底物中鈣賦存形態(tài)對(duì)太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)幼蟲附著的誘導(dǎo)效應(yīng)*

范瑞良 晁 敏 任國平 全為民①

(1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所 農(nóng)業(yè)部東海及遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200090;2. 上海海洋大學(xué)海洋科學(xué)學(xué)院 上海 201306; 3. 山東省萊州市國燕水產(chǎn)育苗場 萊州 261400)

牡蠣礁是一種特殊的海洋生境, 具有凈化水體(全為民等, 2007)、維持生物多樣性(全為民等, 2012)、提供魚類棲息地(Coen et al, 1999; Quan et al, 2009,2012, 2013)、防止海岸線侵蝕(Brumbaugh et al, 2009)和碳匯(沈新強(qiáng)等, 2011)等生態(tài)功能。由于過度捕撈、環(huán)境污染和病害浸染等原因, 過去100多年來全球牡蠣礁分布面積約下降85% (Jackson et al, 2001; Beck et al, 2011)。為恢復(fù)牡蠣礁生境及其提供的生態(tài)服務(wù)價(jià)值, 自從20世紀(jì)90年代開始, 美國在大西洋及墨西哥灣沿岸陸續(xù)開展了一系列的牡蠣礁恢復(fù)項(xiàng)目(Mann et al, 2007; Brumbaugh et al, 2009)。實(shí)踐證明,人工恢復(fù)的牡蠣礁發(fā)揮了自然牡蠣礁同等的生態(tài)功能(Luckenbach et al, 2003; Rodney et al, 2006; Schulte et al, 2009)。牡蠣是生長于硬底物上的雙殼類軟體動(dòng)物, 建造適合于牡蠣幼蟲附著的底物(礁體)是牡蠣礁恢復(fù)的重點(diǎn)。國內(nèi)外牡蠣礁恢復(fù)項(xiàng)目中最常用的底物材料是牡蠣殼, 但由于牡蠣殼數(shù)量不足, 篩選適合于牡蠣幼蟲附著生長的替代底物成為牡蠣礁恢復(fù)中迫切需要解決的關(guān)鍵技術(shù)之一(Brumbaugh et al, 2009)。

底物的化學(xué)元素組成顯著影響著牡蠣幼蟲的附著及變態(tài)發(fā)育, 特別是底物中的鈣元素是牡蠣幼蟲附著的主要誘因之一, 如自然的含鈣底物(石灰石、貽貝殼、蛤蜊殼和石膏)上附著牡蠣稚貝數(shù)量顯著高于其它底物(如砂石、輪胎、玻璃纖維和不銹鋼等)。如Tamburri等(2008)發(fā)現(xiàn): 相對(duì)于人工底物(玻璃纖維、PVC 和不銹鋼), 近江牡蠣(Crassostrea ariakensis)的幼蟲偏好附著于自然底物(貝殼)上。Soniat等(2005)通過野外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn): 在相同的環(huán)境條件下, 石灰石(主要化學(xué)成分為CaCO3)上附著的牡蠣稚貝數(shù)量顯著高于砂石(主要化學(xué)成分為SiO2)。Haywood等(1995)發(fā)現(xiàn): 石灰石、文蛤殼和石膏(主要化學(xué)成分為CaSO4)等底物對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效果顯著高于碎石砂礫、廢棄路基碎料和砂石。然而至目前為止, 國際上很少有研究比較不同鈣賦存形態(tài)對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效應(yīng)。

