褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)受精卵以及仔魚期氨基酸與脂肪酸變化研究*

郭春陽 林少珍 鞏建華 邱成功 趙 淳 徐善良①

(1. 寧波大學(xué)海洋學(xué)院 寧波 315211; 2. 浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所 溫州 325000)

魚類胚胎和仔魚的質(zhì)量與卵子的生化組成密切相關(guān), 在魚類胚胎發(fā)育和仔魚發(fā)育早期階段, 營養(yǎng)來源于魚類卵黃所儲存的內(nèi)源性物質(zhì)(常青, 2006)。早期仔魚從內(nèi)源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)橥庠葱誀I養(yǎng)后, 造成早期仔魚大量死亡主要因?yàn)樗鶖z取餌料營養(yǎng)不能滿足仔魚發(fā)育需求; 另有研究表明, 海水魚類仔魚發(fā)育中的代謝強(qiáng)度與仔魚開口時營養(yǎng)需要量密切相關(guān)(馮隆峰, 2012)。因此, 對魚類胚胎期及仔魚開口攝食前后營養(yǎng)物質(zhì)的供給模型研究, 有助于了解開口仔魚的營養(yǎng)需要量(王金燕, 2011)。

褐菖 鲉 (Sebastiscus marmoratus)又稱石狗公,在我國產(chǎn)于南海、東海、黃海、渤海, 分布于北太平洋西部沿岸。為卵胎生, 因其肉質(zhì)細(xì)嫩、放流回捕率高, 是海洋牧場、垂釣漁業(yè)的最佳品種之一(吳瑩瑩等, 2006)。 目前國內(nèi)外對褐菖 鲉 已開展了較為廣泛的研究(Nakanishi, 1986; 石戈等,2007; Konishi et al, 2009; 邱成功等, 2014), 但對褐菖 鲉 受精卵、前仔魚、后仔魚各個階段的氨基酸和脂肪酸變化尚未見研究報道。本文分析胚胎發(fā)育期以及仔魚期褐菖 鲉 的氨基酸、脂肪酸組成變化和含量變化, 旨 在明確褐菖 鲉 在母體內(nèi)胚胎發(fā)育及開口仔魚、后仔魚期對氨基酸和脂肪酸營養(yǎng)的需求模式, 為 今后褐菖 鲉 人工培苗中提高育成率提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用材料取自浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所洞頭基地。按受精卵、初產(chǎn)仔魚、前仔魚和后仔魚4個不同發(fā)育階段分別采樣。受精卵樣品采用解剖已受精的鲉褐菖雌魚而獲得; 初產(chǎn)仔魚為剛產(chǎn)出6h內(nèi)的仔魚; 產(chǎn)出后24h仔魚開口攝食, 前期仔魚取開口后72h的仔魚; 5d后進(jìn)入后仔魚期, 取開口后10d的仔魚作為后仔魚期樣品。各期樣品分別取 10—20g, 前仔魚與后仔魚取樣前需饑餓 12h, 所有樣品取樣后立即用蒸餾水沖洗, 濾紙吸去水分, 放入液氮中冷凍,–80℃下保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 總氨基酸的測定 樣品用6 mol/L鹽酸110℃封管水解24h , 然后用超純水定容, 取2mL減壓蒸干并在干燥之后加0.02 mol/L的鹽酸溶液2mL, 將全部氨基酸溶解, 用日立 835-50型氨基酸自動分析儀進(jìn)行測試。

1.2.2 游離氨基酸的測定 準(zhǔn)確稱取樣品 1.0g,加入 5%三氯乙酸 15mL, 定容至 25mL, 在振蕩器上充分混合, 沉淀結(jié)合態(tài)蛋白質(zhì), 然后 10000 r/min 離心10min, 用日立835-50型氨基酸自動分析儀測定樣品中游離氨基酸。

1.2.3 脂肪酸的測定 稱取經(jīng)冷凍干燥后的樣品0.1—0.2g, 根據(jù) Bligh-Dyer法(Bligh et al, 1959), 將樣品經(jīng)過超聲提取2min后并進(jìn)行漩渦振蕩5min, 在3000r/min下離心6—8min, 最后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā), 直至恒重。用 Metcalfe的 BF3催化法制取脂肪酸甲脂(Metcalfe et al, 1996), 首先將以上所得脂質(zhì)用KOH-甲醇于60℃皂化2h, 之后加正己烷1min, 用QP2010氣相色譜-質(zhì)譜儀測定分析上清液。脂肪酸的百分含量用面積歸一法求出(汪正范, 2000)。

