子宮內(nèi)膜癌與PTEN、NDRG1的相關(guān)研究

步翠霞 王言奎

·論著·

子宮內(nèi)膜癌與PTEN、NDRG1的相關(guān)研究

步翠霞 王言奎

目的研究子宮內(nèi)膜癌中磷酸酯酶與張力蛋白同源物(PTEN)和分化相關(guān)基因1(NDRG1)的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系。方法運(yùn)用免疫組化SP方法檢測(cè)77例觀察組病例(均為子宮內(nèi)膜癌患者)、55例對(duì)照組病例［正常子宮內(nèi)膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宮內(nèi)膜不典型增生15例］中PTEN和NDRG1的表達(dá)情況,分析子宮內(nèi)膜癌中二者與各臨床病理因素的關(guān)系。結(jié)果PTEN在正常子宮內(nèi)膜中陽(yáng)性表達(dá)率最高,為87.5%(35/40),在不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中明顯降低,分別為60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宮內(nèi)膜癌中陽(yáng)性表達(dá)率為87.0%(67/77),明顯高于正常子宮內(nèi)膜27.5%(11/40)和不典型增生內(nèi)膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。二者表達(dá)均與子宮內(nèi)膜癌患者的年齡、臨床分期無(wú)相關(guān)性,而與細(xì)胞分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論P(yáng)TEN和NDRG1與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

子宮內(nèi)膜癌；磷酸酯酶與張力蛋白同源物；分化相關(guān)基因1；免疫組化

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一,近年來(lái)發(fā)病率在世界范圍呈上升趨勢(shì),其病因至今不十分清楚。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多步驟、多基因的演變過(guò)程,抑癌基因失活和癌基因異常激活在此過(guò)程中可能起重要作用。進(jìn)一步研究抑癌基因和癌基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及相互作用,了解其與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系,有助于為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)防、治療提供新的科學(xué)依據(jù)。本次研究采用免疫組化方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌中PTEN、NDRG1的表達(dá),并探討其臨床意義,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院婦產(chǎn)科2012年1月～2015年6月住院子宮內(nèi)膜癌行手術(shù)的病例作為觀察組,共77例,患者年齡42～71歲。選擇對(duì)照組病例55例,其中正常子宮內(nèi)膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宮內(nèi)膜不典型增生15例,患者年齡39～73歲。以上病例均經(jīng)術(shù)后病理確診,臨床資料完整,均為生育后婦女,術(shù)前均未接受過(guò)化療、放療和激素等治療。

1.2 主要試劑 即用型鼠抗人單克隆PTEN抗體購(gòu)自福建邁新公司；兔抗人NDRG1多克隆抗體購(gòu)自上海雅吉公司的濃縮型試劑,稀釋倍數(shù)1：100；二抗、PBS沖洗液、DAB顯色試劑購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 PTEN和NFRG1均采用SP兩步免疫組化染色法：標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,采用4 μm厚度連續(xù)切片,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。常規(guī)石蠟切片脫蠟水化,高壓鍋抗原修復(fù)1min,PBS沖洗加入一抗,4℃冰箱過(guò)夜,次日PBS沖洗,加二抗室溫孵育30min,PBS沖洗后加DAB顯色,蘇木素復(fù)染5min,蒸餾水沖洗,中性樹(shù)膠封片。每批切片均用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照,PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) PTEN陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞核或細(xì)胞漿,呈黃色或棕黃色顆粒。NDRG1免疫組織化學(xué)陽(yáng)性信號(hào)主要位于細(xì)胞質(zhì),部分位于細(xì)胞膜,呈淺黃色至棕黃色。請(qǐng)兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察切片,隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野(×400),每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,觀察陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比并進(jìn)行判斷：陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%定義為陰性,陽(yáng)性細(xì)胞率＞10%定義為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPPS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN和NDRG1在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況 PTEN在正常子宮內(nèi)膜中陽(yáng)性表達(dá)率最高,為87.5%(35/40),在不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中明顯降低,分別為60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宮內(nèi)膜癌中陽(yáng)性表達(dá)率為87.0%(67/77),明顯高于正常子宮內(nèi)膜27.5%(11/40)和不典型增生內(nèi)膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