基上以往的研究結(jié)果, 本研究提出如下假設(shè): 碳酸鈣對(duì)于牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)能力大于硫酸鈣和有機(jī)鈣。據(jù)此, 作者通過設(shè)計(jì)室內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)3種鈣賦存形態(tài)(硫酸鈣、有機(jī)鈣和碳酸鈣)實(shí)驗(yàn)底物上牡蠣幼蟲附著效果, 以此探明牡蠣幼蟲對(duì)不同賦存形態(tài)鈣的喜好。本研究對(duì)于牡蠣礁恢復(fù)中替代底物材料的篩選、以及牡蠣養(yǎng)殖均具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)于2015年5月24日—7月2日在山東省萊州市國燕水產(chǎn)育苗場(山東萊州虎頭崖鎮(zhèn)西原村)內(nèi)完成。實(shí)驗(yàn)生物為太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)的幼蟲, 自受精卵開始培育 20d至具足面盤幼蟲(pediveliger)階段時(shí), 將實(shí)驗(yàn)底物置于附苗池中開展附著實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)采用三因素(海水中牡蠣幼蟲豐度、實(shí)驗(yàn)底物中鈣賦存形態(tài)、實(shí)驗(yàn)底物中鈣含量)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì), 實(shí)驗(yàn)設(shè)定 2個(gè)牡蠣幼蟲豐度處理組(1和7—8ind/mL), 2個(gè)鈣含量處理組和3個(gè)鈣賦存形態(tài)處理組(表 1), 各種底物類型互為對(duì)照, 每個(gè)處理組設(shè)置10個(gè)重復(fù), 總計(jì)12個(gè)處理組合和120個(gè)實(shí)驗(yàn)底物。

實(shí)驗(yàn)底物為鈣材料、河沙和水泥混合的混凝土模塊(10cm長×10cm寬×3cm厚) 。其中, 硫酸鈣為石膏粉, 有機(jī)鈣為牛骨粉, 碳酸鈣為鈣粉。每種原料經(jīng)粉碎后過80目網(wǎng)篩后備用。

表1 實(shí)驗(yàn)底物組成成分Tab.1 The chemical compositions of the experimental substrates

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

在育苗車間準(zhǔn)備高低幼蟲豐度附苗池各1個(gè), 每個(gè)附苗池6根竹竿, 隨機(jī)選取 10個(gè)實(shí)驗(yàn)底物吊掛于竹桿上, 使實(shí)驗(yàn)底物位于水面下 50cm處, 相鄰實(shí)驗(yàn)底物相距 15cm, 相鄰竹桿間相距 20cm。實(shí)驗(yàn)期間,實(shí)驗(yàn)池中的水溫約為 24℃、海水鹽度約為 27, 每天于1:00, 5:00, 9:00, 13:00, 17:00, 21:00各投餌1次, 投餌量由育苗場管理人員根據(jù)幼蟲生長狀況而定, 餌料為金藻, 每天于7:00和19:00各換水1次, 換水量為附苗池總?cè)萘康?1/2, 每天光照時(shí)間約為 8h, 強(qiáng)度為普通日光燈的照明強(qiáng)度, 幼蟲附著期間充氣培養(yǎng)等條件均與育苗車間保持一致。

3d后, 將兩個(gè)附苗池中實(shí)驗(yàn)底物移置養(yǎng)殖池中暫養(yǎng), 直至附著稚貝清晰可見為止(約半個(gè)月), 用單反相機(jī)對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)底物表面進(jìn)行拍照, 在電腦上計(jì)數(shù), 隨機(jī)選取20個(gè)附著稚貝, 用Photoshop7.0軟件測量殼高。自牡蠣受精卵至實(shí)驗(yàn)結(jié)束共持續(xù) 40d左右,實(shí)驗(yàn)期間, 每天不定期觀察幼蟲生長狀況?？紤]到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性, 僅統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)底物正面附著稚貝的密度和殼高來顯示牡蠣幼蟲的附著效果。

1.4 數(shù)據(jù)處理

將每塊實(shí)驗(yàn)底物上附著數(shù)量換算成稚貝的密度,統(tǒng)計(jì)不同實(shí)驗(yàn)底物上附著牡蠣稚貝的密度(個(gè)/cm2)和平均殼高(mm)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)過以10為底的對(duì)數(shù)函數(shù)處理后, 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行3因子方差分析, 使用LSD進(jìn)行后檢驗(yàn),P＜0.05時(shí)差異顯著, 采用SigmaPlot 10.0軟件繪制折線圖。