1.3 統(tǒng)計分析方法

所測數(shù)據(jù)采用“SPSS version 19.0”軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA); 統(tǒng)計間若有顯著差異,再用Duncan法進(jìn)行多重比較, P＜0.05表示差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨基酸組成及變化

2.1.1 總氨基酸組成 測得受精卵、初產(chǎn)仔魚和前、后期仔魚的氨基酸含量列于表 1, 包括必需氨基酸和非必需氨基酸各 9種。從總必需氨基酸含量看,以受精卵最高為 302.82mg/g, 至初產(chǎn)仔魚呈顯著下降(P＜0.05), 前期仔魚又顯著上升(P＜0.05), 至后期仔魚時再次呈顯著下降(P＜0.05); 其中甲硫氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸含量的變化趨勢與總必需氨基酸變化趨勢完全一致; 而賴氨酸則以初產(chǎn)仔魚階段最高, 比受精卵顯著增加了3倍(P＜0.05), 至前、后期仔魚呈顯著下跌(P＜0.05); 纈氨酸、蘇氨酸和精氨酸的含量, 受精卵顯著高于各期仔魚, 但仔魚期含量基本保持穩(wěn)定。

在非必需氨基酸中, 總非必需氨基酸在受精卵含量為 135.43mg/g, 至初產(chǎn)仔魚顯著下降(P＜0.05),仔魚開口攝食后的前期仔魚又顯著回升至 136.73mg/g(P＜0.05), 后仔魚期再次顯著下降(P＜0.05)。丙氨酸、酪氨酸的含量以受精卵最高, 是仔魚的2倍左右, 仔魚階段無顯著變化。而羥基脯氨酸、天門冬氨酸的含量變化則相反, 受精卵中不含羥基脯氨酸, 天門冬氨酸含量最低, 仔魚顯著上升(P＜0.05), 是受精卵含量的1.5倍; 脯氨酸和絲氨酸的含量從受精卵至前期仔魚呈先顯著下降再上升的趨勢(P＜0.05), 甘氨酸和半胱氨酸則表現(xiàn)從受精卵至后期仔魚呈先顯著上升再下降的趨勢(P＜0.05)。 只有谷氨酸的含量在褐菖 鲉 早期發(fā)育各階段中無顯著變化(P＞0.05)。

2.1.2 游離氨基酸組成 從受精卵到后期仔魚各階段游離氨基酸的含量列于表2?？梢钥闯? 游離氨基酸含量在各發(fā)育階段的變化急劇程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于總氨基酸含量, 受精卵的游離氨基酸含量為6.31mg/g,初產(chǎn)仔魚驟升了10倍, 至前仔魚期又下降42%, 后仔魚期再次上升至54.85mg/g。在必需游離氨基酸中, 所有必需游離氨基酸從受精卵到初產(chǎn)仔魚階段均呈顯著升高(P＜0.05), 而從初產(chǎn)仔魚到前期仔魚階段有顯著下降的趨勢(P＜0.05), 前期仔魚至后期仔魚階段中除纈氨酸含量又呈顯著遞增(P＜0.05)。從受精卵至初產(chǎn)仔魚階段中必需游離氨基酸的含量除纈氨酸外顯著升高(P＜0.05), 纈氨酸從初產(chǎn)仔魚至后期仔魚階段卻顯著下降(P＜0.05)。在非必需游離氨基酸中, 所有游離氨基酸的含量從受精卵到初產(chǎn)仔魚均顯著升高(P＜0.05); 除天門冬氨酸從初產(chǎn)仔魚至后期仔魚階段始終無顯著變化(P＞0.05), 其它氨基酸的含量從初產(chǎn)仔魚至前期仔魚階段都呈顯著降低(P＜0.05), 前期仔魚至后期仔魚階段, 谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸的含量也無明顯變化, 其余氨基酸的含量再次呈升高趨勢(P＜0.05)。表2中還可見, 褐菖鲉游離氨基酸/總氨基酸的比值范圍為1.4%—20.0%。

表1 總氨基酸含量的變化(mg/g干重)Tab.1 Changes in total amino acid content (mg/g DW)

表2 游離氨基酸含量及與總氨基酸的比值(mg/g干重)Tab.2 Changes in total free amino acid content (mg/g DW)

