，以試劑公司提供的陽性切片作陽性對(duì)照，每例都有HE切片作為對(duì)照觀察。

1.4結(jié)果判斷采用半定量標(biāo)準(zhǔn)，每張切片高倍鏡(10×40)下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度參考文獻(xiàn)〔3〕進(jìn)行計(jì)分。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，兩變量之間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1食管鱗癌中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系表1可見，Bmi-1的表達(dá)水平與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在相關(guān)性(P<0.05)；P16的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在相關(guān)性(P<0.05)；CyclinD1的表達(dá)水平與

表1　食管鱗癌中Bmi-1、P16、和CyclinD1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

第一作者：姚冬穎(1980-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事腫瘤病理學(xué)研究。

浸潤(rùn)深度存在相關(guān)性(P<0.05)。

2.2食管鱗癌和正常食管黏膜組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達(dá)Bmi-1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，少量表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，在食管鱗癌中陽性率為52.0%，明顯高于正常對(duì)照組26.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)。P16蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，在食管鱗癌中陽性率為49.0%，明顯低于正常對(duì)照組83.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P=0.001)。CyclinD1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，在食管鱗癌中陽性率為68.0%，明顯高于正常對(duì)照組23.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，見圖1。

2.3食管鱗癌中Bmi-1、P16和CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性Bmi-1和P16蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.219，P=0.028)。P16和CyclinD1蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.271，P=0.006)。

Bmi-1

P16

CyclinD1

3討論

Bmi-1基因異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，并且促進(jìn)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。Bmi-1作為一種原癌基因，主要是通過抑制抑癌基因INK4a/ARF兩個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達(dá)，通過P16INK4a-CyclinD1-Rb和P14ARF-Mdm2-P53兩條通路來調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和衰老〔4〕。本研究結(jié)果顯示，Bmi-1在食管鱗癌組織中的陽性率顯著高于對(duì)照組正常黏膜，其表達(dá)水平隨分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)及臨床分期的進(jìn)展明顯升高，這與He等〔5〕研究結(jié)果一致，提示CyclinD1的基因擴(kuò)增參與了食管鱗癌的發(fā)生，還可能促進(jìn)食管鱗癌的惡性轉(zhuǎn)化和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

P16是抑癌基因INK4a/ARF編碼兩個(gè)蛋白之一，是細(xì)胞周期負(fù)向調(diào)控因子，有抑制細(xì)胞惡性增殖轉(zhuǎn)化的作用。P16通過與CyclinD1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合細(xì)胞周期素依賴激酶CDK4，抑制CDK4的激酶活性，使低磷酸化或非磷酸化的Rb積聚，阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，抑制細(xì)胞無限增殖惡性轉(zhuǎn)化〔6〕。當(dāng)P16因基因缺失、突變、甲基化等原因引起表達(dá)產(chǎn)物缺失或結(jié)構(gòu)異常，就失去對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)控作用，可引起細(xì)胞增殖失控，發(fā)生癌變〔7〕。已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，P16在食管癌組織中低表達(dá)，且與腫瘤的臨床分期有關(guān)〔8〕。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，P16在食管鱗癌中的表達(dá)低于正常黏膜，且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期晚的患者表達(dá)率更低。推測(cè)P16蛋白的低表達(dá)或表達(dá)缺失導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控失常，促進(jìn)了食管鱗癌的發(fā)生，并且使腫瘤具有更強(qiáng)的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力。

CyclinD1是細(xì)胞周期素家族中的重要成員，異常表達(dá)可致細(xì)胞失控性生長(zhǎng)，最終引發(fā)腫瘤形成。在正常細(xì)胞周期中，CyclinD1與CDK4形成復(fù)合物CyclinD1-CDK4，使Rb蛋白磷酸化，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，啟動(dòng)DNA合成，促使細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期，完成細(xì)胞增殖。CyclinD1過度表達(dá)使細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換時(shí)間縮短，促進(jìn)細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換速度加快，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖，癌變?yōu)閻盒阅[瘤〔9〕。以往研究表明，CyclinD1的高表達(dá)參與食管鱗癌的發(fā)生過程，是早期事件，其在浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的生物學(xué)機(jī)制尚待進(jìn)一步探討〔10〕。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CyclinD1蛋白在食管鱗癌中的陽性率明顯高于正常組織，且浸潤(rùn)深度達(dá)纖維膜者明顯高于未達(dá)纖維膜者，分析CyclinD1高表達(dá)可能不僅促進(jìn)細(xì)胞增殖，還會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲力。

本研究提示，Bmi-1的高表達(dá)抑制了P16的表達(dá)，進(jìn)而促使CyclinD1對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控失常，細(xì)胞惡性增殖形成腫瘤。所以，Bmi-1、CyclinD1的高表達(dá)及P16的低表達(dá)與食管鱗癌的發(fā)生和惡性生物學(xué)行為有關(guān)。

4參考文獻(xiàn)

1左靜,王大虎,張祥宏.PinX1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2012;32(2):259-60.

2Lee MH,Choi BY,Cho YY,etal.Tumor suppressor p16INK4a inhibits cancer cell growth by downregulating eEF1A2 through a direct interaction〔J〕.J Cell Sci,2013;126(8):1744-52.

3許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國(guó)癌癥雜志,1996;5(4):229-31.

4Lukacs RU,Memarzadeh S,Wu H,etal.Bmi-1 is a crucial regulator of prostate stem cell self-renewal and malignant transformation〔J〕.Cell Stem Cell,2010;7(6):682-93.

5He XT,Cao XF,Ji L,etal.Associatin between Bmi-1 and clinicopathological status of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.World J Gastroenterol,2009;15(19):2389-94.

6Wang Y,Sharpless N,Chang S.p16INK4a protects against dysfunctional telomere-induced ATR-dependent DNA damage responses〔J〕.J Clin Invest,2013;123(10):4489-501.

7Prueitt RL,Goodman JE,Valberg PA.Radionuclides in cigarettes may lead to carcinigenesisi via p16INK4a inactivation〔J〕.J Environ Radioact,2009;100(2):157-61.

8祝凱,牛亮,魏朝霞,等.食管癌組織中CtBP1、p16蛋白的表達(dá)變化〔J〕.山東醫(yī)藥,2011;51(38):18-9.

9Liang S,Mu K,Wang Y,etal.CyclinD1,a prominent prognostic marker for endometrial diseases〔J〕.Diagn Pathol,2013;8:138.

10張硯,陳衛(wèi)剛,鄭勇.CyclinD1及相關(guān)基因在食管癌中的研究進(jìn)展〔J〕.中華全科醫(yī)學(xué),2011;9(3):443-4.

〔2014-07-30修回〕

(編輯安冉冉/曹夢(mèng)園)

〔中圖分類號(hào)〕R735.1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)22-6352-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.015