ArraY-CGH技術(shù)在不明原因畸形胎兒檢測中的應(yīng)用研究

侯建偉，董曉燕，許日華 （新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，新疆克拉瑪依834000）

ArraY-CGH技術(shù)在不明原因畸形胎兒檢測中的應(yīng)用研究

侯建偉，董曉燕，許日華 （新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，新疆克拉瑪依834000）

目的：探討ArraY-CGH技術(shù)（微陣列比較基因組雜交技術(shù)）在不明原因畸形胎兒檢測中的應(yīng)用.方法：選取2013－01／2015－10新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依中心醫(yī)院收治的不明原因畸形胎兒102例作為研究對象，對所選胎兒采取CNVs（全基因組拷貝數(shù)變異）進行篩查，獲取畸形胎兒不明原因中CNVs檢出率，并分析CNVs與畸形胎兒的相關(guān)性，采用此方法來評估ArraY-CGH對不明原因畸形胎兒可能的遺傳病因診斷作用.結(jié)果：25／102例患兒中發(fā)現(xiàn)33個CNVs（重復16個、缺失17個），總發(fā)生率為32.35%（33／102），CNVs平均長度1321 kb.對3／25例患者父母血樣進行鑒定，判定CNVs是否是家族遺傳，其中1例具有新生CNVs，余下2例為父親遺傳.攜帶MR／DD致病相關(guān)CNVs的患兒檢出率為15.69%（16／102）.結(jié)論：基因組CNVs相關(guān)的微缺失重復，是造成不明原因畸形胎兒的原因之一，高分辨ArraY-CGH技術(shù)可在不明原因畸形胎兒中發(fā)現(xiàn)更多的遺傳病因，幫助和提高不明原因畸形胎兒的分子診斷水平.

ArraY-CGH技術(shù)；畸形胎兒；應(yīng)用研究

0 引言

畸形胎兒是指胎兒在子宮內(nèi)發(fā)生的結(jié)構(gòu)或染色體異常.胎兒畸形約占3%.我國先天殘疾兒童總數(shù)高達80～100萬，占我國出生人口總數(shù)的4%～6%.嚴重的畸形可導致胎兒、新生兒嚴重殘疾或者死亡［1］.以往常用傳統(tǒng)細胞遺傳學檢測FISH及MLPA（多重連接依賴探針擴增法）等技術(shù)對畸形胎兒的病因進行檢出，但是仍然有一半的患兒無法知道病因.近年隨著微陣列技術(shù)分辨率的不斷發(fā)展，國外科研人員利用ArraY-CGH技術(shù)對不明原因畸形胎兒展開CNVs等研究，發(fā)現(xiàn)患兒存在罕見CNVs從而識別一系統(tǒng)新的微缺失或者重復綜合癥.本研究選取新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依中心醫(yī)院收治的102例不明原因畸形胎兒作為研究對象，采用ArraY-CGH技術(shù)進行初步的全基因組CNVs篩查，以此來了解ArraYCGH技術(shù)對不明原因畸形胎兒可能的遺傳學病因診斷作用，現(xiàn)報道如下.

1 資料和方法

1.1 一般資料選取2013－01／2015－10新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依中心醫(yī)院收治的不明原因畸形胎兒102例作為研究對象，其中男72例、女30例，年齡0.1～16（平均5.2±1.6）歲.其中伴有生長落后或發(fā)育遲緩81例、伴有其他畸形或者神經(jīng)系統(tǒng)異常21例，其中患兒具有MR／DD家族史36例、患兒的母親具有異常妊娠史12例、患兒有典型面部特征30例.

1.2 納入標準①母親具有異常妊娠史.②伴發(fā)有其他體表或內(nèi)臟畸形.③異常面容或典型面部特征.④孤獨癥譜系障礙.⑤患兒發(fā)育遲緩或者生長落后.（所選患者均滿足上述條件之一）.

1.3 排除標準遺傳代謝性疾病患兒；疑似綜合征患兒；家屬不簽署研究同意書者；均獲兒科研究所倫理委員會批準.

1.4 診斷標準根據(jù)不同的年齡段，分別采用《中國韋氏智力量表》、《兒心0－4歲精神發(fā)育量表》測定兒童的DQ或IQ，采用《嬰兒－初中生社會適應(yīng)性能力量表》對患兒進行社會適應(yīng)性能力評價.IQ或DQ＜70伴社會適應(yīng)能力低下診斷為MR，MR（年齡＞5歲），DD（年齡＜5歲）［2］.以下統(tǒng)稱為MR／DD.

