北豆根根莖中雙芐基異喹啉類生物堿成分研究△

張艷，彭玉勃，陳效忠，張寧，劉海洋，宋麗艷

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

北豆根根莖中雙芐基異喹啉類生物堿成分研究△

張艷，彭玉勃，陳效忠，張寧，劉海洋，宋麗艷*

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的研究北豆根根莖中雙芐基異喹啉類生物堿成分。方法利用硅膠柱色譜、高效液相色譜等色譜技術(shù)分離得到單體化合物，利用NMR鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果從北豆根根莖中分離得到7個雙芐基異喹啉類生物堿，經(jīng)波譜分析分別鑒定為新四川輪環(huán)藤因(1)，華東唐松草堿 (2)，盾葉輪環(huán)藤堿(3)，高芳香花桂林堿(4)，四川輪環(huán)藤寧堿 (5)，四川輪環(huán)藤因 (6)和裂環(huán)異粉防己堿(7)。化合物1～3和5具有較好的抑制人肝癌細(xì)胞(HepG-2)增殖的活性，IC50值分別為0.58、0.73、0.90、1.66 μmol·L-1。結(jié)論化合物1～7為從該植物中首次分離得到。

北豆根；雙芐基異喹啉類生物堿；細(xì)胞毒活性

北豆根為防己科蝙蝠葛屬植物蝙蝠葛MenispermumdauricumDC.的根莖，主要分布于東北、華北、陜西等地。具有清熱解毒、祛風(fēng)止痛的功效，用于治療咽喉腫痛、熱毒瀉痢、風(fēng)濕痹痛等癥[1]。蝙蝠葛中含有以雙芐基異喹啉類(以下簡稱BBI)為代表的生物堿，由于BBI生物堿結(jié)構(gòu)的多樣性和生物活性的廣泛性，一直為天然藥物學(xué)家和藥理學(xué)家所重視。BBI生物堿是由兩個芐基異喹啉單位通過氧橋連接而成的生物堿。BBI生物堿分子內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化主要表現(xiàn)在芳香氧基數(shù)目、醚鍵數(shù)目、氧橋的性質(zhì)、BBI生物堿單位上碳碳鍵起始的位置和氮原子取代基的性質(zhì)等方面，這些結(jié)構(gòu)變化極易產(chǎn)生新結(jié)構(gòu)的BBI生物堿，同時可能產(chǎn)生新的骨架類型[2]。20世紀(jì)50—60年代，日本學(xué)者Tomita對北豆根化學(xué)成分進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)了蝙蝠葛堿(dauricine)、蝙蝠葛諾林堿(dauricoline)等BBI生物堿[3]。20世紀(jì)90年代，我國學(xué)者潘錫平等從北豆根中首次分離得到蝙蝠葛新林堿(dauriciline)[4]、N-去甲基蝙蝠葛堿(N-demethyldauricine)[5]和蝙蝠葛新苛林堿(daurieico-line)等BBI生物堿[6]。BBI生物堿結(jié)構(gòu)十分相似且復(fù)雜，除以上已經(jīng)獲取的常量生物堿外，還有大量的微量生物堿值得研究和開發(fā)，有希望發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎活性強(qiáng)的先導(dǎo)化合物。本課題組前期從該植物中首次獲得4個微量BBI生物堿，積累了該類型化合物獲取、結(jié)構(gòu)鑒定和活性測試的經(jīng)驗[7]。在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了化學(xué)研究與藥理學(xué)研究緊密合作的工作，繼續(xù)深入系統(tǒng)研究北豆根中BBI生物堿類化學(xué)成分，重點(diǎn)研究其中的微量活性成分，包括新穎結(jié)構(gòu)BBI生物堿的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)測定和藥理活性評價。首次獲取7個BBI生物堿，為進(jìn)一步開展該類化合物結(jié)構(gòu)修飾和創(chuàng)制新型的抗腫瘤藥物奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

核磁共振波譜：BRUKER AV500-III 核磁共振儀，溶劑峰為內(nèi)標(biāo)；分析型HPLC：Agilent 1100 Series 液相色譜儀，DAD-UV檢測器，YMC C-18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)，Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；制備型HPLC：Shimadazu LC-6AD，SPD-6A，SPD-10A 紫外檢測器，SPD 紫外檢測器，YMC-Pack ODS-A (250 mm×20 mm，5 μm) 色譜柱和大賽璐公司AD-H (250 mm×10 mm，5 μm)手性色譜柱；中壓制備液相：Biotage 公司FLASH。

