苗藥追風(fēng)傘扦插繁殖技術(shù)研究

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(貴陽中醫(yī)學(xué)院， 貴州 貴陽 550002)

追風(fēng)傘始載于《貴州民間方藥集》，為貴州苗族習(xí)用藥物，苗藥名為“科土歐kod tud vud”(貴州黔東南州)[1]，為報(bào)春花科植物落地梅(LysimachiaparidiformisFranch.)及狹葉落地梅WTBX(L.paridiformis Franch.var.stenophyllaFranch.)的干燥全草，具有袪風(fēng)活絡(luò)，活血止痛的功效。用于風(fēng)濕痹痛，四肢拘攣，半身不遂，跌撲損傷，瘀血腫痛，小兒驚風(fēng)[2]。我國(guó)主要分布于四川、貴州、湖北、湖南[3]等地，貴州主要分布于貴陽、思南、玉屏、道真、德江、仁懷、開陽、松桃、務(wù)川、黔西、黃平、江口等地，生于海拔350～1 980 m的山坡、溝邊等陰濕處[4]。 其主要含有皂苷、黃酮、甾體類、香豆素類等化學(xué)成分[5-7]，現(xiàn)代藥理研究證明，落地梅中的重樓排草苷對(duì)家兔、豚鼠、大鼠和小鼠的離體子宮均有興奮作用[8]，對(duì)動(dòng)物妊娠子宮有收縮作用[9]，對(duì)產(chǎn)后出血有良好的止血效果[10]。

追風(fēng)傘為貴州同濟(jì)堂制藥有限公司的民族藥“黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊”的主要原料藥之一。該藥對(duì)風(fēng)寒濕痹、肩臂腰腿疼痛有較好療效，具有廣闊的市場(chǎng)前景。隨著追風(fēng)傘的需求量不斷擴(kuò)大，僅靠野生收購已不能滿足供應(yīng)，大面積人工栽培將是必然發(fā)展趨勢(shì)，但目前追風(fēng)傘種子在野生狀態(tài)下很難采集，同時(shí)實(shí)生苗生長(zhǎng)緩慢?；诖?，本試驗(yàn)以落地梅(L.paridiformisFranch.)為對(duì)象，從無性繁殖——扦插繁殖入手，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，通過對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理時(shí)間、扦插基質(zhì)及透光率等影響扦插的主要因素進(jìn)行深入研究，探索追風(fēng)傘扦插繁殖的適宜條件，以期為追風(fēng)傘的人工大量的栽培以及規(guī)范化種植提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

試驗(yàn)材料于2015年6月5日采自貴州省畢節(jié)市黔西縣中坪鎮(zhèn)，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室魏升華副教授鑒定為報(bào)春花科植物落地梅(LysimachiaparidiformisFranch.)，憑證標(biāo)本已存于貴陽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室。

1.2 方 法

1.2.1 基質(zhì)的準(zhǔn)備

試驗(yàn)設(shè)4種基質(zhì)：壤土；蛭石+壤土(1∶1)；珍珠巖+壤土(1∶1)；泥炭土+壤土(1∶1)，扦插前把各基質(zhì)按設(shè)計(jì)好比例配好，平鋪于干凈的地面上，用0.5%的高錳酸鉀溶液對(duì)基質(zhì)進(jìn)行消毒，并把準(zhǔn)備好的各基質(zhì)填人苗床，高約15 cm，澆透水，用耙子將苗床耙平。