2.2 子宮內(nèi)膜癌中PTEN、NDRG1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 將子宮內(nèi)膜癌的所有病例按照年齡、細(xì)胞分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期進(jìn)行分項(xiàng),比較PTEN和NDRG1在不同項(xiàng)目中的表達(dá)情況, PTEN和NDRG1均與子宮內(nèi)膜癌患者的年齡、臨床分期無(wú)相關(guān)性,而與細(xì)胞分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。PTEN在子宮內(nèi)膜癌中高、中分化表達(dá)情況高于低分化；深肌層浸潤(rùn)中表達(dá)低于淺肌層浸潤(rùn)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)低于無(wú)轉(zhuǎn)移。而NDRG1的表達(dá)正好相反,在子宮內(nèi)膜癌中高、中分化表達(dá)高于低分化；深肌層浸潤(rùn)中表達(dá)高于淺肌層浸潤(rùn)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)高于無(wú)轉(zhuǎn)移。見(jiàn)表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌病變發(fā)展復(fù)雜,此過(guò)程中伴有多種基因和蛋白表達(dá)的失調(diào)。PTEN是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因［1］,不僅能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞分裂,而且作用于細(xì)胞生理多方面(包括細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、分化)。NDRG1作為一種細(xì)胞分化相關(guān)基因,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有密切聯(lián)系,且能被多種分化調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)表達(dá)［2］,對(duì)腫瘤的治療具有潛在作用。

本實(shí)驗(yàn)中作者應(yīng)用免疫組化的方法研究了PTEN和NDRG1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)：PTEN的表達(dá)缺失和NDRG1的陽(yáng)性表達(dá),在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌中有明顯升高趨勢(shì)。另外發(fā)現(xiàn)：PTEN表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞分化程度呈正相關(guān),即子宮內(nèi)膜細(xì)胞惡性程度越高、分化程度越低,PTEN的陽(yáng)性率越低,即PTEN的表達(dá)缺失越明顯。而NDRG1隨著子宮內(nèi)膜細(xì)胞惡性程度的增加,陽(yáng)性表達(dá)趨勢(shì)升高,兩者表達(dá)趨勢(shì)相反。

Bandyopadhyay等［2］研究了PTEN與NDRG1的表達(dá)關(guān)系,認(rèn)為PTEN上調(diào)NDRG1基因,NDRG1基因是PTEN作用的靶基因之一,PTEN表達(dá)增加可提高NDRG1的表達(dá)。今后PTEN和NDRG1可作為腫瘤相關(guān)基因的候選基因,有望為腫瘤的臨床診治、預(yù)防及個(gè)體化治療等提供新的方法。聯(lián)合檢測(cè)NDRG1和PTEN的表達(dá)可能對(duì)判斷腫瘤的生物學(xué)行為具有重要價(jià)值。與傳統(tǒng)的放化療相比,腫瘤誘導(dǎo)分化治療避免了殺傷正常細(xì)胞的不良反應(yīng),治療腫瘤具有較好的前景［3,4］。隨著研究的不斷深入,PTEN和NDRG1的功能以及二者在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)生、發(fā)展、治療和預(yù)后中的作用會(huì)進(jìn)一步明確。

［1］Tortes J,Pulido R.The tumor suppressor PTEN is phosphorylated by the protien kinase CK2 at its C terminus.Implications for PTEN stability to preteasome mediated degration.J Biol Chem,2001,276(2):993-998.

［2］Bandyopadhyay S,Pai SK,Hirota S,et al.PTEN up-regulates the tumor metastisis suppressor gene Drg-1 in prostate and breast cancer.Cancer Res,2004,64(21):7655.

［3］王震,王國(guó)英,王芳.分化相關(guān)基因NDRG1與腫瘤.中華病理學(xué)雜志,2003,32(2):162-164.

［4］王立瑋.分化相關(guān)基因NDRG1與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2007,21(5):481-485.

Correlation research of endometrial cancer,PTEN and NDRG1

BU Cui-xia,WANG Yan-kui.Department of Obstetrics and Gynecology,Qingdao University Affiliated Hospital of Medical School,Qingdao 266003,China

ObjectiveTo research relationship between expressions of phosphatase and tensin homolog (PTEN) and N-myc downstream-regulated gene 1 (NDRG1) in endometrial cancer and clinical pathological factors.MethodsExpressions of PTEN and NDRG1 were detected by immunohistochemical SP method in observation group with 77 patients (all the cases with endometrial cancer) and control group with 55 patients ［40 cases with normal endometrium (23 cases at proliferating phase and 17 cases at secretory phase),15 cases with atypical endometrial hyperplasia］.Relationship between PTEN,NDRG1 and clinical pathological factors was analyzed.ResultsPTEN had the highest positive expression rate in normal endometrium as 87.5% (35/40),and its rates in atypical endometrial hyperplasia and endometrial cancer were obviously lower as 60.0% (9/15) and 14.3% (11/77).NDRG1 had much higher positive expression rate in endometrial cancer as 87.0% (67/77) than 27.5% (11/40) in normal endometrium and 40.0% (6/15) in atypical endometrial hyperplasia (P＜0.01).Their expressions were not correlated with age and clinical phase of endometrial cancer patients,while they all had correlation with cell differentiation,myometrial invasion,and lymphatic metastasis.ConclusionPTEN and NDRG1 are correlated with occurrence,development and metastasis of endometrial cancer.

Endometrial cancer; Phosphatase and tensin homolog; N-myc downstream-regulated gene 1; Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.001

2015-12-24］

266003 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科

王言奎