1.2 材料

北豆根藥材于2013年9月采集于黑龍江省大興安嶺地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院陳效忠副教授鑒定為蝙蝠葛MenispermumdauricumDC.的根莖。樣品保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本庫(編號：HZY20130910008)。

2 方法

2.1 提取分離

取干燥北豆根藥材(20 kg)粉碎，95%乙醇浸泡過夜，提取3次，每次1 h，減壓回流得到浸膏(1 kg)，浸膏用pH 3.0的鹽酸溶液溶解，取上清液調(diào)節(jié)pH=10.0，靜止過夜，三氯甲烷萃取沉淀得到蝙蝠葛酚性總生物堿。酚性總生物堿經(jīng)堿性硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇洗脫(體積比，90∶10～10∶90)，得到Fr1～Fr10組分。組分Fr5經(jīng)MPLC中壓液相色譜，乙腈-水洗脫(10∶90～100∶0，0.1%TFA，流速：30 mL·min-1)，得到B1～B10組分。對組分B3用制備型HPLC(乙腈-水流動相，30∶70，流速：5 mL·min-1)分離純化得到化合物1(15 mg，tR=25 min)，組分B5用制備型HPLC(乙腈-水流動相，30∶70，5 mL·min-1)分離純化得到化合物2(6 mg，tR=30 min)、3(12 mg，tR=40 min)和4(11 mg，tR=35 min)。組分Fr8經(jīng)MPLC中壓液相色譜，乙腈-水洗脫(10∶90～100∶0，0.1%TFA，流速：30 mL·min-1)，得到C1～C10組分。對組分C5用制備型HPLC(乙腈-水流動相，35∶65，流速：5 mL·min-1)分離純化得到化合物5(15 mg，tR=38 min)和6(5 mg，tR=43 min)；組分C7用制備型HPLC(乙腈-水流動相，35∶65，流速：5 mL·min-1)分離純化得到化合物7(12 mg，tR=36 min)。

2.2 細(xì)胞毒活性試驗

收集生長良好的腫瘤細(xì)胞，用含10%小牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基配制成1×104cell·mL-1細(xì)胞懸液，于96孔培養(yǎng)板內(nèi)接種，每孔100 μL (含1000個腫瘤細(xì)胞)，置37 ℃、5% CO2溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后加藥，實驗設(shè)空白對照，受試樣品設(shè)5個濃度(0.01，0.1，1，10，100 μmol·L-1)，每濃度3個平行孔，置37 ℃、5% CO2溫箱內(nèi)培養(yǎng)4 d。棄去培養(yǎng)液，每孔加入MTT 溶液(0.4 mg·mL-1，RPMI1640 配制)100 μL，37 ℃ 孵育4 h。棄上清液，每孔加入DMSO 150 μL，溶解Fomazan 顆粒，輕度振蕩后，用550型酶標(biāo)儀在檢測波長540 nm、參考波長405 nm下測定OD值。

3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定與活性

化合物1：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.56 (1H，dd，J=10.0，3.0 Hz，H-1)，3.11 (1H，m，H-3a)，2.65 (1H，m，H-3b)，2.50 (1H，m，H-4a)，2.38 (1H，m，H-4b)，6.58 (1H，s，H-5)，6.33 (1H，s，H-8)，6.98 (2H，d，J=9.0 Hz，H-10和H-14)，6.79 (2H，d，J=9.0 Hz，H-11和 H-13)，2.52 (1H，m，H-15a)，2.78 (1H，dd，J=14.4，3.0 Hz，H-15b)，3.75 (1H，d，J=10.0 Hz，H-1′)，3.30 (1H，m，H-3′a)，2.85 (1H，m，H-3′b)，2.87 (1H，m，H-4′a)，3.22 (1H，m，H-4′b)，6.69 (1H，s，H-5′)，5.95 (1H，s，H-8′)，6.79 (1H，d，J=2.0 Hz，H-10′)，6.78 (1H，d，J=7.8 Hz，H-13′)，6.42 (1H，dd，J=7.8，2.0 Hz，H-14′)，2.58 (1H，m，H-15′a)，3.25 (1H，d，J=13.9 Hz，H-15′b)，2.53 (3H，s，N-Me-2)，3.81 (3H，s，OMe-6)，2.53 (3H，s，NMe-2′)，3.88 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 64.5 (C-1)，44.8 (C-3)，22.3 (C-4)，130.6 (C-4a)，112.8 (C-5)，148.8 (C-6)，143.9 (C-7)，121.8 (C-8)，127.9 (C-8a)，130.5 (C-9)，131.2 (C-10)，116.9 (C-11)，156.0 (C-12)，116.9 (C-13)，131.2 (C-14)，42.3 (C-15)，65.5 (C-1′)，47.6 (C-3′)，26.2 (C-4′)，129.6 (C-4a′)，115.0 (C-5′)，146.7 (C-6′)，143.7 (C-7′)，111.0 (C-8′)，123.5 (C-8a′)，130.1 (C-9′)，116.0 (C-10′)，146.1 (C-11′)，144.1 (C-12′)，119.1 (C-13′)，127.8 (C-14′)，37.2 (C-15′)，42.8 (N-Me-2)，55.8 (OMe-6)，40.6 (N-Me-2′)，56.3 (OMe-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為新四川輪環(huán)藤因(neosutchuenenine)。