1.5 ArraY-CGH技術(shù)檢測方法QIAGEN抽提外周抗凝血的基因組DNA，獲得吸光度值和濃度后，取3～6 μg DNA于50 μL體系，ALUI和RSAI聯(lián)合37℃消化2 h，之后進行NDA純化，重新測定吸光度值后，取2500 ngDNA，進行cy5標記對照標本，cy3標記MR／DD標本，之后終止反應(yīng).將對照DNA和患兒DNA等量混合后加入雜交體系，94℃變性，37℃0.5 h，上樣到芯片上（oligo 244 k），QIAGEN抽提外周抗凝血的基因組DNA，獲得吸光度值和濃度后，取3～6 μg DNA于50 μL體系，消化2 h，針對所發(fā)現(xiàn)的罕見CNVs，盡可能采用雙親樣本重復ArraY-CGH檢測，了解其是否為新生CNV［3］.

1.6 MR／DD相關(guān)CNVs的評估方法針對臨床中發(fā)現(xiàn)的病例，采用國際基因組CNVs多態(tài)性數(shù)據(jù)庫進行比對，判斷其是否為罕見CNVs或者常見CNVs，參照美國波士頓兒童醫(yī)院遺傳診斷實驗室的CNVs評估分析標準將CNVs分為以下5類.①常見類型：≥2例以上片段大小基本完全相同的CNVs或者80%以上區(qū)域完全重疊的相似CNVs.②罕見類型：病例可能和MR／DD相關(guān).③新生類型：正常父母樣本中未發(fā)現(xiàn)，盡管多數(shù)文獻中未詳細報道，但也有研究者證明其與MR／DD可能相關(guān)的重要基因.④臨床意義不明確的類型：病例未曾報道，且其父母未能參與.⑤家族性CNVs：已在正常父母樣本中證實.以上分類②－③均屬于與MM／DD相關(guān)或很有可能相關(guān)的CNVs，對于此類CNVs，該區(qū)域內(nèi)的基因名稱來自UCSC brower［4］.

2 結(jié)果

2.1 ArraY-CGH檢查結(jié)果25／102例患兒中發(fā)現(xiàn)33個CNVs（重復16個、缺失17個），總發(fā)生率為32.35%（33／102），CNVs平均長度1321 kb.

對3／25例患者父母的血樣進行鑒定，判定CNVs是否是家族遺傳，其中1例具有新生CNVs，余下2例為父親遺傳.

25例患兒中33個罕見CNVs采用美國波士頓兒童醫(yī)院遺傳診斷實驗室的CNVs的評價標準，并且結(jié)合DECIPHER數(shù)據(jù)庫和MR／DD相關(guān)研究報告，發(fā)現(xiàn)20個CNVs可能與MR／DD有關(guān)系.但是由于部分患兒同時會存在兩種情況，16例患兒MR／DD相關(guān)CNVs，因此攜帶MR／DD致病相關(guān)CNVs的患兒檢出率為15.69%（16／102）.這16例患兒中16p11.2微缺失綜合征3例、Pelizaeus-Merzbacher病2例、15q11-13的Prader-Willi綜合征／Angelman綜合征4例、Potocki-Lupsk綜合征6例、16p13.11微缺失綜合征1例.Potocki-Lupsk綜合征.

3 討論

微陣列比較基因組雜交技術(shù)（ArraY-CGH）是一種高分辨率、高通量、高效率的全基因組篩查方法［5］，這一方法有效地克服或彌補了現(xiàn)有染色體檢測技術(shù)的局限性，將染色體病的診斷提高到亞顯微甚至基因水平上，極大地提高了染色體異常的檢出率［6－7］，為臨床遺傳咨詢醫(yī)師進行基因型—表型關(guān)系的分析提供了科學依據(jù)，用于產(chǎn)前診斷中可有效控制缺陷兒的出生，提高人口素質(zhì)［8－10］.本研究結(jié)果顯示，ArraY-CGH對MR／DD相關(guān)臨床非典型性綜合征檢出率較高，且對于部分不明原因畸形胎兒能夠提供準確的遺傳病因，幫助醫(yī)師判斷患兒的疾病情況.

