BacT/ALERT 3D系統(tǒng)在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用

BacT/ALERT 3D系統(tǒng)在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用

張繼萍1，任麗娟2，李永利3，葉迎賓1，黃秀香1，鄭立恒4

(1.邯鄲市傳染病醫(yī)院肺科，河北邯鄲056002；2.邯鄲市第一醫(yī)院呼吸一科，河北邯鄲056000；3.曲周縣中醫(yī)院內(nèi)科，河北邯鄲057250；4.河北省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050000)

【摘要】目的：評價BacT/ALERT 3D系統(tǒng)在診斷結(jié)核性腦膜炎中的應(yīng)用價值。方法：收集2009年1月～2014年6月間200例結(jié)核性腦膜炎患者早期腦脊液標(biāo)本480份，每份標(biāo)本分別用離心涂片法、羅氏培養(yǎng)法和BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法檢測，對其結(jié)果進(jìn)行分析，總結(jié)3種方法對確診結(jié)核性腦膜炎之間的差異。結(jié)果：480份腦脊液標(biāo)本中，離心涂片法、羅氏培養(yǎng)法、BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法的結(jié)核桿菌陽性檢出率分別為3.13%、5.42%、10.63%，BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法結(jié)核桿菌初代分離時間短于羅氏培養(yǎng)法。結(jié)論：BacT/ALERT 3D系統(tǒng)有較高的檢出率、較快的檢出時間，有助于提高結(jié)核性腦膜炎的發(fā)現(xiàn)率，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】離心涂片法；羅氏培養(yǎng)法；BacT/ALERT 3D系統(tǒng)

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】【中圖號】R 529.3A

DOI【】10.3969/j.issn.1002-0217.2015.02.023

Value of BacT/ALERT 3D microbial detection system in rapid diagnosis of tuberculosis meningitisZHANGJiping，RENLijuan，LIYongli，YEYingbin，HUANGXiuxiang，ZHENGLiheng

Department of Pulmonary Diseases，Handan Infectious Disease Hospital,Handan 056002,China

Abstract【】Objective：To evaluate the application value of BacT/ALERT 3D microbial detection system in rapid diagnosis of tuberculosis meningitis.Methods: 480 specimens in cerebrospinsl fluid (CSF) of 200 patients diagnosed with tuberculosis meningitis were collected from January 2009 to June 2014.These specimens were processed for detection of the mycobacterium tuberculosis by centrifugal smear acid-fast stain (Ziehl-Neelsen staining) and Lowenstein-Jensen cultivation,as well as the BacT/ALERT 3D system.The above results were analyzed and compared regarding the positive rates in order to evaluate the value in diagnosing tuberculosis meningitis.Results: The positive rates of the centrifugal smear acid-fast smear,Lowenstein-Jensen cultivation and BacT/ALERT 3D system cultivation were 3.13%,5.42% and 10.63% respectively.Conclusion: BacT/Alert 3D microbial detection system may lead to higher sensitivity and shortened detection time,which is worthy of wider clinical recommendation.

【Key words】 centrifugal smear acid-fast stain;Lowenstein-Jensen cultivation;BacT/ALERT 3D system

結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的全球性傳染性疾病之一，近年來全世界發(fā)病率明顯上升，結(jié)核性腦膜炎(以下簡稱結(jié)腦)是最嚴(yán)重的肺外結(jié)核病，病死率30%左右，它是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，由于早期診斷困難，誤診率較高。目前，我國結(jié)腦發(fā)病率呈上升趨勢，快速、準(zhǔn)確及陽性率高的的檢測方法對于結(jié)腦的診斷至關(guān)重要[1-2]。結(jié)腦的實(shí)驗(yàn)室檢測方法很多，如何選擇一種或幾種相對有效的方法對結(jié)腦的診斷有著舉足輕重的作用。本研究用BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)腦患者腦脊液標(biāo)本，并與離心涂片法、羅氏培養(yǎng)法進(jìn)行比較，以分析BacT/ALERT 3D快速培養(yǎng)系統(tǒng)在結(jié)腦診斷中的應(yīng)用價值，更好地指導(dǎo)臨床工作。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源于2009年1月～2014年6月邯鄲市傳染病醫(yī)院200例結(jié)腦患者早期的480份腦脊液(CSF)標(biāo)本。