2.2 鲉褐菖早期發(fā)育各階段主要脂肪酸組成特點(diǎn)

表3 為 褐菖 鲉 各階段總脂的含量, 從 褐菖 鲉 受精卵至初產(chǎn)仔魚, 總脂的絕對含量由受精卵的332.52mg/g急劇跌至114.81mg/g, 這可能是因?yàn)橹咀鳛槠淠芰康闹饕獊碓? 從初產(chǎn)仔魚至前期仔魚階段因攝食輪蟲總脂的含量迅速升至274.24mg/g, 至攝食輪蟲與豐年蟲的后期仔魚階段升至366.85mg/g。

表3 褐菖鲉各階段總脂的含量(mg/g干重)Tab.3 S. marmoratus’s total lipid content in different developmental stages (mg/g DW)

表4 為 褐菖 鲉 各階段脂肪酸的百分比組成, 其中共檢測出脂肪酸26種, 這些脂肪酸的起始碳鏈長度在14碳至24碳之間。在這些脂肪酸中, 飽和脂肪酸(SFA)有14種, 單不飽和脂肪酸(MUFA)和多不飽和脂肪酸(PUFA)均各有6種。前期仔魚的∑SFA最高, 為33.86%(P＜0.05), SFA中百分含量居前兩位的是C16:0(軟脂酸)和C18:0(硬脂酸), C16:0在受精卵含量最高, 為20.67%, 隨著仔魚發(fā)育百分含量不斷下降,至后期仔魚顯著下降為13.39%(P＜0.05); C18:0則不同,受精卵至初產(chǎn)仔魚階段顯著下降, 但開口后又顯著上升為受精卵含量的2倍; ∑MUFA表現(xiàn)為從受精卵至前仔魚期顯著降低, 后期仔魚又顯著升高(P＜0.05),其中以C18:1 n-9 (油酸)含量最高, 受精卵為12.4%,初產(chǎn)仔魚下降至11.4%, 前仔魚期開始迅速上升, 后期仔魚含量是受精卵的1.5倍?！芇UFA比例占33.27%—51.27%, 在前三個階段占絕對優(yōu)勢, 但后期仔魚階段∑SFA、∑MUFA和∑PUFA各占1/3。PUFA中DHA高達(dá)15.57%—37.31%, 其次是EPA保持在8.19%—9.58%, 第三位的是ARA(花生四烯酸), 占3.75%—6.27%。

表4 褐菖鲉各階段脂肪酸的組成百分比(%)Tab.4 Fatty acid composition of S. marmoratus in different stages (%)

由總脂含量計算得到幾種重要脂肪酸的實(shí)際含量見表5。由表5可知, 在 褐菖 鲉 發(fā)育早期的各個階段, 這 17種重要的脂肪酸中 DHA的實(shí)際含量最高,在受精卵至初產(chǎn)仔魚不斷下降, 而到了開口攝食階段后立即呈顯著回升趨勢(P＜0.05), 多數(shù)脂肪酸升至峰值, 這與其它 10種脂肪酸變化規(guī)律完全相同。也有 C18:3n-6、C20:1n-9、C20:5n-3、C22:0、C22:1n-9和 C24:1n-9等 6種重要的脂肪酸從受精卵至初產(chǎn)仔魚階段均無明顯變化, 但開口攝食后立即出現(xiàn)顯著上升(P＜0.05), 且多數(shù)升至峰值。C16:1n-7從受精卵至前期仔魚階段均無明顯變化, 但從后期仔魚開始顯著上升(P＜0.05)。