1.2.2 插穗的處理

挑選生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，剪成長(zhǎng)約20 cm至少帶2個(gè)節(jié)的插穗，形態(tài)學(xué)下端的切口斜剪，上端的切口平剪，用0.3%的高錳酸鉀溶液消毒10 min，取出放置陰涼處，待插穗表面的水分干燥后，用不同濃度(50，100，150，200 mg/L)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(IAA、IBA、NAA、ABT 1)溶液浸泡不同的時(shí)間(1，2，3，4 h)，按5 cm×5 cm的株行距插入各苗床，扦插深度為10 cm，插后用手壓實(shí)，使基部與基質(zhì)密切接觸，然后澆透水，再蓋上不同透光率(15%、25%、50%、100%)的遮蔭網(wǎng)。試驗(yàn)采用L16(45)正交設(shè)計(jì)(表1)，設(shè)置植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(A)、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度(B)、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理時(shí)間(C)、扦插基質(zhì)(D)和遮陽網(wǎng)透光率(E)共5個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)4個(gè)水平，共16個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20株插穗。

處理處理組合生根率(%)平均根長(zhǎng)(cm)平均生根數(shù)(條)生根質(zhì)量(Q值)1A1B1C1D1E163．33±5．77cdBC1．56±0．36bcB3．04±0．71bAB32．82±3．03cBC2A1B2C2D2E283．33±2．89abAB1．03±0．16cB4．39±1．11abAB43．02±1．32abAB3A1B3C3D3E370．00±5．00bcBC1．50±0．32bcB4．21±1．53abAB36．43±2．41bcBC4A1B4C4D4E481．67±7．64abAB1．79±0．32bA2．72±1．05bB41．96±4．01abAB5A2B1C2D3E488．33±7．64aA1．58±0．13bcB3．66±0．46abAB45．48±3．87aA6A2B2C1D4E360．00±5．00cdC1．93±0．26abAB4．26±0．77abAB31．55±2．30cC7A2B3C4D1E243．33±5．77eD1．37±0．26bcB4．74±0．63aA23．19±2．93dD8A2B4C3D2E165．00±5．00cBC1．01±0．39cB2．27±0．87bB33．32±2．71cBC9A3B1C3D4E273．33±7．64bcB2．13±0．29abAB2．20±0．46bB37．75±3．96bcBC10A3B2C4D3E156．67±7．64cdC1．26±0．16bcB3．47±0．93abAB29．49±3．68cdCD11A3B3C1D2E475．00±5．00bB1．18±0．38cB2．19±0．38bB38．34±2．33bB12A3B4C2D1E381．67±2．89abAB1．40±0．30bcB2．12±0．70bB41．72±1．55abAB13A4B1C4D2E355．00±5．00dCD2．43±0．36aA3．36±1．29abAB28．95±2．80cdCD14A4B2C3D1E485．00±5．00aAB1．88±0．17abAB2．06±0．55bB43．48±2．61aAB15A4B3C2D4E148．33±7．64deCD1．89±0．84abAB1．67±0．58bB25．06±3．76dCD16A4B4C1D3E263．33±2．89cdBC1．48±0．40bcB2．78±0．21bB32．73±1．52cBC

注：同列不同小寫字母表示在0.05水平上存在顯著差異，大寫字母表示在0.01水平上存在顯著差異。下同。

表1 苗藥追風(fēng)傘扦插試驗(yàn)正交因素水平表L16(45)

水平植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(A)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度(B)mg/L植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理時(shí)間(C)h扦插基質(zhì)(D)遮陽網(wǎng)透光率(E)%1IBA501壤土152NAA1002蛭石+壤土(1∶1)253IAA1503珍珠巖+壤土(1∶1)504ABT12004泥炭土+壤土(1∶1)100

1.2.3 插后管理

實(shí)驗(yàn)設(shè)在貴陽中醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)地進(jìn)行，根據(jù)天氣狀況每天澆水2～3次，以保持床面土壤及空氣濕度，及時(shí)除草。45 d后統(tǒng)計(jì)生根率、根數(shù)、根長(zhǎng)，綜合評(píng)價(jià)扦插苗的生根質(zhì)量(Q值)[11]，生根質(zhì)量(Q值)作為最終判定處理優(yōu)越的重要指標(biāo)之一。

