基于HPLC指紋圖譜技術的白芍及其制劑質量控制

嚴倩茹　鄔偉魁

（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗所，廣東 梅州 514071）

基于HPLC指紋圖譜技術的白芍及其制劑質量控制

嚴倩茹鄔偉魁

（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗所，廣東 梅州 514071）

中藥指紋圖譜是符合中藥特點多指標、整體、綜合的科學質量評價體系。近年HPLC指紋圖譜技術發(fā)展迅速，本文綜述了近年來白芍原藥材、飲片、制劑HPLC指紋圖譜分析方法的研究進展，以期為白芍HPLC指紋圖譜技術的進一步發(fā)展提供參考，為白芍的質量控制提供科學依據(jù)。

高效液相色譜；指紋圖譜；白芍；質量控制

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特征的色譜圖或光譜圖?；瘜W指紋圖譜主要包括色譜[如薄層色譜、高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜、高效毛細管電泳等]指紋圖譜，波譜（如紫外光譜、紅外光譜、質譜等）指紋圖譜及其聯(lián)用技術指紋圖譜等。指紋圖譜技術在中藥材規(guī)范化生產(chǎn)過程和中藥制劑質量控制體系中廣泛應用。近年來，隨著HPLC與中藥指紋圖譜技術的迅速融合，HPLC指紋圖譜技術在中藥質量評價中顯示出獨特的優(yōu)勢。HPLC指紋圖譜具有特征性、整體性和半定量等特點，它是中藥質量標準的重要組成部分，可為藥材栽培、加工技術建立質量評價，可對企業(yè)藥品生產(chǎn)的過程進行控制，可作為藥品打假的有效手段。白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，主要活性部位為芍藥總苷，含有芍藥苷、芍藥內酯苷、苯甲酰芍藥苷等多種化學成分。近年文獻已報道白芍藥材、飲片、活性部位、制劑的指紋圖譜研究，下文對基于HPLC指紋圖譜技術白芍及其制劑的質量控制進行探討。

1　白芍藥材與飲片指紋圖譜的建立

白芍HPLC指紋圖譜的建立，為科學評價其質量提供可靠方法。有研究[1]測定了28批白芍藥材樣品，得到的指紋圖譜有11個共有峰，并指認了9個峰（芍藥內酯苷、芍藥苷、沒食子酰芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等）。白芍的指紋圖譜特征性及專屬性強，可結合含量測定用于全面控制其質量。

1.1不同產(chǎn)地白芍藥材指紋圖譜的建立

中藥指紋圖譜在針對一種藥材多種產(chǎn)地的質量評價研究應用漸多。白芍主產(chǎn)于浙江、安徽、四川等地。由于地理、氣候等條件不同，不同產(chǎn)地白芍的成分存在一定的差異。有研究[2]采用HPLC，Diamonsil C18柱（4.6mm×150 mm，5μm）；流動相：乙腈（A）和0.05%磷酸水溶液（B）；梯度洗脫；檢測波長為220 nm；建立了安徽、山西、貴州、四川、浙江5省12批白芍藥材的HPLC指紋圖譜。標定了13個共有峰。結果，山西、遵義鳳岡、遵義湄潭的白芍峰比較多且指標性成分的峰面積高；四川中江的白芍峰數(shù)不多；浙江的白芍峰數(shù)比較多，但指標性成分的峰面積較低；安徽的白芍指標性成分的峰面積高。同一省產(chǎn)的白芍相似度較高，達0.9以上，不同省產(chǎn)的白芍相似度稍低。

1.2白芍飲片指紋圖譜的建立

白芍是一味傳統(tǒng)的中藥，應用歷史悠久，臨床多用炮制品。常用炮制方法有麩炒、酒制、醋制等。在日常監(jiān)督檢驗工作中，發(fā)現(xiàn)白芍飲片合格率低，質量現(xiàn)狀堪憂[3]，有必要加強質量控制方法研究。炮制改變了白芍的化學成分，使其藥理作用發(fā)生變化。白芍麩炒前后的HPLC指紋圖譜中主要色譜峰發(fā)生了改變[4]。有研究[5]應用HPLC指紋圖譜的計量技術對白芍炒制過程及白芍飲片進行質量控制。李雅等[6]研究白芍超微飲片的HPLC指紋圖譜，測定了 10批白芍超微飲片；測出色譜峰約20個，其中共有峰10個。該方法簡便，重復性好，可用于白芍超微飲片的鑒別與評價。