2 結(jié)果

2.1 三因子對(duì)附著牡蠣稚貝密度和殼高的影響

3因子方差分析結(jié)果表明(表2, 表3): 3因子交互作用、2因子交互作用和底物鈣含量對(duì)附著稚貝密度和殼高的影響均不顯著(表2, 表3,P＞0.05), 而底物鈣形態(tài)和海水中牡蠣幼蟲豐度均顯著影響著實(shí)驗(yàn)底物上附著牡蠣稚貝的密度和殼高(表2, 表3,P＜0.05)。

2.2 鈣賦存形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)附著稚貝密度的影響

鈣賦存形態(tài)和幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物附著稚貝密度的影響如圖1所示, 在相同的浮游牡蠣幼蟲豐度情況下, 有機(jī)鈣底物對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效果明顯好于碳酸鈣與硫酸鈣底物(圖1,P＜0.05), 后兩者間差異不顯著(圖 1,P＞0.05)。

表2 實(shí)驗(yàn)底物上附著牡蠣稚貝密度的3因子方差分析結(jié)果Tab.2 3-way ANOVA results of density of oyster spat settled on substrates

表3 實(shí)驗(yàn)底物上附著牡蠣稚貝殼高的3因子方差分析結(jié)果Tab.3 3-way ANOVA results of shell height of oyster spat settled on substrates

在低鈣含量組中, 高浮游幼蟲豐度下實(shí)驗(yàn)底物上牡蠣稚貝密度均顯著高于低幼蟲豐度處理組(表 4,圖1a,P＜0.05), 但在高鈣含量中, 兩個(gè)幼蟲豐度處理組間差異不顯著(表5, 圖1b,P＞0.05)。

表4 低鈣含量下, 鈣賦存形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物附著稚貝密度的影響Tab.4 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat density in substrate under low calcium concentration

表5 高鈣含量下, 鈣賦存形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物附著稚貝密度的影響Tab.5 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat density in substrate under high calcium concentration

2.3 鈣賦存形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)附著稚貝殼高的影響

圖1 低鈣(a)和高鈣(b)含量下, 鈣賦存形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物上附著稚貝密度的影響(n=10)Fig.1 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat density in the experimental substrates under low (a) and high (b)calcium concentrations (n=10)

鈣賦存形態(tài)和幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物上附著稚貝殼高的影響如圖2所示。其結(jié)果與密度恰好相反: 在低鈣含量下, 碳酸鈣與硫酸鈣實(shí)驗(yàn)底物上附著稚貝的殼高相似, 沒有顯著性差異(圖 2a,P＞0.05), 然而,兩個(gè)處理組稚貝的平均殼高均顯著大于有機(jī)鈣實(shí)驗(yàn)底物(圖 2a,P＜0.05), 且鈣形態(tài)和幼蟲豐度之間呈現(xiàn)顯著的互作效應(yīng)(表 6,F=3.286,P=0.030); 在高鈣含量下, 不同鈣形態(tài)底物之間稚貝殼高沒有顯著性差異(表 7, 圖 2b,P＞0.05)。

在相同鈣形態(tài)底物中, 高浮游幼蟲豐度實(shí)驗(yàn)組中附著稚貝的平均殼高均顯著小于低幼蟲豐度處理組(表 6, 表 7, 圖 2,P＜0.05)。

圖2 低鈣(a)和高鈣(b)含量下, 鈣形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物上附著稚貝殼高的影響Fig2 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat shell height under low (a) and high (b) calcium concentrations

表6 低鈣含量下, 鈣形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物附著稚貝殼高的影響Tab.6 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat shell height under low calcium concentration

表7 高鈣含量下, 鈣形態(tài)及浮游幼蟲豐度對(duì)實(shí)驗(yàn)底物附著稚貝殼高的影響Tab.7 Effect of calcium form and planktic larvae abundance on spat shell height under high calcium concentration

3 討論

3.1 鈣含量對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效應(yīng)