化合物2：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.55 (1H，d，J=7.5 Hz，H-1)，2.70 (1H，m，H-3a)，2.80 (1H，m，H-3b)，2.66 (1H，m，H-4a)，2.68 (1H，m，H-4b)，6.55 (1H，s，H-5)，6.05 (1H，s，H-8)，6.32 (1H，d，J=1.6 Hz，H-10)，6.75 (1H，d，J=8.9 Hz，H-13)，6.62 (1H，dd，J=8.9，1.6 Hz，H-14)，2.67 (1H，d，J=13.8，7.5 Hz，H-15a)，3.25 (1H，d，J=13.8 Hz，H-15b)，3.43 (1H，d，J=9.8，1.9 Hz，H-1′)，2.75 (1H，m，H-3′a)，2.82 (1H，m，H-3′b)，2.68 (1H，m，H-4′a)，2.66 (1H，m，H-4′b)，6.00 (1H，s，H-8′)，7.03 (1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-10′)，6.61 (1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-11′)，6.72 (1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-13′)，7.25 (1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-14′)，2.80 (1H，dd，J=12.5，9.8 Hz，H-15′a)，3.22 (1H，dd，J=12.5，1.9 Hz，H-15′b)，2.06 (3H，s，NMe-2)，3.88 (3H，s，OMe-6)，2.56 (3H，s，NMe-2′)，3.78 (3H，s，OMe-6′)，3.65 (3H，s，OMe-7′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 60.5 (C-1)，47.5 (C-3)，26.6 (C-4)，131.3 (C-4a)，109.8 (C-5)，141.2 (C-6)，145.7 (C-7)，111.6 (C-8)，129.6 (C-8a)，133.2 (C-9)，115.2 (C-10)，146.2 (C-11)，152.2 (C-12)，114.2 (C-13)，124.0 (C-14)，39.5 (C-15)，63.2 (C-1′)，42.5 (C-3′)，22.0 (C-4′)，131.5 (C-4a′)，145.6 (C-5′)，145.3 (C-6′)，144.6 (C-7′)，113.2 (C-8′)，129.2 (C-8a′)，135.1 (C-9′)，124.1 (C-10′)，121.3 (C-11′)，156.0 (C-12′)，119.5 (C-13′)，126.2 (C-14′)，36.9 (C-15′)，41.3 (N-Me-2)，61.1 (OMe-6)，43.2 (N-Me-2′)，56.0 (OMe-6′)，56.2 (OMe-7′)。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為華東唐松草堿(thalifortine)。