Q值=(生根率×50%)+(平均生根數(shù)×25%)+(平均根長(zhǎng)×25%)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2007軟件對(duì)數(shù)據(jù)求平均值，采用SPSS Statistics 16.0分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行極差和方差分析以及差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苗藥追風(fēng)傘扦插實(shí)驗(yàn)結(jié)果的方差分析

由表2可知，因素A、B、C對(duì)生根率的影響有顯著性差異，因素E的影響極顯著。5個(gè)因素均對(duì)生根數(shù)和根長(zhǎng)沒有顯著性差異。因素A、B、C對(duì)生根質(zhì)量的影響有顯著性差異，因素E的影響極顯著。

表2 苗藥追風(fēng)傘扦插正交試驗(yàn)方差分析表

ABCDE生根率10．34?12．41?17．88?33．04??生根數(shù)4．534．845．282．60根長(zhǎng)4．061．741．192．21生根質(zhì)量(Q值)19．38?14．20?24．24?43．66??

注：“**”表示差異極顯著，“*”表示差異顯著，空白表示因該因素離差平方和最小，以此因素作為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析。

2.2 不同處理組合對(duì)苗藥追風(fēng)傘扦插的影響

正交試驗(yàn)結(jié)果見表3，16個(gè)處理組合的生根質(zhì)量(Q值)大小為5(45.48)>14(43.48)> 2(43.02)>4(41.96)>12(41.72)>11(38.34)>9(37.75)>3(36.43)>8(33.32)>1(32.82)>16(32.73)>6(31.55)>10(29.49)>13(28.95)>15(25.06)>7(23.19)。處理組合5的生根質(zhì)量最好，即處理組合A2B1C2D3E4，50 mg/L的奈乙酸(NAA)，處理插穗2 h后，扦插到珍珠巖+壤土(1∶1)的基質(zhì)中，不蓋遮陽網(wǎng)，可取得較好的效果。其中處理組合5、14、2、4、12的生根質(zhì)量都大于40，且無顯著差異，在生產(chǎn)上均可考慮選擇。

處理因素水平生根率(%)平均根長(zhǎng)(cm)平均生根數(shù)/條生根質(zhì)量(Q值)AA174．42±1．61aA1．42±0．23bA3．70±0．51aA38．56±0．76aAA266．67±5．64abAB1．58±0．10abA3．58±0．78aAB33．39±1．50bBA366．25±4．51abAB1．49±0．11abA2．46±0．02bB36．83±2．61aABA461．25±1．25bB1．92±0．42aA2．47±0．09bB32．56±0．85bABBB170．00±2．17aA1．80±0．28aA3．13±0．30abA36．25±1．16aAB271．25±2．17aA1．59±0．19aA3．63±0．34aA36．89±1．07aAB359．17±1．91bB1．49±0．31aA3．20±0．31abA30．76±0．89bBB472．92±2．60aA1．42±0．31aA2．47±0．63bA37．44±1．54aACC165．42±2．89bAB1．47±0．20aA3．00±0．17bAB33．86±1．42bABC275．42±4．02aA1．59±0．32aA3．04±0．16abAB38．82±1．93aAC373．33±3．15aA1．63±0．17aA2．69±0．21bB37．75±1．57aAC459．17±4．39bB1．72±0．25aA3．54±0．38aA30．90±2．34bBDD168．33±1．44aA1．47±0．22bA2．87±0．26aA35．30±0．67aAD269．58±1．44aA1．53±0．23abA3．33±0．68aA35．91±0．62aAD369．58±4．02aA1．46±0．13bA3．50±0．52aA36．03±1．92aAD465．83±1．91aA1．94±0．27aA2．71±0．55aA34．08±1．13aAEE158．33±3．82cC1．40±0．26bA2．80±0．49abA31．28±2．42bBE265．83±1．91bB1．60±0．06abA3．57±0．16aA34．17±1．02bBE366．67±1．91bB1．82±0．26aA3．49±0．57aA34．67±1．12bBE482．50±2．50aA1．61±0．12abA2．66±0．21bA42．32±1．29aA