牡蠣幼蟲通常偏好附著于含鈣的底物上, 本研究首次發(fā)現(xiàn), 兩種鈣含量(高鈣和低鈣含量)實(shí)驗(yàn)底物中附著牡蠣稚貝的密度和殼高均沒有顯著性差異。相當(dāng)多的研究也發(fā)現(xiàn)(Soniatet al, 1991; Brumbaugh,2000; Greeneet al, 2005): 牡蠣殼、其它貝殼(文蛤殼)和石灰石等底物鈣含量不同, 但它們對(duì)牡蠣幼蟲具有相似的誘導(dǎo)能力。底物中鈣含量與其對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)能力之間的關(guān)系仍有待進(jìn)一步研究。國內(nèi)以前的研究主要探討海水中鈣濃度對(duì)貝類幼蟲附著的影響。祁劍飛等(2013)發(fā)現(xiàn)海水中10—25mmol/L Ca2+濃度中, 濃度為20mmol/L時(shí), Ca2+對(duì)葡萄牙牡蠣幼蟲附著變態(tài)的誘導(dǎo)效果最好。劉文彪(2006)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明5—25mmol/L Ca2+濃度的海水中, Ca2+濃度為20mmol/L時(shí), 西施舌幼蟲附著率和變態(tài)率最高。基于以上結(jié)果, 我們推斷底物中也存在一個(gè)最適的鈣含量, 該濃度下的底物對(duì)牡蠣幼蟲的誘導(dǎo)能力最大。

3.2 鈣賦存形態(tài)對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效應(yīng)

本研究發(fā)現(xiàn), 有機(jī)鈣實(shí)驗(yàn)底物上附著牡蠣稚貝的密度顯著高于硫酸鈣與碳酸鈣實(shí)驗(yàn)底物, 表明有機(jī)鈣對(duì)牡蠣幼蟲的誘導(dǎo)效應(yīng)顯著大于兩種無機(jī)鈣底物。有關(guān)其機(jī)制可能有兩種解釋: 一種為直接誘導(dǎo)效應(yīng), 即有機(jī)鈣底物能直接促使牡蠣幼蟲的附著; 另一種為間接誘導(dǎo)效應(yīng), 即有機(jī)鈣底物更有利于底物上生物膜(biofilm)的發(fā)育, 而生物膜上的細(xì)菌群落所釋放的有機(jī)化合物可加快牡蠣幼蟲的附著(Lamet al,2005; 柯才煥等, 2006; 楊金龍等, 2012, 2013)。目前,很難通過實(shí)驗(yàn)區(qū)分這兩種機(jī)制的誘導(dǎo)效應(yīng)。本研究牡蠣幼蟲附著的實(shí)驗(yàn)周期僅為3天, 而3天時(shí)間內(nèi)生物膜僅處于初步發(fā)育階段, 距離其發(fā)育成為成熟的生物膜仍有待時(shí)日, 因此我們推斷: 有機(jī)鈣主要通過直接效應(yīng)(底物化學(xué)元素組成)誘導(dǎo)牡蠣幼蟲的附著。

碳酸鈣與硫酸鈣對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效果基本相似, 與 Haywood等(1995)和 Soniat等(1991)室內(nèi)實(shí)驗(yàn)中石灰石和石膏兩種實(shí)驗(yàn)底物對(duì)牡蠣幼蟲附著誘導(dǎo)效應(yīng)的結(jié)果一致, 卻與其野外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不同,這可能與室內(nèi)實(shí)驗(yàn)可控性強(qiáng), 而野外海域?qū)嶒?yàn)的鹽度、溫度等實(shí)驗(yàn)條件的不可控性有關(guān)。

3.3 幼蟲豐度對(duì)牡蠣稚貝附著量的影響

高霄龍等(2016)發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖豐度為8ind/mL的毛蚶幼蟲的附著密度顯著高于豐度為2ind/mL的處理組。Brumbaugh(2000)發(fā)現(xiàn)野外實(shí)驗(yàn)中拉菲特河(牡蠣豐度為 328ind/m2)的附著稚貝密度(53ind/m2)高于伊麗莎白河(牡蠣豐度為 149ind/m2)附著稚貝密度(15ind/m2), 這是由于高豐度牡蠣可以提高其受精率,增加附著牡蠣幼蟲的豐度, 從而提高附著稚貝密度,與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。因此, 海水中牡蠣幼蟲豐度顯著影響著底物上附著牡蠣稚貝的密度、甚至也影響著牡蠣種群的建立及礁體恢復(fù)的成功。