1.3白芍不同品種指紋圖譜的建立

品種、產(chǎn)地是影響中藥材化學成分及其品質的重要因素。有研究[7]采用HPLC建立浙江磐安產(chǎn)杭白芍的指紋圖譜，并探討杭白芍品種分化問題。用鉆石C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈-10%乙腈溶液 （磷酸調pH為3.0），梯度洗脫，檢測波長：220 nm。相似度、聚類、芍藥苷含量分析表明，10批杭白芍粉紅花品種相似度和一致性較高，而深紅花品種與紫花、白花品種以及外地產(chǎn)深紅花白芍較相似。建立杭白芍粉紅花品種的HPLC指紋圖譜，標定19個共有指紋峰。認為杭白芍粉紅花品種出現(xiàn)了明顯的品種分化；杭白芍指紋圖譜方法穩(wěn)定、可靠、重現(xiàn)性好，可應用于杭白芍藥材的質量控制。

1.4白芍與赤芍指紋圖譜的建立

白芍與赤芍主要來源皆為毛茛科芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，兩者化學成分有相似之處，但在原植物生長環(huán)境、藥材加工方法及性狀、飲片炮制工藝等方面有諸多不同，導致功用各有偏重，區(qū)別明顯[8]。有研究[9]采用 Zorbax SB-C18柱 （4.6 mm×250 mm，5μm），檢測波長230 nm，乙腈-磷酸溶液（pH 2.7）梯度洗脫；對37個白芍樣品和34個赤芍樣品進行指紋圖譜測定，指認9個色譜峰。高明等[10]建立 11批白芍和 11批赤芍的HPLC指紋圖譜，能區(qū)別白芍和赤芍，為臨床應用提供依據(jù)。另有報道[11]測定了 15批白芍、45批赤芍、21批牡丹皮樣品，建立的HPLC指紋圖譜可快速區(qū)別3種藥材。

2　白芍活性部位指紋圖譜的建立

芍藥總苷是白芍的主要活性部位，主含芍藥苷、芍藥內酯苷等。芍藥總苷有保肝、抗抑郁、抗炎鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護等藥理作用[12]。 有研究[13]用 Supelcosil LC-C18柱（5μm，150 mm ×4.6 mm）；流動相為乙腈、水（磷酸調 pH為 3.0），梯度洗脫；測定了10批芍藥總苷樣品，建立 HPLC指紋圖譜，有芍藥內酯苷和芍藥苷等22個共有峰。芍藥總苷的指紋圖譜特征性及專屬性強，可結合含量測定用于控制芍藥總苷的質量，確保每批產(chǎn)品的均一性。

3　白芍與其抗炎鎮(zhèn)痛制劑指紋圖譜的建立

白芍的臨床應用廣泛，組方治病，配伍不同，其功效亦不同。在張仲景《傷寒論》112方中有33方運用了白芍[14]。強肝膠囊、氣滯胃痛顆粒等常用中成藥中含有白芍。強肝膠囊由茵陳、白芍等 16味藥組成，功能清熱利濕、補脾養(yǎng)血、益氣解郁；用于慢性肝炎、早期肝硬化病、脂肪肝、中毒性肝炎等。白芍主要活性部位為白芍總苷，有抗炎鎮(zhèn)痛作用。有研究[15]采用Diamonsil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5μm），在230 nm波長下，以乙腈-0.05%磷酸水溶液進行梯度洗脫，測定了44批樣品；建立HPLC指紋圖譜，確定共有峰14個，其中13個歸屬到各藥材，確認芍藥苷、芍藥內酯苷等11個成分。HPLC指紋圖譜的構建和共有色譜峰成分的確定為其質量控制提供參考。氣滯胃痛顆粒由柴胡、白芍等組成，功能舒肝理氣，和胃止痛；用于肝郁氣滯，胸痞脹滿，胃脘疼痛。芍藥總苷的指標成分為芍藥苷，有抗炎鎮(zhèn)痛作用。姚東等[16]采用Agilent TC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相0.02%甲酸溶液-乙腈，線性梯度洗脫，流速1.0m L/min，柱溫30℃，檢測波長230，254，283 nm，對數(shù)據(jù)進行全時段多波長融合，建立HPLC指紋圖譜，標定23個共有峰，確認白芍藥苷、芍藥苷、甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷等6種成分。該方法簡便、準確，重復性好，可為該制劑的質量控制提供依據(jù)。

4　HPLC指紋圖譜技術在白芍及其制劑質量控制應用中存在的問題

第十屆藥典委員會在《中國藥典》（2015年版）編制大綱中明確指出，要完善中藥質量控制模式，建立完善有效活性成分測定、多成分同步定量以及特征或指紋圖譜檢測技術；要加強有效性的質量控制，重點引入一測多評、指紋和特征圖譜等新的分析方法和檢測技術。中藥指紋圖譜是一門涉及化學、醫(yī)學、藥理學、代謝組學、計算機科學、統(tǒng)計學等多學科交叉的技術[17]。HPLC指紋圖譜技術在白芍及其制劑質量控制應用中，需要加強譜效結合研究、完善共有模式的建立。