化合物3：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.49 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，2.60 (1H，m，H-3a)，2.90 (1H，m，H-3b)，2.60 (1H，m，H-4a)，2.78 (1H，m，H-4b)，6.42 (1H，s，H-5)，6.12 (1H，s，H-8)，6.60 (1H，d，J=2.5 Hz，H-10)，6.90 (1H，d，J=8.5 Hz，H-13)，6.82 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-14)，2.56 (1H，d，J=13.4，7.8 Hz，H-15a)，3.02 (1H，d，J=13.4 Hz，H-15b)，4.15 (1H，br d，J=9.9 Hz，H-1′)，3.80 (1H，m，H-3′a)，3.36 (1H，m，H-3′b)，2.68 (1H，m，H-4′a)，2.99 (1H，m，H-4′b)，6.34 (1H，s，H-5′)，6.88 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-10′)，6.88 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-11′)，7.09 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-13′)，7.33 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-14′)，2.76 (1H，dd，J=12.3，9.9 Hz，H-15′a)，3.15 (1H，dd，J=12.3，1.9 Hz，H-15′b)，2.53 (3H，s，N-Me-2)，3.31 (3H，s，OMe-6)，3.91 (3H，s，OMe-12)，2.45 (3H，s，N-Me-2′)，3.78 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 65.5 (C-1)，46.7 (C-3)，26.6 (C-4)，127.9 (C-4a)，112.3 (C-5)，149.1 (C-6)，144.2 (C-7)，120.7 (C-8)，131.3 (C-8a)，134.0 (C-9)，120.5 (C-10)，148.5 (C-11)，148.4 (C-12)，112.9 (C-13)，123.5 (C-14)，40.2 (C-15)，60.3 (C-1′)，44.3 (C-3′)，22.8 (C-4′)，122.6 (C-4a′)，105.6 (C-5′)，146.5 (C-6′)，134.9 (C-7′)，143.0 (C-8′)，122.5 (C-8a′)，136.5 (C-9′)，131.6 (C-10′)，120.4 (C-11′)，155.4 (C-12′)，121.5 (C-13′)，130.0 (C-14′)，44.0 (C-15′)，42.5 (2-N-Me)，55.2 (6-OMe)，56.2 (12-OMe)，41.5 (2′-N-Me)，55.2 (6′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為盾葉輪環(huán)藤堿(cycleapeltine)。

化合物4：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.64 (1H，dd，J=4.0，2.6 Hz，H-1)，3.04 (1H，m，H-3a)，2.75 (1H，m，H-3b)，2.43 (1H，m，H-4a)，2.43 (1H，m，H-4b)，6.32 (1H，s，H-5)，6.10 (1H，s，H-8)，5.56 (1H，br s，H-10)，6.77 (1H，d，J=8.5 Hz，H-13)，6.72 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-14)，2.66 (1H，m，H-15a)，2.96 (1H，dd，J=14.4，4.0 Hz，H-15b)，4.16 (1H，br d，J=6.5 Hz，H-1′)，3.50 (1H，m，H-3′a)，2.82 (1H，m，H-3′b)，2.78 (1H，m，H-4′a)，3.03 (1H，m，H-4′b)，6.24 (1H，s，H-5′)，6.98 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-10′)，6.48 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-11′)，6.94 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-13′)，7.36 (1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-14′)，2.66 (1H，m，H-15′a)，3.25 (1H，d，J=13.9 Hz，H-15′b)，2.53 (3H，s，N-Me-2)，3.61 (3H，s，OMe-6)，3.81 (3H，s，OMe-12)，2.43 (3H，s，N-Me-2′)，3.78 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 64.5 (C-1)，51.1 (C-3)，28.6 (C-4)，130.5 (C-4a)，111.3 (C-5)，148.6 (C-6)，143.3 (C-7)，116.7 (C-8)，128.3 (C-8a)，130.9 (C-9)，117.6 (C-10)，148.7 (C-11)，146.4 (C-12)，110.9 (C-13)，123.6 (C-14)，38.3 (C-15)，60.4 (C-1′)，44.9 (C-3′)，24.8 (C-4′)，122.9 (C-4a′)，104.9 (C-5′)，147.7 (C-6′)，133.3 (C-7′)，142.5 (C-8′)，122.8 (C-8a′)，138.2(C-9′)，131.4 (C-10′)，121.2 (C-11′)，152.8 (C-12′)，121.8 (C-13′)，128.5 (C-14′)，38.9(C-15′)，43.8 (2-N-Me)，55.3 (6-OMe)，55.8 (12-OMe)，41.7 (2′-N-Me)，55.8 (6′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為高芳香花桂林堿(homoaromoline)。