褐菖 鲉 受精卵中的脂肪酸以PUFA和SFA為主,分別為150.23 mg/g和105.40 mg/g, MUFA稍低, 為75.85 mg/g。就單個脂肪酸而言, 以DHA、C16:0兩者含量最高, 分別為104.88 mg/g和68.74 mg/g;C18:1n-9和EPA次之, 分別為41.23 mg/g和27.23 mg/g;初產(chǎn)仔魚尚未開口攝食, 此時脂肪酸的實(shí)際含量急劇顯著下降(P＜0.05), ∑SFA、∑MUFA和∑PUFA分別跌至36.02、19.55和58.86 mg/g, 主要表現(xiàn)為DHA、C16:0、C18:1n-9、EPA、C18:0和C16:1n-7顯著下降(P＜0.05); 因?yàn)殚_始攝食輪蟲, 前期仔魚脂肪酸的含量出現(xiàn)顯著回升(P＜0.05), ∑SFA、∑MUFA和∑PUFA分別比初產(chǎn)仔魚升高1.6倍、1.9倍和1.1倍, 其中C16:0、C18:0分別升高1.2倍和5.6倍, 同時, DHA、EPA和ARA含量也迅速上升至72.76、26.27和17.20 mg/g; 后期仔魚以攝食鹵蟲為主, ∑MUFA和∑SFA含量繼續(xù)顯著增加(P＜0.05), 尤其是∑MUFA含量比前期仔魚增加了1.3倍, 此時, 17種重要脂肪酸中的∑SFA、∑MUFA和∑PUFA的實(shí)際含量分別是114.83、130.24、122.05 mg/g, 三者約各占1/3。

由表5計算得圖1、圖2。∑SFA、∑MUFA、∑PUFA之間的比值, 以及∑n-3 PUFA與∑n-6 PUFA比值變化見圖1, 鲉褐菖從受精卵至初產(chǎn)仔魚階段, ∑SFA/∑MUFA及∑PUFA/∑MUFA 比值顯著升高(P＜0.05),說明MUFA相對于SFA和PUFA被選擇性消耗, 又因?yàn)椤芇UFA/∑SFA比值也顯著升高(P＜0.05), 說明SFA相對于PUFA被選擇性消耗, 所以在受精卵至初產(chǎn)仔魚階段脂肪酸選擇性消耗次序?yàn)镸UFA ＞ SFA ＞PUFA。而從初產(chǎn)仔魚至后期仔魚階段, 上述三個比值卻呈顯著降低(P＜0.05), 說明此階段利用次序?yàn)镻UFA ＞ SFA ＞ MUFA。在PUFA中, ∑n-3 PUFA/∑n-6 PUFA 在 褐菖 鲉 受精卵至初產(chǎn)仔魚以及前期仔魚至后期仔魚階段無顯著變化(P＞0.05), 但在初產(chǎn)仔魚至前期仔魚階段卻顯著下降(P＜0.05)。說明在這一階段中,∑n-3 PUFA相對∑n-6 PUFA被機(jī)體選擇性消耗。

表5 褐菖鲉各階段主要脂肪酸的實(shí)際含量(mg/g干重)Tab.5 Actual contents of main fatty acids in S. marmoratus of different stages (mg/g DW)

圖1 鲉褐菖胚胎及仔魚發(fā)育中幾類重要脂肪酸相對比值的變化Fig.1 Changes in relative ratio among essential fatty acids in developmental egg and larvae of S. marmoratus

由圖2可知, 從受精卵至后期仔魚的C16:0/C18:0比值下降, 反映了SFA中的C18:0相對得到保留, 而C16:0被選擇性消耗。同樣在主要的MUFA中,C16:1/C18:1變化反映出從受精卵至初產(chǎn)仔魚階段,C16:1被選擇性大量消耗, 而從前期仔魚至后期仔魚階段, 比值顯著上升(P＜0.05), 則此階段C18:1被選擇性消耗。DHA/EPA比值在受精卵至初產(chǎn)仔魚顯著升高, 此后比值顯著降低(P＜0.05)。從初產(chǎn)仔魚至前期仔魚階段, EPA/ARA與DHA/ARA顯著降低(P＜0.05),反映在此階段中EPA和DHA相對ARA被選擇性消耗,且DHA相對EPA消耗更甚。而前期仔魚至后期仔魚階段, EPA/ARA顯著升高(P＜0.05), DHA/ARA則變化不顯著(P＞0.05), 這說明在此階段ARA相對EPA被選擇性消耗。

圖2 鲉褐菖胚胎及仔魚發(fā)育中幾種重要脂肪酸的相對比值變化Fig.2 Changes in relative ratio among essential fatty acids in developmental egg and larvae of S. marmoratus

3 討論

3.1 鲉褐菖發(fā)育早期的氨基酸組成及其變化規(guī)律

很多海水硬骨魚類的卵子中有一個或者數(shù)個油球, 為浮性卵, 林丹軍等(2002)卻 發(fā)現(xiàn)褐菖 鲉 卵子雖含有 1 個較大的油球, 但其為沉性卵。另據(jù)研究認(rèn)為, 海洋魚類浮性卵的游離氨基酸含量為總氨基酸含量的20%—50%而沉性卵僅為2%—3% (R?nnestadet al, 1993)。由表2已知, 褐菖鲉的受精卵中游離氨基酸/總氨基酸值為1.4%, 因 褐菖 鲉 屬于卵胎生魚類,具有其特殊性, 故其比值接近沉性卵而低于沉性卵。

