中國林蛙的藥理研究進展△

鮑悅，姜威，劉冬，孫佳明，張輝

(長春中醫(yī)藥大學 中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心，吉林 長春 130117)

中國林蛙的藥理研究進展△

鮑悅，姜威，劉冬，孫佳明，張輝*

(長春中醫(yī)藥大學 中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心，吉林 長春 130117)

中國林蛙是集藥用、滋補保健、食用為一體的蛙種，其含有豐富的活性成分，已成為食品、醫(yī)藥、日化等輕工業(yè)的重要原料。本文對近年來國內期刊有關中國林蛙研究的文獻進行檢索和歸納分析，對哈蟆油、林蛙卵、林蛙頭、林蛙皮的藥理研究進行綜述。中國林蛙具有抗氧化、改善學習記憶、抗疲勞、止咳平喘、降血脂、抗腫瘤、抗驚厥以及基因調控等藥理作用，并有學者以甘氨酸乙酯鹽酸鹽為原料，人工合成海因和5,5二甲基海因。中國林蛙藥理作用具有多樣性，該綜述對其日后的開發(fā)和利用有著重要意義，并為中國林蛙的進一步的研究提供參考。

中國林蛙；藥理研究

中國林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)是我國著名的集藥用、食用、保健于一身的珍貴蛙種，棲息在東北的山林沼澤中，沐春風而生，伴冬雪而眠，生性耐寒，故又稱雪蛙。中國林蛙含有豐富的活性成分，已成為食品、醫(yī)藥、日化等輕工業(yè)重要的原料，特別是哈蟆油。哈蟆油是中國林蛙雌蛙的輸卵管經采制干燥而得。哈蟆油始載于《本草綱目》，其中將其列為上品。具有補腎益精、養(yǎng)陰潤肺的功能，更因其稀少而珍貴，富有“滋補軟黃金”的美譽。在我國清代哈蟆油就成為皇宮貴族必備的滋補品。現代醫(yī)學表明，哈蟆油臨床上常用于病后體弱、神疲乏力、心悸失眠、盜汗、癆嗽咳血的治療。

1 哈蟆油的藥理研究

1.1 抗氧化

姚暉[1]通過對其課題組前期研究和近20年哈蟆油相關文獻的分析發(fā)現，哈蟆油延緩衰老的作用機制主要與抗活性氧自由基(ROS)作用相關。張梅[2]選用雄性小鼠建立過氧化損傷模型，灌胃給藥30 d后發(fā)現，哈蟆油可以顯著降低小鼠血中丙二醛的含量，增加肝臟中的過氧化脂質、氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Ps)的含量。藍晶晶[3]探討出最佳酶解工藝，從哈蟆油中酶解提取抗氧化肽，測得該抗氧化肽清除羥自由基、超氧陰離子、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的IC50分別為27.35、19.17、11.68 mg·mL-1，說明哈蟆油有顯著的抗自由基氧化活性。張馨月[4]利用流式細胞儀測定哈蟆油中水溶性蛋白對過氧化氫(H2O2)氧化損傷Hela細胞的保護作用，研究發(fā)現，該保護作用與哈蟆油中水溶性蛋白抗氧化肽濃度呈正相關。

1.2 改善學習記憶力

高桂華[5]通過建立衰老模型對哈蟆油進行藥理作用檢測，發(fā)現哈蟆油及提取物均能提高衰老模型小鼠學習記憶能力及海馬Na+-K+-ATP酶活性，減少海馬神經元的損害和變性。馬丹丹[6]應用同樣的建模方法，發(fā)現年老組大鼠海馬錐體細胞具有排列疏松紊亂、層次欠清晰、細胞脫失明顯等特點。給予年老組不同劑量哈蟆油，大鼠海馬神經元脫失現象較年老組有所改善，細胞層次較分明，形態(tài)較完整，尼氏體形態(tài)較正常，數量較年老組明顯增多。說明哈蟆油在一定程度上具有保護海馬神經元的作用，從而改善學習記憶力。