1.2結(jié)腦診斷標(biāo)準(zhǔn)急性、亞急性或隱匿起病，多伴有發(fā)熱、盜汗、乏力等中毒癥狀；有結(jié)核病史或發(fā)現(xiàn)顱外結(jié)核灶；有嘔吐或腦膜刺激征等臨床表現(xiàn)；PPD試驗(yàn)陽性，腦脊液常規(guī)檢查白細(xì)胞增加，腦脊液生化蛋白含量升高，萄萄糖、氯化物含量降低；抗酸桿菌涂片、結(jié)核抗體、PCR等可以出現(xiàn)陽性；頭顱CT有特異性改變；抗結(jié)核治療有效。

1.3材料與儀器歐嘉隆公司(Organon Teknika)的BacT/ALERT 3D儀及配套試劑，包括MB/BacT培養(yǎng)瓶、含有生長因子和抗生素添加劑(MAS)。

1.4離心涂片法取2 mL CSF加入一次性塑料試管中，3 000 r/min離心15 min，用吸管輕輕吸出上清液棄掉，吹打試管底部沉渣涂片，抗酸染色鏡檢。參照《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊》[3]。

1.5羅氏培養(yǎng)法無菌抽取的CSF充分混勻，分別取0.1 mL直接接種到2個羅氏培養(yǎng)基上，置36℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。接種后每周觀察一次，發(fā)現(xiàn)菌落生長者，經(jīng)抗酸染色證實(shí)為抗酸桿菌，即報告培養(yǎng)陽性，若滿8周仍無菌生長即報告培養(yǎng)陰性。培養(yǎng)陽性標(biāo)本經(jīng)涂片抗酸染色鏡檢看是否有污染。

1.6BacT/ALERT 3D 系統(tǒng)培養(yǎng)法①溶解MAS(加10 mL reconstituein flud至抗生素MAS中)；②加0.5 mL溶解的MAS到MB/BacT培養(yǎng)瓶中，再加入0.5 mL混勻的無菌腦脊液，經(jīng)對培養(yǎng)瓶條碼掃描后放入BacT/ALERT 3D儀內(nèi)自動培養(yǎng)檢測。報告陽性的標(biāo)本經(jīng)涂片抗酸染色鏡檢是否有污染。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件進(jìn)行處理，組間比較采用配對χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 480份標(biāo)本中，離心涂片法、羅氏培養(yǎng)法、BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法結(jié)核桿菌檢出陽性率分別為3.1%(15/480)、5.4%(26/480)和10.6%(51/480)，BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法高于羅氏培養(yǎng)法結(jié)核桿菌的陽性檢出率(P<0.05)，并且前者從結(jié)核桿菌的初代分離所用時間短于后者，見表1。BacT/ALERT法污染率為2.3%，羅氏培養(yǎng)法為2.1%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.215份離心涂片法陽性標(biāo)本BacT/ALERT 3D 快速培養(yǎng)結(jié)核桿菌的陽性檢出率為86.7%，高于羅氏培養(yǎng)法的66.7%，見表2。配對χ2=1.333，P>0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3465份離心涂片法陰性標(biāo)本BacT/ALERT 3D快速培養(yǎng)結(jié)核桿菌的陽性檢出率為8.2%，高于羅氏培養(yǎng)法的4.7%。見表3，配對χ2=16.961，P<0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1兩種方法檢出時間

檢查方法陽性率(%)初分離平均時間(d)BacT/ALERT3D10.6(51/480)26.24±19.68羅氏法5.4(26/480)35.61±28.25χ2/t8.82461.3850P<0.05>0.05