褐菖 鲉 從受精卵到初產(chǎn)仔魚時總氨基酸含量顯著下降了23.23% (P＜0.05), 必需氨基酸總和、非必需氨基酸總和也分別下降了30.13%和7.83%, 這與半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)的報道類似(常青等,2007)。褐菖鲉的受精卵在母體內(nèi)完成胚胎發(fā)育, 孵化出膜后繼續(xù)在卵巢液中發(fā)育至開口, 當(dāng)卵黃囊將要耗盡時才由母體內(nèi)產(chǎn)出, 在母體內(nèi)的這個過程中胚胎和仔魚消耗了卵黃囊中的大量能量與營養(yǎng)物質(zhì)。因此, 初產(chǎn)仔魚所含的氨基酸總量呈顯著降低。隨著仔魚開口攝食, 前期仔魚開始獲得外源營養(yǎng), 故其體內(nèi)的總氨基酸也迅速積累。但是隨著仔魚的快速生長,代謝活動不僅要消耗大量的能量物質(zhì), 各個器官組織的發(fā)育也需要大量的氨基酸用于身體結(jié)構(gòu)蛋白的合成, 可能是由于攝入的蛋白質(zhì)跟不上魚體對氨基酸的需求, 因而出現(xiàn)了后期仔魚中的總氨基酸含量暫時下跌的現(xiàn)象。

從游離氨基酸總量看, 初產(chǎn)仔魚的含量是受精卵的 10倍, 前期仔魚又顯著下降了41.20%, 游離氨基酸占總氨基酸比值也表明, 在受精卵發(fā)育階段游離氨基酸被大量利用, 使游離氨基酸含量降到谷底。至初產(chǎn)仔魚隨著水解氨基酸總量下降, 但游離氨基酸迅速上升, 這與六帶牙(Pelates sexlineatus)、半滑舌鰨的游離氨基酸含量從受精卵到卵黃囊仔魚再到初產(chǎn)仔魚一直降低的研究結(jié)果差異較大(Brown et al, 2005; 常青等, 2007)。但卻與大西洋鮭魚(Salmo salar) (Srivastava et al, 1995)以及硬頭鱒(Salmo gairdneri) (徐紹剛等, 2011)的研究結(jié)果一致。有報道指出海水仔魚受精卵發(fā)育到開口仔魚期間, 游離氨基酸的總和持續(xù)下降, 但是有的種類在卵和卵黃囊兩個階段都有發(fā)生, 而有的種類在二者中的一個階段中發(fā)生。褐菖 鲉 孵化后1d便可以看到攝食現(xiàn)象, 卵黃囊體積減小, 消化道也已分化。由此可見, 褐菖鲉游離氨基酸的消耗主要發(fā)生在受精卵階段, 而在攝食后的消耗相對較少。在胚胎發(fā)育中游離氨基酸的主要作用是參加魚體蛋白的合成以及作為能源被分解利用, 而氧化分解代謝基質(zhì)的模式又根據(jù)魚的受精卵是否具有油球而異, 對于具有油球的受精卵, 50%的能量來自氨基酸的分解代謝(主要是游離氨基酸,但當(dāng)其耗盡則分解蛋白質(zhì)), 50%的能量來自中性脂如蠟酯和甘油三酯的分解代謝(R?nnestad et al, 1993)。褐菖鲉的受精卵具有1個較大的油球, 其能量的代謝模式應(yīng)該屬于這種。