1.3 抗疲勞

現代醫(yī)學表明，疲勞可分為生理性疲勞和運動型疲勞。楊靖[7]發(fā)現，當哈蟆油粗多糖劑量為100 mg·kg-1時，小鼠負重游泳實驗效果最佳，時間延長為71.9%，說明蛤蟆油能顯著提高小鼠抗疲勞能力。張梅等[8]研究發(fā)現，給予實驗組小鼠哈蟆油30 d，可以延長負重游泳的時間，增加肝糖原含量，減少血乳酸曲線下面積。表明哈蟆油可以提高機體對運動負荷的適應能力，延緩疲勞的產生或加速疲勞的消除。張宏宇[9]以哈蟆油為原料提取、分離、純化，得到一種糖蛋白ROGP-II，檢測該糖蛋白各項藥理指標，得到與張梅相同的研究結果，并發(fā)現哈蟆油還可以抑制血清尿素氮升高。

1.4 止咳平喘

在徐麗琴[10]文章中介紹，早在1997年劉玉蘭等的研究就表明，哈蟆油及其甲醇、石油醚提取物均能明顯延長二氧化硫(SO2)及濃氨水致小鼠引咳的潛伏期，減少咳嗽次數，使小鼠酚紅排出量及大鼠痰液的排出量增加，說明哈蟆油具有明顯的鎮(zhèn)咳祛痰作用。王永生[11]研究發(fā)現，哈蟆油的乙醇提取部分也具有很好的鎮(zhèn)咳活性。

1.5 調節(jié)免疫

高燕玲[12]研究發(fā)現，哈蟆油能明顯增加小鼠血清中溶血素含量，并具有刺激B細胞分化增殖，轉變?yōu)闈{細胞的功能；提高假體內的抗體水平，增強體液免疫功能等藥理活性。車宇飛[13]通過淋巴細胞轉化實驗和遲發(fā)性過敏反應實驗檢測小鼠T細胞免疫功能，結果發(fā)現，哈蟆油多肽口服液對小鼠細胞免疫功能有一定的促進作用。對小鼠的碳廓清指數和巨噬細胞的吞噬指數以及吞噬率進行檢測，結果表明，蛤蟆油同時具有對小鼠的非特異性免疫有促進作用。許洪亮等[14]發(fā)現，經口給予小鼠不同劑量的0.5%哈蟆油勻漿30 d后，蛤蟆油對小鼠的自然殺傷細胞(NK細胞)并沒有影響，但能增強小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應。

1.6 抗腫瘤

楊靖[7]選用卵巢癌細胞對中國林蛙粗多糖進行抗腫瘤活性篩選，在該實驗條件下，哈蟆油粗多糖沒有明顯的抗腫瘤活性。趙丹玉等[15]從中國林蛙卵中提取得到核糖核酸酶，采用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽比色法(MTT)檢測該核糖核酸酶對鼠S180腫瘤細胞株生長以及對淋巴細胞轉化的影響，結果表明，其對鼠S180腫瘤細胞株生長和淋巴細胞轉化具有較強的抑制作用，并呈現劑量依賴性。

1.7 降血脂

彭飛等[16]研究表明，CO2超臨界萃取的哈蟆油在高劑量的條件下(8 g·kg-1)，給藥前后降低甘油三酯(TG)的程度為54%，降低膽固醇(TC)的程度為51%，對高密度脂蛋白無顯著影響。張梅[2]發(fā)現，哈蟆油及酶解物均能降低TC、TG含量，且與高脂對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。說明哈蟆油及酶解物可以降低由于高脂膳食所致的血清總膽固醇和甘油三酯含量。這些都說明哈蟆油具有輔助降血脂的保健功能。

1.8 基因調控的作用

張圓圓等[17]總結發(fā)現，哈蟆油能使小鼠肝組織中抗氧化基因Gpx4表達量明顯增加，并且對老年鼠的影響大于青年鼠。說明中國林蛙油對老年鼠的抗氧化、抗衰老作用明顯。李毅喆[18]研究發(fā)現，中國林蛙卵油能調控ApoE、LDL-R、ABCA1基因在降血脂過程中的表達，這些與血脂相關的基因在中國林蛙卵油的調節(jié)下可以充分發(fā)揮其降血脂的作用。

2 中國林蛙頭的藥理研究

孫興權等[19]以林蛙頭為原料，提取分離得到林蛙多糖(TCPS)，經抗凝實驗表明，該林蛙多糖具有較好的抗凝血作用，但有關抗凝的作用機制尚不明確。徐麗琴[10]在孫興權的研究基礎上得到了中國林蛙頭提取物的作用機制，是通過抑制血漿中的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ的活性來達到抗凝血作用。其抗凝血的活性大概是肝素的二十分之一，同時用試管血液凝固方法測定了其抗凝血活性的效價為5.2 U。