表4 苗藥追風(fēng)傘扦插實(shí)驗(yàn)極差分析表

指標(biāo)ABCDE生根率(%)13．1713．7516．083．7524．17平均根長(zhǎng)(cm)0．500．380．250．480．42平均生根數(shù)1．241．160．850．790．91生根質(zhì)量(Q值)66．687．921．8511．04

2.3 追風(fēng)傘扦插實(shí)驗(yàn)結(jié)果極差分析

極差的大小反映了各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響的主次。從表4可以看出，各因素對(duì)生根率影響的主次順序是：E>C>B>A>D；各因素對(duì)根長(zhǎng)影響的主次順序是：A>D>E>B>C；各因素對(duì)生根數(shù)影響的主次順序是：A>B>E>C>D；各因素對(duì)生根質(zhì)量影響的主次順序是：E>C> B>A>D。由此可見，因素E，A對(duì)扦插苗的影響相對(duì)較大，試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)考慮。

2.4 各試驗(yàn)因素對(duì)苗藥追風(fēng)傘扦插的影響

對(duì)各因數(shù)水平處理進(jìn)行方差分析，由表5可以看出，各因素的4水平對(duì)生根率的大小順序是：A1>A2>A3>A4，B4>B2>B1>B3，C2>C3>C1>C4，D2=D3>D1>D4，E4>E3>E2>E1；各因素的4水平對(duì)根長(zhǎng)的大小順序是：A4>A2>A3>A1，B1>B2>B3>B4,C4>C3>C2>C1,D4>D2>D1>D2,E3> E4>E2>E1；各因素的4水平對(duì)生根數(shù)的大小順序是：A1>A2>A4>A3，B2>B3>B1>B4，C4>C2>C1>C3，D3>D2>D1>D4，E2>E3>E1>E4；各因素的4水平對(duì)生根質(zhì)量影響的大小順序是：A1>A3>A2>A4，B4>B2>B1>B3，C2>C3>C1>C4，D3>D2>D1>D4,E4>E3>E2>E1。

3 討 論

3.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類對(duì)苗藥追風(fēng)傘生根的影響

植物扦插繁殖不定根的發(fā)生與發(fā)育是扦插成功的關(guān)鍵。插條根的形成依賴于多種因子，其中植物激素,尤其是生長(zhǎng)素起關(guān)鍵作用[12]，對(duì)不定根的形成起促進(jìn)作用。通過生長(zhǎng)素的刺激可有效提高插穗中某些酶的活性，促進(jìn)淀粉和蛋白質(zhì)的水解，降低原生質(zhì)的黏性，增加原生質(zhì)膜的透性，細(xì)胞壁松弛，細(xì)胞滲透吸水能力增強(qiáng)，為細(xì)胞的分裂和分化提供有利條件，促使組織的再生能力增強(qiáng)。生長(zhǎng)素在插穗內(nèi)并不是參與有機(jī)物的重新建成，只是促使插條下段變成吸收養(yǎng)分中心，起著促進(jìn)物質(zhì)交換，調(diào)配插條內(nèi)養(yǎng)分的作用。此外，生長(zhǎng)素可能促進(jìn)基因的表達(dá)，提高mRNA的合成，從而促進(jìn)多種酶的合成，誘導(dǎo)根原始體的發(fā)端[13-14]。本研究中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(A)對(duì)追風(fēng)傘扦插苗的生根質(zhì)量(Q值)有顯著性影響，而且以IBA對(duì)生根質(zhì)量的影響最大，而且遠(yuǎn)高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)苗藥追風(fēng)傘的影響，有研究表明，IBA可使插穗內(nèi)POD活性和酚類物質(zhì)量降低，促進(jìn)插穗生根，而POD活性的下降保證了根原基和不定根形成所需的IAA[15-16]。這似乎凸顯IBA在未來苗藥追風(fēng)傘扦插育苗上的具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，值得進(jìn)一步研究。