對于褐菖 鲉 仔魚開口餌料來說, 從受精卵到開口仔魚氨基酸的變化更有參考意義。有研究指出, 仔魚的開口期是發(fā)育的關(guān)鍵時期, 其營養(yǎng)逐步由內(nèi)源性營養(yǎng)經(jīng)混合型營養(yǎng)最后轉(zhuǎn)換為外源性營養(yǎng), 此時會表現(xiàn)仔魚快速死亡, 它常被稱作“死亡期”或是“危險期”, 所以及時地供給豐富、足夠的開口餌料在魚苗培育過程中十分重要。褐菖 鲉 仔魚從母體產(chǎn)出時就已開口, 第 6 天卵黃囊徹底消失, 魚體進(jìn)入完全外源性營養(yǎng)階段。魚體的氨基酸組成往往作為其氨基酸需要量的參考標(biāo)準(zhǔn), 當(dāng)飼料中含有的可消化吸收氨基酸比例與魚類對各種氨基酸需要量的比例相近時,即達(dá)到氨基酸平衡時, 就能滿足魚類對氨基酸的需要量。褐菖 鲉 從受精卵到開口仔魚時期總氨基酸含量快速下降的是丙氨酸, 其次是異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和甲硫氨酸, 必需氨基酸下降程度高于非必需氨基酸。因此, 在 褐菖 鲉 仔魚的開口餌料中添加一定水平的上述氨基酸尤其是必需氨基酸是十分必要的。

3.2 褐菖鲉發(fā)育早期的脂肪酸組成及其變化規(guī)律

在魚類受精卵和仔魚發(fā)育過程中, 脂肪酸起著十分重要的作用。海水魚類在開口攝食前的發(fā)育過程完全依賴內(nèi)源性營養(yǎng)物質(zhì)維持正常的生理活動(常青,2006)。褐菖鲉的受精卵的主要脂肪酸實(shí)際含量中, 以DHA、C16:0最高, 其次是C18:1n-9和EPA, 這一結(jié)果與大菱鲆(Scophthalmus maximus)、大西洋鱈、真鯛(Pagrus major)和庸鰈(Hippoglossus hippoglossus)等(Klungs?yr et al, 1989)海洋魚類魚卵總脂中的主要脂肪酸組成相同, 說 明這些脂肪酸對褐菖 鲉 早期發(fā)育至關(guān)重要。但與金頭鯛(Sparus aurata)魚卵中主要脂肪酸組成順序不同(劉鏡恪等, 2002), 這可能是由于存在種間差異所致。

在褐菖 鲉 的內(nèi)源性營養(yǎng)階段中, PUFA的含量顯著高于MUFA和SFA, 這個結(jié)果與半滑舌鰨(常青等,2007)以及黑線鱈(Melanogrammus aeglefinus) (Plante et al, 2007)等許多海水魚類的研究結(jié)果一致。淡水魚類中的受精卵中, 卻是SFA高于MUFA和PUFA的含量, 這是淡水魚類與海水魚類受精卵和卵黃囊仔魚中脂肪酸組成的重要差別(黃旭雄等, 2013)。

有研究表明, 某些魚類在發(fā)育過程中對脂肪酸的利用存在一定的選擇性(黃旭雄等, 2013)。圖 1和圖 2中, 在 褐菖 鲉 吸收卵黃內(nèi)源營養(yǎng)的發(fā)育階段,C16:0 ＞ C18:1 ＞ EPA ＞ DHA ＞ ARA 為被選擇性消耗的主要脂肪酸, PUFA相對SFA和MUFA被機(jī)體選擇性保留, 而SFA又相對于MUFA被機(jī)體選擇性保留。所以, SFA、MUFA、PUFA 三 者在褐菖 鲉 內(nèi)源性營養(yǎng)階段的利用率為 MUFA ＞ SFA ＞ PUFA。即 MUFA 和SFA 作為褐菖 鲉 胚胎及仔魚發(fā)育階段重要能源被首先利用, 其中MUFA利用率較SFA高, 而PUFA被適當(dāng)?shù)乇４嫦聛? 這與海水魚類在內(nèi)源性營養(yǎng)階段首先利用SFA和MUFA的規(guī)律一致(劉鏡恪等, 2002)。如黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco) (盧素芳等, 2008)和突吻鱈鱸(Maccullochella macquariensis) (Gunasekera et al, 1999)的仔魚也優(yōu)先利用MUFA作為能量基質(zhì)被消耗, MUFA中C16:1相對C18:1被選擇性消耗。其次, SFA中C16:0、C18:0在菖鲉受精卵至后期仔魚發(fā)育期間亦起著重要作用, 表5所示, 從受精卵至初產(chǎn)仔魚顯著下降, 可 以認(rèn)為在褐菖 鲉 胚胎及體內(nèi)仔魚發(fā)育階段也主要利用C16:0和C18:0為主要能源物質(zhì),這與硬頭鱒、條石鯛(Oplegnathus fasciatus)等海水魚魚類的研究結(jié)果一致(徐紹剛等, 2011; 徐善良等,2013)。