3 中國林蛙皮的藥理研究

徐義剛[20]以大腸埃希氏菌等為檢測菌種，進行中國林蛙皮膚活性肽的抑菌實驗。結果發(fā)現，該小分子活性肽對革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌具有一定的抗菌活性。姜麗麗[21]發(fā)現，從中國林蛙皮中提取出的生物活性膚組分Flll對小鼠5180胃肉瘤細胞有明顯的抑制作用。李俊峰[22]對中國林蛙皮膚活性肽進行分離純化，得到6個新多肽，其中3個為抑菌肽，2個為緩激肽。經抑菌實驗發(fā)現，其中2個抑菌肽具有光譜抑菌性，另一個抑菌肽只對金黃色葡萄球菌有抑制作用。通過豚鼠離體回腸實驗測定出其中2個緩激肽能使得豚鼠回腸明顯收縮，且收縮強度與肽濃度成正相關，但另一種多肽無緩激肽作用。

4 中國林蛙卵的藥理研究

彭飛[23]以士的寧為致驚劑，評價中國林蛙卵油抗驚厥活性的時效和量效關系。研究發(fā)現，給予動物中國林蛙卵30 min，其抗驚厥作用效果最好。王宇[24]從中國林蛙卵中提取純化出抗癌活性蛋白，對小鼠S180胃肉瘤細胞有明顯的抑制作用，并能顯著誘導K562腫瘤細胞發(fā)生凋亡。邢燕[25]利用CO2萃取和超聲波輔助乙醇提取兩種方法提取中國林蛙卵中的雌激素，通過對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)等3種自由基的清除率進行測定，結果表明，中國林蛙卵雌激素具有抗氧化活性，隨著樣品濃度的增加，抗氧化活性也隨之增加。

5 人工合成

張楠[26]從哈蟆油中提取、分離和純化出了1-甲基海因，隨后考察了1-甲基海因的止咳活性，發(fā)現其對氨水所致小鼠咳嗽有非常顯著的抑制作用，止咳活性與氨茶堿持平，略低于可待因，同時能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期。因此，張楠以甘氨酸乙酯鹽酸鹽為原料，采用液相合成法篩選合成路線，得到目標產物海因和5，5-二甲基海因，收率為78%，其純度可達到99%。

中國林蛙作為一種全身皆可入藥的名貴動物藥具有悠久的藥用歷史。隨著現代科技的不斷發(fā)展以及技術的不斷創(chuàng)新，中國林蛙不僅僅有著重要的藥用價值，并且在食品、日化等輕工業(yè)中占有著重要的地位。通過對近年來國內期刊有關中國林蛙研究的文獻進行檢索和歸納分析，筆者對哈蟆油、林蛙卵、林蛙頭、林蛙皮以及與之相關的復方制劑的藥理研究進行綜述。目前已歸納總結出中國林蛙具有抗氧化、延緩衰老、提高學習記憶、耐缺氧抗疲勞、止咳平喘、降血脂、抗腫瘤、抗驚厥以及基因調控等重要藥理作用，從哈蟆油中提取、分離和純化出了具有止咳活性的1-甲基海因。綜上所述中國林蛙的藥理作用具有多樣性，因此該綜述可為中國林蛙日后的開發(fā)利用及深入研究提供參考。

[1] 姚暉.哈蟆油延緩衰老作用及機制研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學，2010.

[2] 張梅.哈蟆油酶解物制備工藝及藥理活性研究[D].長春：長春中醫(yī)藥大學，2011.

[3] 藍晶晶.林蛙油抗氧化肽的制備及其抗氧化活性的研究[D].北京：北京林業(yè)大學，2012.

[4] 張馨月.林蛙油抗氧化肽的制備及其抗氧化活性研究[D].長春：吉林農業(yè)大學，2014.

[5] 高桂華.哈士蟆油提取物對小鼠學習記憶功能的影響及作用機制的初探[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學，2003.

[6] 馬丹丹.哈蟆油延緩衰老的作用及機制初探[D].廣州：南方醫(yī)科大學，2013.

[7] 楊靖.林蛙油粗多糖提取條件優(yōu)化及其藥理活性研究[D].長春：吉林農業(yè)大學，2011.