化合物5：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.73 (1H，dd，J=9.5，4.0 Hz，H-1)，3.22 (1H，m，H-3a)，2.90 (1H，m，H-3b)，2.47 (1H，m，H-4a)，2.48 (1H，m，H-4b)，6.50 (1H，s，H-5)，6.90 (2H，d，J=8.0 Hz，H-10和H-14)，6.71 (2H，d，J=8.0 Hz，H-11和H-13)，2.69 (1H，m，H-15a)，2.57 (1H，dd，J=14.4，4.0 Hz，H-15b)，3.83 (1H，dd，J=9.2，4.0 Hz，H-1′)，3.50 (1H，m，H-3′a)，2.82 (1H，m，H-3′b)，2.78 (1H，m，H-4′a)，3.03 (1H，m，H-4′b)，6.59 (1H，s，H-5′)，6.20 (1H，s，H-8′)，6.99 (1H，d，J=7.8 Hz，H-10′)，6.50 (1H，d，J=7.8 Hz，H-11′)，6.50 (1H，d，J=7.8 Hz，H-13′)，6.85 (1H，d，J=7.8 Hz，H-14′)，2.56 (1H，m，H-15′a)，3.65 (1H，d，J=13.9 Hz，H-15′b)，2.50 (3H，s，N-Me-2)，3.80 (3H，s，OMe-6)，2.25 (3H，s，N-Me-2′)，3.85 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 60.2 (C-1)，43.3 (C-3)，22.2 (C-4)，124.8 (C-4a)，108.2 (C-5)，145.9 (C-6)，137.0 (C-7)，138.2 (C-8)，124.0 (C-8a)，131.5 (C-9)，130.8 (C-10)，115.5 (C-11)，156.3 (C-12)，115.5 (C-13)，130.8 (C-14)，64.7 (C-1′)，46.6 (C-3′)，24.2 (C-4′)，128.5 (C-4a′)，114.2 (C-5′)，146.1 (C-6′)，143.6 (C-7′)，110.8 (C-8′)，124.8 (C-8a′)，132.2 (C-9′)，129.8 (C-10′)，114.8 (C-11′)，154.3 (C-12′)，114.7 (C-13′)，129.3 (C-14′)，39.9 (C-15′)，42.5 (N-Me-2)，55.5 (OMe-6)，41.5 (N-Me-2′)，56.6 (OMe-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為四川輪環(huán)藤寧堿(sutchueneneonine)。

化合物6：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.66 (1H，dd，J=9.0，4.0 Hz，H-1)，3.21 (1H，m，H-3a)，2.76 (1H，m，H-3b)，2.45 (1H，m，H-4a)，2.48 (1H，m，H-4b)，6.56 (1H，s，H-5)，6.23 (1H，s，H-8)，6.89 (2H，d，J=8.8 Hz，H-10和H-14)，6.69 (2H，d，J=8.8 Hz，H-11和 H-13)，2.65 (1H，m，H-15a)，2.76 (1H，dd，J=14.4，4.0 Hz，H-15b)，3.74 (1H，d，J=5.0 Hz，H-1′)，3.65 (1H，m，H-3′a)，2.85 (1H，m，H-3′b)，2.79 (1H，m，H-4′a)，3.03 (1H，m，H-4′b)，6.61 (1H，s，H-5′)，6.15 (1H，s，H-8′)，6.49 (1H，d，J=2.0 Hz，H-11′)，6.67 (1H，dd，J=7.8，2.0 Hz，H-13′)，6.82 (1H，d，J=7.8 Hz，H-14′)，2.68 (1H，m，H-15′a)，3.28 (1H，d，J=13.9 Hz，H-15′b)，2.53 (3H，s，N-Me-2)，3.86 (3H，s，OMe-6)，2.53 (3H，s，N-Me-2′)，3.85 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 64.3 (C-1)，44.5 (C-3)，23.2 (C-4)，130.2 (C-4a)，112.5 (C-5)，148.6 (C-6)，144.9 (C-7)，120.8 (C-8)，129.6 (C-8a)，130.6 (C-9)，130.5 (C-10)，116.2 (C-11)，155.4 (C-12)，116.2 (C-13)，130.5 (C-14)，41.7 (C-15)，64.8 (C-1′)，47.3 (C-3′)，26.0 (C-4′)，129.3 (C-4a′)，114.8 (C-5′)，146.2 (C-6′)，143.0 (C-7′)，110.2 (C-8′)，123.6 (C-8a′)，138.0 (C-9′)，145.2 (C-10′)，115.1 (C-11′)，143.7 (C-12′)，125.9 (C-13′)，128.0 (C-14′)，38.2 (C-15′)，42.9 (N-Me-2)，56.0 (OMe-6)，41.0 (N-Me-2′)，55.5 (OMe-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為四川輪環(huán)藤因(sutchuenenine)。