3.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理時(shí)間對(duì)苗藥追風(fēng)傘生根影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理時(shí)間對(duì)苗藥追風(fēng)傘的生根質(zhì)量影響較大，而且插穗在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理2 h時(shí)生根質(zhì)量最好，浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短主要改變插條中外源植物激素的含量，因此低濃度需增加浸泡時(shí)間，而高濃度則可縮短浸泡時(shí)間[17]，從生產(chǎn)來講，更短的浸泡時(shí)間有利于提高扦插的工作效率，因此對(duì)于苗藥追風(fēng)傘未來大田扦插育苗，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理時(shí)間應(yīng)該考慮在2 h以內(nèi)。

3.3 遮陽網(wǎng)透光率對(duì)苗藥追風(fēng)傘生根影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同透光率遮陽網(wǎng)對(duì)苗藥追風(fēng)傘扦插苗生根質(zhì)量(Q值)的影響最大，而且影響極顯著，表明遮陽網(wǎng)的透光率對(duì)苗藥追風(fēng)傘扦插效果影響非常大。江淑萍、吐爾遜拜·杜曼等的研究表明，遮蓋適當(dāng)透光率的遮陽網(wǎng)可以提高浦城丹桂、黑加侖插穗的生根率[18-19]，因?yàn)橥ㄟ^遮陰，可以有效避免正午強(qiáng)光下陽光對(duì)插穗的灼燒，減少陽光直射情況下土溫升高過快，減少水分散失，從而提高插穗的生根率。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果是透光率為100%時(shí)扦插苗的生根質(zhì)量最好，插床蓋上遮陽網(wǎng)反而降低追風(fēng)傘扦插苗生根質(zhì)量。這是因?yàn)檫M(jìn)行本實(shí)驗(yàn)期間，正逢陰雨天氣，白天光照強(qiáng)度比其他時(shí)期要小，晝夜溫差較大，遮陽網(wǎng)透光率越小，插穗接受的光照強(qiáng)度就越低，江淑萍[18]、徐利[20]等實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，透光率太低會(huì)降低浦城丹桂、狐臭柴插穗的生根率，這些似乎暗示在扦插育苗時(shí)，過低的光照強(qiáng)度會(huì)降低插穗的生根質(zhì)量，值得進(jìn)一步研究。

3.4 扦插基質(zhì)對(duì)苗藥追風(fēng)傘生根影響

基質(zhì)主要作用是為插穗生根提供適宜的環(huán)境條件，其中保水性、透氣性和保溫性對(duì)插穗生根尤為重要。珍珠巖和泥炭土常用于扦插實(shí)驗(yàn)中。研究結(jié)果表明，基質(zhì)珍珠巖+壤土(1∶1)和泥炭土+壤土(1∶1)對(duì)苗藥追風(fēng)傘的生根影響都較大，其中以扦插在珍珠巖+壤土(1∶1)的基質(zhì)中生根質(zhì)量較好，壤土富含營(yíng)養(yǎng)，但透氣和保水性能較差，而珍珠巖同時(shí)具有較強(qiáng)的保水透氣性，保溫性較好，但所含的養(yǎng)分較少，兩者的結(jié)合正好使苗藥追風(fēng)傘有較好的生根質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王波等[21]對(duì)石楠藤扦插結(jié)果基本一致。但以泥炭土+壤土(1∶1)對(duì)扦插苗根長(zhǎng)最大，這是由于泥炭土含有大量的半分解有機(jī)物，組合基質(zhì)含有較多營(yíng)養(yǎng)，可以促進(jìn)苗藥追風(fēng)傘根部發(fā)育。同時(shí)泥炭土還具有較強(qiáng)透氣透水性，而且質(zhì)地非常軟，這樣有利于根的生長(zhǎng)，這與肖慎元[22]對(duì)錐栗扦插結(jié)果基本一致。本研究進(jìn)一步論證了珍珠巖和泥炭土在扦插繁殖中重要的作用。

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