[8] 張梅，趙雨，楊士慧，等.哈蟆油抗疲勞藥理活性研究[J].現代預防醫(yī)學，2012，39(8)：1978-1979.

[9] 趙宏宇.長白山林蛙輸卵管糖蛋白ROGP-Ⅱ的分離純化及抗疲勞活性研究[D].長春：吉林農業(yè)大學，2013.

[10] 徐麗琴.中國林蛙蛙頭提取物中抗凝血活性物質的研究[D].大連：遼寧師范大學，2006.

[11] 王永生.哈蟆油藥效成分及其質量控制方法的研究[D].長春：吉林大學，2007.

[12] 高燕玲.甘肅產蛤膜油對小鼠免疫力和應激性能的影響[J].中藥材，1996，19(2)：90-92.

[13] 車宇飛.林蛙油多肽口服液的免疫及毒理評價[D].長春：吉林大學，2014.

[14] 許洪亮，張貴君，渠磊，等.0.5%哈蟆油勻漿對NK細胞活性和細胞免疫功能影響實驗研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2014，16(11)：33-35.

[15] 趙丹玉，侯長余，王艷杰，等.林蛙卵核糖核酸酶的抗腫瘤作用及對淋巴細胞轉化的影響[J].中國生化藥物雜志，2010，31(4)：228-230.

[16] 彭飛，徐峰，劉彬，等.中國林蛙卵油對高脂血癥大鼠血脂的影響[J].廣州醫(yī)學院學報，2003，31(3)：57-59.

[17] 張圓圓，杜智恒，白秀娟.小鼠林蛙油灌胃后其肝組織中Gpx4基因的表達規(guī)律研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2012，5(9)：13-16.

[18] 李毅喆.中國林蛙卵油對高脂血癥家兔相關基因的表達研究[D].哈爾濱：東北農業(yè)大學，2013.

[19] 孫興權，胡耀輝，付蕾，等.中國林蛙頭中抗凝物質的分離純化及抗凝活性研究[J].吉林農業(yè)大學學報，2000(03)：100-103.

[20] 徐義剛.中國林蛙皮膚活性肽分離提取的研究[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學，2004.

[21] 姜麗麗.中國林蛙皮膚生物活性肽的分離純化及其部分生物活性的研究[D].大連：遼寧師范大學，2006.

[22] 李俊峰.中國林蛙皮膚生物活性肽的分離純化、結構鑒定及生物活性檢測[D].大連：遼寧師范大學，2009.

[23] 彭飛.中國林蛙卵油的抗驚厥作用[D].沈陽：沈陽藥科大學，2002.

[24] 王宇.中國林蛙蛙卵抗癌活性蛋白的研究[D].大連：遼寧師范大學，2005.

[25] 邢燕.長白山亞種林蛙卵中雌激素的提取與活性研究[D].長春：長春工業(yè)大學，2014.

[26] 張楠.海因及5，5-二甲基海因的合成及活性篩選研究[D].長春：吉林大學，2009.

AdvancesinPharmacologicalResearchofChineseForestFrog

BAOYue，JIANGWei，LIUDong，SUNJiaming，ZHANGHui*

(ChangchunUniversityofTraditionalChineseMedicine，TraditionalChinesemedicineandbiologicalengineeringresearchanddevelopmentcenter；JilinChangchun130117，China)

The Chinese forest frog is a kind of frog which is used in medicine，nourishing health care and food，it is rich in active ingredients and has become food，medicine，chemical and other light industry important raw materials.In this paper，the literatures which on the research of the Chinese forest frog in recent years are summarized and analyzed，and the oviductus ranae，spawn of the forest frog，head of the forest frog，skin of the forest frog are reviewed.The Chinese forest frog has antioxidant anti-aging，improving learning and memory，resisting hypoxia and fatigue，relieving cough and asthma，lowering blood lipid，antitumor，anti convulsion and gene regulation pharmacological effects and so on and according to the structure of effective components of oviductus ranae were synthesized.Therefore，the diversity of the Chinese forest frog's pharmacological actions.This review is of significance to the development and utilization of Chinese forest frog in the future and to provide a scientific basis for further research on the further research of Chinese forest frog.

Chinese forest frog；pharmacological research

2015-07-07)

國家中醫(yī)藥行業(yè)專項(2015468002-2)

*

張輝，教授，研究方向：中藥化學；Tel：(0431)86172080，E-mail：zhanghui-8080@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.031