大量研究證實(shí), EPA、DHA和ARA是海水仔、稚魚的必需脂肪酸(Lie, 1993), 尤其是 n-3系列PUFA(EPA、DHA)在海水魚類細(xì)胞膜的脂類中占相當(dāng)大的比例, 能影響水產(chǎn)動物親體的繁殖力、受精率以及仔魚生長和存活(Gunasekera et al, 2001)。n-6系列中, ARA是海水魚前列腺素合成的主要來源, 且ARA對海水仔稚魚的生長存活等多方面發(fā)揮重要的影響(徐善良等, 2013)。本研究結(jié)果顯示, 在 褐菖 鲉 的受精卵中含有豐富DHA、EPA和ARA, 三者的百分含量在初產(chǎn)仔魚期表現(xiàn)出不降反升的現(xiàn)象。這說明PUFA中, EPA、DHA和ARA利用率較低被優(yōu)先保存下來。盡管如此, 在 褐菖 鲉 仔魚開口前既無外源營養(yǎng), 又不能將短鏈脂肪酸延長去飽和生成EPA和DHA。因此表現(xiàn)為初產(chǎn)仔魚DHA、EPA和ARA實(shí)際含量仍然顯著下降, 這 表明在褐菖 鲉 仔魚卵黃囊被吸收的前期階段, 已開始利用DHA等PUFA。這也與條石鯛的研究結(jié)果相似(徐善良等, 2013)。而與Mourente等(1996)對饑餓的塞內(nèi)加爾鰨仔魚的研究中發(fā)現(xiàn)DHA始終保持不變的結(jié)果不同。

而當(dāng)褐菖 鲉 仔魚開口攝食輪蟲后, SFA中C16:0、C18:0, MUFA中C18:1, 以及PUFA中DHA、EPA和ARA均得到迅速補(bǔ)充, 此后的脂肪酸利用次序則表現(xiàn)為 PUFA ＞ SFA ＞ MUFA。至后仔魚期, 由于開始攝食富含C18:0、C18:1而缺乏PUFA的鹵蟲, 仔魚體內(nèi)的 C18:0和 C18:1迅速上升, 這與黃旭雄等(2013)對日本鬼 鲉 的研究結(jié)果完全相同。同時, 在后仔魚期因食物中 PUFA獲取不足或 n-3 PUFA被選擇性消耗,出現(xiàn)∑PUFA百分比顯著下降, 而 DHA相對 EPA和ARA則被選擇性消耗, 實(shí)際含量下降更甚。因此, 在褐菖 鲉 后期仔魚階段適當(dāng)補(bǔ)充 DHA, 對獲得其良好的生長性能很有必要。也證明了這些魚類的高度不飽和脂肪酸含量變化與餌料密切相關(guān), 主要依賴外界營養(yǎng)提供。以上結(jié)果表明褐菖 鲉 在各發(fā)育階段對脂肪酸的利用同樣具有不同的選擇性。

王金燕, 2011. 哲羅鮭胚胎和仔魚發(fā)育期的生化組成變化及溫度對仔稚魚生長的影響研究. 上海: 上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2—4

馮隆峰, 2012. 日 本鬼 鲉 早期發(fā)育及其脂類與脂肪酸特性變化:與含油球浮性卵仔魚的比較. 上海: 上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文, 50—54

盧素芳, 趙 娜, 劉華斌等, 2008. 黃顙魚早期發(fā)育階段受精卵和魚體脂肪酸組成變化. 水產(chǎn)學(xué)報, 32(5): 711—716

石 戈, 王健鑫, 劉雪珠等, 2007. 褐菖鲉消化道的組織學(xué)和組織化學(xué). 水產(chǎn)學(xué)報, 31(3): 293—302

劉鏡恪, 陳曉琳, 2002. 海水仔稚魚的必需脂肪酸——n-3系列高度不飽和脂肪酸研究概況. 青島海洋大學(xué)學(xué)報, 32(6):897—902

吳瑩瑩, 柳學(xué)周, 馬愛軍等, 2006. 饑餓對半滑舌鰨仔魚生長和發(fā)育的影響. 海洋水產(chǎn)研究, 27(2): 87—93

汪正范, 2000. 色譜定性與定量. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社,168—169