4.1加強譜效關系研究

中藥譜效關系是繼中藥指紋圖譜研究更深層次的研究方法，將中藥藥效和中藥化學指紋圖譜有機結合，建立可反映中藥內在質量的“藥效指紋圖譜”，為中藥的質量控制提供了新途徑[18]。大量關于白芍的化學成分及其指紋圖譜已報道，但沒有指明相關藥效與哪一種或幾種化學成分相關。僅芍藥苷不能代表其抗炎鎮(zhèn)痛藥效優(yōu)劣，如果將單一成分作為指標，便失去指紋圖譜的意義。芍藥總苷是白芍抗炎鎮(zhèn)痛的活性部位，但目前還不清楚，真正起效的是芍藥總苷中的化合物本身，還是其代謝產(chǎn)物；或許是幾種苷類化合物之間的協(xié)同作用。探尋這幾種苷類的最佳比例關系反映到圖譜上，或許可以作為一個評價不同產(chǎn)地、不同炮制品抗炎鎮(zhèn)痛作用優(yōu)劣的依據(jù)。白芍復方制劑按方劑配伍協(xié)同作用發(fā)揮療效，不能單按白芍等藥味中各主要化學成分芍藥苷等色譜峰信號強弱來指示質量的優(yōu)劣，故在為質量控制提供參考時略顯不足，需要結合藥效方能更直觀地為制劑質量控制提供依據(jù)。

4.2完善共有模式建立

有研究通過測定10批白芍藥材建立其HPLC指紋圖譜[19]。值得注意的是，中藥指紋圖譜的建立必須基于大量藥材的收集，只有兼顧中藥種質資源情況，從不同的產(chǎn)區(qū)收集盡可能多的藥材，才更有助于白芍化學信息在HPLC指紋圖譜中完整表達，構建共有模式。中藥應建立不同品種、產(chǎn)地、采收期和不同炮制方法所得到的指紋圖譜數(shù)據(jù)庫。

4.3結合中藥成分生物活性研究

長期以來，中藥質量控制手段、質量評價指標及質量標準與中藥的有效性關聯(lián)不夠，值得注意的是，中藥指紋圖譜研究[20]應與中藥成分生物活性研究相結合，否則中藥質量標準研究難以避免走入“盲人摸象”的胡同。中藥質控是中藥現(xiàn)代化研究的難點，而中藥生物活性組分群的辨識是支撐中藥質控的基石，是中藥創(chuàng)新發(fā)展的重要方向。如何從多如指紋的復雜成分群中尋找“生物活性組分群”，實現(xiàn)中藥質量標準“關聯(lián)藥效，量而又準，可控可評”的愿景[21]，是后續(xù)指紋圖譜評價體系構建的重點。這種生物活性成分，將是中藥質量標志物（Q-marker）[22]的“候選”成分。中藥 Q-marker是存在于中藥材和中藥產(chǎn)品 （如中藥飲片、中藥煎劑、中藥提取物、中成藥制劑）中固有的或加工制備過程中形成的、與中藥的功能屬性密切相關的化學物質，作為反映中藥安全性和有效性的標示性物質進行質量控制。將以往“成分-藥效”的二元研究模式上升為 “性-效-物”（藥性-藥效-生物活性物質基礎）三元模式[23]。建立指紋圖譜模式識別→復雜成分群中找到藥效成分群→確定中藥質量標志物→利用指紋圖譜對標志物進行定性定量控制，將使指紋圖譜研究得到升華。

相信隨著HPLC指紋圖譜技術的完善，其在中藥質量評價體系中將發(fā)揮越來越重要的作用。

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Quality Control of Paeonia lactiflora Pall.and Its Preparation Based on HPLC Fingerprint

Yan Qianru，Wu Weikui（Meizhou Institute for Food and Drug Control，Guangdong Meizhou 514071，China）

Fingerprint of traditional Chinese medicine（TCM）is a multi index comprehensive evaluation system. As more and more technologies have been applied to the fingerprint research of TCM，it is sure to play a much more important role in the quality control of TCM.This paper reviews the progress in research on analytical methods in fingerprint technology for Paeonia lactiflora Pall.，prepared slices and preparation，so as to provide a scientific basis for quality control of Paeonia lactiflora Pall.

HPLC；Fingerprint；Paeonia lactiflora Pall.；Quality Control

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.11.008

嚴倩茹，女，碩士，主管中藥師。主要從事藥品質量研究工作。通訊作者E-mail：499476976@qq.com

（2016-08-09）