3.4 牡蠣稚貝附著量與其殼高之間的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn), 附著牡蠣稚貝的密度與其平均殼高之間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。杜美榮(2009)發(fā)現(xiàn)底棲硅藻處理組附著基上櫛孔扇貝的附著效果優(yōu)于常規(guī)方法處理組, 但稚貝殼長小于常規(guī)方法處理組, 因?yàn)殡S著稚貝附著密度的增大, 食物、空間競爭壓力增大, 導(dǎo)致個(gè)體生長發(fā)育緩慢。陳璐等(2011)對(duì)密鱗牡蠣人工繁育實(shí)驗(yàn)中3ind/mL和4ind/mL組附著基上稚貝的生長速度明顯慢于1ind/mL和2ind/mL組的研究結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。因此, 在實(shí)際的牡蠣礁恢復(fù)和牡蠣養(yǎng)殖當(dāng)中, 需要掌握適宜的附苗量或稚貝密度, 過高的附著量會(huì)導(dǎo)致較高的死亡率, 最終會(huì)影響牡蠣礁的恢復(fù)效果和牡蠣養(yǎng)殖產(chǎn)量。

4 結(jié)論與意義

本研究結(jié)果表明, 鈣賦存形態(tài)和海水中牡蠣幼蟲豐度顯著影響實(shí)驗(yàn)底物上牡蠣稚貝附著量, 其中有機(jī)鈣對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)效應(yīng)明顯好于碳酸鈣和硫酸鈣底物; 而鈣含量對(duì)牡蠣幼蟲的附著沒有顯著性影響。研究結(jié)果可為牡蠣礁恢復(fù)中的替代底物篩選以及牡蠣養(yǎng)殖提供理論支撐。未來需要進(jìn)一步從微生物膜細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)和特征衍生物化合物的角度探討含鈣底物對(duì)牡蠣幼蟲附著的誘導(dǎo)機(jī)制。

致謝 感謝育苗場全體工作人員在實(shí)驗(yàn)期間提供的幫助, 楊杰青、唐盟等在論文寫作中給予的指導(dǎo),謹(jǐn)致謝忱。

全為民, 安傳光, 馬春艷等, 2012. 江蘇小廟洪牡蠣礁大型底棲動(dòng)物多樣性及群落結(jié)構(gòu). 海洋與湖沼, 43(5): 992—1000

全為民, 張錦平, 平仙隱等, 2007. 巨牡蠣對(duì)長江口環(huán)境的凈化功能及其生態(tài)服務(wù)價(jià)值. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào), 18(4):871—876

劉文彪, 2006. 西施舌幼蟲附著變態(tài)影響因子及化學(xué)誘導(dǎo). 福州: 福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文

祁劍飛, 曾志南, 宋傳福等, 2013. 幾種陽離子對(duì)葡萄牙牡蠣幼蟲附著和變態(tài)的影響. 福建水產(chǎn), 35(1): 27—31

杜美榮, 2009. 櫛孔扇貝春苗繁育與扇貝幼蟲高效附著技術(shù)的初步研究. 青島: 中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文

楊金龍, 王 沖, 顧忠旗等, 2012. 微生物膜對(duì)海洋無脊椎動(dòng)物幼體附著變態(tài)的影響研究. 海洋科學(xué), 36(8): 116—121

楊金龍, 慎佩晶, 王 沖等, 2013. 微生物膜對(duì)厚殼貽貝稚貝附著的影響. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 37(6): 904—909

沈新強(qiáng), 全為民, 袁 騏, 2011. 長江口牡蠣礁恢復(fù)及碳匯潛力評(píng)估. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 30(10): 2119—2123

陳 璐, 李 琪, 王慶志等, 2011. 密鱗牡蠣的人工繁育. 中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 41(3): 43—46, 60

柯才煥, 馮丹青, 2006. 海洋底棲動(dòng)物浮游幼體附著和變態(tài)的研究. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 45(S2): 77—82