邱成功, 徐善良, 林少珍等, 2014. 不同溫度條件下褐菖鲉幼魚的耗氧率和排氨率. 應(yīng)用海洋學(xué)學(xué)報, 33(1): 84—89

林丹軍, 尤永隆, 2002. 卵胎生硬骨魚褐菖鲉胚胎及仔魚的發(fā)育. 臺灣海峽, 21(1): 45—52

徐紹剛, 田照輝, 王躍智等, 2011. 硬頭鱒受精卵、發(fā)眼卵、卵黃囊仔魚和開口仔魚氨基酸及脂肪酸的變化. 水生生物學(xué)報, 35(6): 1032—1037

徐善良, 王亞軍, 王丹麗等, 2013. 條石鯛(Oplegnathus fasciatus)發(fā)育早期的脂肪酸組成變化研究. 海洋與湖沼,44(2): 438—444

常 青, 2006. 半滑舌鰨仔稚魚營養(yǎng)生理與開口飼料的開發(fā)研究. 青島: 中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文, 1—2

常 青, 梁萌青, 陳四清等, 2007. 半滑舌鰨受精卵、卵黃囊仔魚和開口仔魚氨基酸及脂肪酸的變化. 水生生物學(xué)報,31(6): 767—773

黃旭雄, 馮隆峰, 溫 文等, 2013. 日 本鬼 鲉 胚胎及卵黃囊仔魚發(fā)育過程中脂肪及脂肪酸特性變化. 水產(chǎn)學(xué)報, 37(4):526—535

Bligh E G, Dyer W J, 1959. A rapid method of total lipid extraction and purification. Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, 37(8): 911—917

Brown M R, Battaglene S C, Morehead D T et al, 2005.Ontogenetic changes in amino acid and vitamins during early larval stages of striped trumpeter (Latris lineata).Aquaculture, 248(1—4): 263—274

Gunasekera R M, De Silva S S, Ingram B A, 2001. Chemical changes in fed and starved larval trout cod, Maccullochella macquarensis during early development. Fish Physiology and Biochemistry, 25(4): 255—268

Gunasekera R, Desilva S S, Ingram B A, 1999. The amino acid profiles in developing eggs and larvae of the freshwater Percichthyid fishes, trout cod, Maccullochella macquariensis and Murry cod, Maccullochella peelii.Aquaculture, 12: 255—261

Klungs?yr J, Tilseth S, Wilhelmsen S et al, 1989. Fatty acid composition as an indicator of food intake in cod larvae Gadus morhua from Lofoten, Northern Norway. Marine Biology, 102(2): 183—188

Konishi S, Koyama S, Hayashi J et al, 2009. Establishment and characterization of scorpion fish (Sebastiscus marmoratus)fin cell line KSG-1. Journal of Bioscience and Bioengineering, 108(1): S5—S6

Lie O, 1993. Changes in the fatty acid composition of neutral lipids and glycerophospholipids in developing cod eggs. In:Walther B T, Fyhn H J ed. Physiological and Biochemical Aspects of Fish Development. University of Bergen, Bergen,Norway, 330—337

Metcalfe L D, Schmitz A A, Pelka J R, 1996. Rapid preparation of fatty acid esters from lipids for gas chromatographic analysis. Analytical Chemistry, 38(3): 514—515

Mourente G, Vázquez R, 1996. Changes in the content of total lipid, lipid classes and their fatty acids of developing eggs and unfed larvae of the Senegal sole, Solea senegalensis Kaup. Fish Physiol Biochem, 15: 221—235

Nakanishi T, 1986. Seasonal changes in the humoral immune response and the lymphoid tissues of the marine teleost,Sebastiscus marmoratus. Veterinary Immunology and Immunopathology, 12(1—4): 213—221

Plante S, Pernet F, Haché R et al, 2007. Ontogenetic variations in lipid class and fatty acid composition of haddock larvae Melanogrammus aeglefinus in relation to changes in diet and microbial environment. Aquaculture, 263(1—4): 107—121

R?nnestad I, Fyhn H J, 1993. Metabolic aspects of free amino acids in developing marine fish eggs and larvae. Reviews in Fisheries Science, 1(3): 239—259

Srivastava K R, Brown J A, Shahidi F, 1995. Changes in the amino acid pool during embryonic development of cultured and wild Atlantic salmon (Salmo salar). Aquaculture,131(1—2): 115—124