化合物7：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性；1H-NMR (CDCl3，500 MHz)：δ 3.70 (1H，dd，J=10.0，2.5 Hz，H-1)，3.35 (1H，m，H-3a)，2.85 (1H，m，H-3b)，2.85 (1H，m，H-4a)，2.43 (1H，m，H-4b)，6.50 (1H，s，H-5)，6.99 (1H，d，J=2.0 Hz，H-10)，6.86 (1H，d，J=8.5 Hz，H-13)，7.02 (1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-14)，2.80 (2H，m，H-15)，3.50 (2H，m，H-3′)，2.85 (2H，m，H-4′)，6.56 (1H，s，H-5′)，7.23 (1H，s，H-8′)，9.88 (1H，s，H-9′)，7.78 (2H，d，J=8.5，H-11′和15′)，6.93 (2H，d，J=8.5，H-12′和14′)，2.42 (3H，s，N-Me-2)，3.83 (3H，s，OMe-6)，3.65 (3H，s，OMe-7)，3.83 (3H，s，OMe-12)，3.05 (3H，s，N-Me-2′)，3.88 (3H，s，OMe-6′)；13C-NMR (CDCl3，125 MHz)：δ 60.5 (C-1)，44.5 (C-3)，22.8 (C-4)，130.3 (C-4a)，109.6 (C-5)，152.2 (C-6)，140.3 (C-7)，145.0 (C-8)，123.8 (C-8a)，135.0 (C-9)，123.6 (C-10)，141.8 (C-11)，149.3 (C-12)，112.6 (C-13)，127.8 (C-14)，40.2 (C-15)，163.8 (C-1′)，48.2 (C-3′)，27.6 (C-4′)，132.2 (C-4a′)，109.3 (C-5′)，151.3 (C-6′)，146.1 (C-7′)，113.2 (C-8′)，121.4 (C-8a′)，190.7 (C-9′)，130.0 (C-10′)，131.2 (C-11′)，115.2 (C-12′)，164.8 (C-13′)，115.2 (C-14′)，131.2 (C-15′)，42.3 (N-Me-2)，55.6 (OMe-6)，60.2 (OMe-7)，55.5 (OMe-12)，34.7 (N-Me-2′)，55.6 (OMe-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為裂環(huán)異粉防己堿(secoisotetrandrine)。

腫瘤細(xì)胞毒活性測試結(jié)果表明化合物1～3和5具有良好的抑制人肝癌細(xì)胞(HepG-2)增殖的活性，IC50值分別為0.58，0.73，0.90，1.66 μmol·L-1，陽性對照藥紫杉醇的IC50值為0.012 μmol·L-1。

4 結(jié)果與討論

本研究對北豆根中雙芐基異喹啉類生物堿進(jìn)行分離并鑒定7個化合物，化合物1～7均為從該植物中首次獲取，實驗為進(jìn)一步深入系統(tǒng)地研究該類化合物奠定了基礎(chǔ)。

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BisbenzylisoquinolineAlkaloidsfromtheRhizomeofMenispermumdauricum

ZHANGYan，PENGYubo，CHENXiaozhong，ZHANGNing，LIUHaiyang，SONGLiyan*

(JiamusiCollege，HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Jiamusi154007，China)

Objective：To study the chemical constituents of the rhizome ofMenispermumdauricum.MethodsThe compounds were separated and purified by column chromatographic and HPLC chromatographic methods.Structure analyses were carried out by nuclear magnetic resonance (NMR) technology.ResultsSeven bisbenzylisoquinoline alkaloids named neosutchuenenine (1)，thalifortine (2)，cycleapeltine (3)，homoaromoline (4)，sutchueneneonine (5)，sutchuenenine (6)，and secoisotetrandrine (7) were isolated from the rhizome ofM.dauricum.Compounds1-3and5exhibited cytotoxic activity against HepG-2 with IC50values of 0.58，0.73，0.90，and 1.66 μmol·L-1，respectively.ConclusionCompounds1-7were obtained from the plant for the first time.

Menispermumdauricum；bisbenzylisoquinoline alkaloids；cytotoxic activity

2016-02-24)

國家自然科學(xué)基金(81274035)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)創(chuàng)新人才項目(2012)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院自主課題

*

宋麗艷，教授，研究方向：中草藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；Tel：(0545)6103257，E-mail：songliyan@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.002