高霄龍, 李 莉, 孔令鋒等, 2016. 養(yǎng)殖密度對(duì)毛蚶幼蟲生長及存活的影響. 中國水產(chǎn)科學(xué), 23(1): 233—240

Beck M W, Brumbaugh R D, Airoldi L et al, 2011. Oyster reefs at risk and recommendations for conservation, restoration,and management. BioScience, 61(2): 107—116

Brumbaugh R D, 2000. An analysis of limestone marl as a settlement substrate for oysters in Chesapeake Bay. Report to the Virginia Marine Resources Commission. Norfolk,Virginia: Chesapeake Bay Foundation

Brumbaugh R D, Coen L D, 2009. Contemporary approaches for small-scale oyster reef restoration to address substrate versus recruitment limitation: a review and comments relevant for the Olympia oyster, Ostrea lurida Carpenter 1864. J Shellfish Res, 28(1): 147—161

Coen L D, Luckenbach M W, Breitberg D L, 1999. The role of oyster reefs as essential fish habitat: a review of current knowledge and some new perspectives. Am Fish Soc Sym,22: 438—454

Greene J K, Grizzle R E, 2005. Oyster (Crassostrea virginica Gmelin) restoration studies in the Great Bay estuary, New Hampshire. Final Report for NOAA award number:NA03NOS4200060

Haywood III E L, Soniat T M, Broadhurst III R C, 1995.Alternatives to Clam and oyster shell as cultch for eastern oysters. In: Luckenbach M W, Mann R, Wesson J eds.Oyster Reef Habitat Restoration: A Synopsis and synthesis of Approaches. Gloucester Point, VA: VIMS Press,295—304

Jackson J B C, Kirby M X, Berger W H et al, 2001. Historical overfishing and the recent collapse of coastal ecosystems.Science, 293(5530): 629—637

Luckenbach M W, Coen L D, 2003. Oyster reef habitat restoration: a review of restoration approaches and an agenda for the future. J Shellfish Res, 22(1): 341

Lam C, Harder T, Qian P Y, 2005. Induction of larval settlement in the polychaete Hydroides elegans by extracellular polymers of benthic diatoms. Mar Ecol Prog Ser, 286:145—154

Mann R, Powell E N, 2007. Why oyster restoration goals in the Chesapeake Bay are not and probably cannot be achieved. J Shellfish Res, 26(4): 905—917

Quan W M, Humphries A T, Shen X Q et al, 2012. Oyster and associated benthic macrofaunal development on a created intertidal oyster (Crassostrea ariakensis) reef in the Yangtze River estuary, China. J Shellfish Res, 31(3): 599—610

Quan W M, Zheng L, Li B J et al, 2013. Habitat values for artificial oyster (Crassostrea ariakensis) reefs compared with natural shallow-water habitats in Changjiang River estuary. Chin J Oceanol Limnol, 31(5): 957—969

Quan W M, Zhu J X, Ni Y et al, 2009. Faunal utilization of constructed intertidal oyster (Crassostrea rivularis) reef in the Yangtze River estuary, China. Ecol Eng, 35(10): 1466—1475

Rodney W S, Paynter K T, 2006. Comparisons of macrofaunal assemblages on restored and non-restored oyster reefs in mesohaline regions of Chesapeake Bay in Maryland. J Exp Mar Biol Ecol, 335(1): 39—51

Schulte D M, Burke R P, Lipcius R N, 2009. Unprecedented restoration of a native oyster metapopulation. Science,325(5944): 1124—1128

Soniat T M, Broadhurst R C, Haywood III E L, 1991.Alternatives to clamshell as cultch for oysters, and the use of gypsum for the production of cultchless oysters. J Shellfish Res, 10: 405—410

Soniat T M, Burton G M, 2005. A comparison of the effectiveness of sandstone and limestone as cultch for oysters, Crassostrea virginica. J Shellfish Res, 24(2):483—485

Tamburri M N, Luckenbach M W, Breitburg D L et al, 2008.Settlement of Crassostrea ariakensis larvae: effects of substrate, biofilms, sediment and adult chemical cues. J Shellfish Res, 27(3): 601—608