綜上所述，基因組CNVs相關(guān)的微缺失重復，是造成不明原因畸形胎兒的原因之一，高分辨ArraYCGH技術(shù)可在不明原因畸形胎兒中發(fā)現(xiàn)更多的遺傳病因，幫助和提高不明原因畸形胎兒的分子診斷水平.

［1］池一嬋.ArraY-CGH技術(shù)在不明原因畸形胎兒檢測中的應(yīng)用研究［D］.東莞：廣東醫(yī)學院，2015：251.

［2］傅文婷，盧 建，許 玲，等.G顯帶聯(lián)合ArraY-CGH技術(shù)在產(chǎn)前超聲異常胎兒診斷中的應(yīng)用研究［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2014，31（6）：737－742.

［3］李 璃，周曉燕，季修慶，等.染色體14q＋畸形胎兒的產(chǎn)前細胞遺傳學研究［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2012，29（2）：214－217.

［4］耿 茜，吳維青，羅福薇，等.應(yīng)用ArraY-CGH及MLPA技術(shù)檢測核型不明的4例染色體不平衡易位［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2013，30（3）：288－292.

［5］池一嬋，隗伏冰，劉彥慧.畸形胎兒的產(chǎn)前實驗室診斷研究進展［J］.中國當代醫(yī)藥，2015，22（10）：14－17，26.

［6］郭喬麗，符 芳，李 茹，等.染色體微陣列分析技術(shù)在馬蹄足內(nèi)翻胎兒產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2016，51（7）：484－490.

［7］周 靜，蔣 濤，李 璃，等.羊水細胞染色體核型分析和微列陣比較基因組雜交技術(shù)驗證無創(chuàng)產(chǎn)前檢測的臨床意義［J］.實用婦產(chǎn)科雜志，2015，31（4）：292－295.

［8］郭彩琴，肖建平，王峻峰，等.一例疑診具有Angelman綜合征分娩史孕婦的產(chǎn)前診斷［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2015，32（6）：827－829.

［9］張艷亮，徐秋月，蔡雪梅，等.原發(fā)性閉經(jīng)伴高雄激素血癥兩姐妹基因組拷貝數(shù)變異的檢測和分析［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，2015，32（6）：814－818.

［10］黃新疆，毛曉健，劉 麗，等.中國南方Prader-Willi綜合征患兒27例臨床表現(xiàn)及分子特征分析［J］.中華實用兒科臨床雜志，2016，31（8）：573－578.

Study on the application of ArraY-CGH in the detection of unexplained malformation fetus

HOU Jian-Wei，DONG Xiao-Yan，XU Ri-Hua
Department of Obstetrics and Gynecology，Central Hospital of Karamay，Karamay 834000，China

AIM：To investigate the application of ArraY-CGH（microarray comparative genomic hybridization）in the detection of unexplained malformation fetus.METHODS：A total of 102 unexplained malformation fetus admitted into Central Hospital of Karamay from January 2013 to October 2015 were selected as the objects of research，and they were given CNVs（genome-wide copy number variations）screening to acquire CNVs detection rate of unexplained malformation fetus and analyze the correlations between CNVs and malformation fetus，which could evaluate the diagnosis effect of possible genetic etiology of ArraY-CGH for unexplained malformation fetus.RESULTS：A total of 33 cases of CNVs was found from 25／102（16 repeat，17 missing），and the total incidence rate was 32.35%（33／102），and the average length of CNVs was 1321 kb.The blood sample of 3／25 patients' parents was identificated to determine whether CNVs is family hereditary，of which 1 case had neonatal CNVs，the remaining 2 cases inherited from their father.The children carrying CNVs MR／DD associated with the disease in children with a detection rate of 15.69%（16／102）.CONCLUSION：One reason for unexplained malformation fetus is that relevant duplication and microdeletions of genome CNVs.High resolution ArraY-CGH can find more genetic etiology unexplained malformation fetus and help to improve the molecular diagnosis level of of unexplained malformation fetus.

ArraY-CGH；malformationfetus；application research

R714.53

A

2095-6894（2016）11-37-02

2016－09－07；接受日期：2016－09－20

侯建偉.本科，副主任醫(yī)師.研究方向：產(chǎn)前診斷.Tel：0990-6236053 E-mail：2631072637＠qq.com