表215份離心涂片法陽性標(biāo)本兩種方法檢查結(jié)果

檢查方法BacT/ALERT3D陽性陰性合計羅氏法陽性10010陰性325合計13215

表3465份離心涂片法陰性標(biāo)本兩種方法檢查結(jié)果

檢查方法BacT/ALERT3D陽性陰性合計羅氏法陽性14216陰性24425449合計38427465

3討論

結(jié)腦如能早期診斷及治療，可大大降低其致畸率和病死率。目前結(jié)腦的診斷大多依靠病史、臨床表現(xiàn)、影像學(xué)表現(xiàn)及組織活檢來確診，與其他腦膜炎的鑒別診斷存在困難。腦脊液離心涂片抗酸染色或培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌是診斷結(jié)腦的“金標(biāo)準(zhǔn)”[4]，但離心涂片法雖然檢測速度快，價格低廉，也只能檢出含菌量較高的標(biāo)本，無法檢測出含菌量較低的標(biāo)本，因此腦脊液結(jié)核桿菌的檢出率極低，對早期診斷結(jié)腦的意義不大。傳統(tǒng)的羅氏培養(yǎng)法較離心涂片法敏感性高并可鑒定死菌與活菌，但至少需要2～8周才能出現(xiàn)陽性結(jié)果[5]，且每周觀察一次菌落生長情況，容易造成人為的報告延誤[6]。結(jié)核桿菌的快速、準(zhǔn)確、陽性率高的診斷技術(shù)一直是結(jié)核病基礎(chǔ)應(yīng)用研究的熱點(diǎn)問題。BacT/ALERT 3D快速培養(yǎng)檢測系統(tǒng)的應(yīng)用有效提高了培養(yǎng)效率，縮短了培養(yǎng)時間。該技術(shù)依靠CO2比色檢測裝置檢測培養(yǎng)系統(tǒng)中結(jié)核桿菌的生長情況。培養(yǎng)瓶底部有顏色感應(yīng)器，當(dāng)有結(jié)核桿菌生長時，產(chǎn)生的CO2滲透至感應(yīng)器經(jīng)水飽和后產(chǎn)生氫離子(H+)改變感應(yīng)器的pH值,顏色由深綠色變?yōu)辄S色，儀器自動報告有無結(jié)核桿菌生長[7]，具有自動化程度高、污染率低、陽性率高等優(yōu)點(diǎn)。

本課題480例腦脊液標(biāo)本羅氏培養(yǎng)法陽性26例，陽性率為5.42%，平均培養(yǎng)時間(35.61±28.25)d；BacT/ALERT 3D法陽性51例，陽性率為10.6%，平均時間(26.24±19.68)d，其中有1份標(biāo)本在57 d后斜面上長出單個菌落，經(jīng)鑒定為結(jié)核桿菌，而BacT/ALERT 3D 培養(yǎng)法報告為陰性，可能為標(biāo)本中含菌量很少，此法陰性報告時間短(42 d)所造成。BacT/ALERT 3D法污染率2.3%，低于劉子龍等[8]報告的4%，在抽取腦脊液和實(shí)驗(yàn)過程中必須嚴(yán)格無菌操作，進(jìn)一步降低污染率。在離心涂片法陽性的51例標(biāo)本中，有2例標(biāo)本BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法陰性，5例羅氏培養(yǎng)法為陰性，但這些培養(yǎng)陰性的標(biāo)本進(jìn)行real time PCR試驗(yàn)檢測結(jié)果均為陽性，出現(xiàn)這種情況的原因可能為：①標(biāo)本中結(jié)核桿菌含量極低，處理過程中活性降低；②病人就診前服用過對結(jié)核桿菌有抑制作用的藥物；③BacT/ALERT 3D系統(tǒng)培養(yǎng)法加樣量高于羅氏培養(yǎng)法。

綜上所述，BacT/ALERT 3D 系統(tǒng)培養(yǎng)法比傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)檢查方法具有更高檢出率，檢出時間短等優(yōu)點(diǎn)，給結(jié)腦患者的發(fā)現(xiàn)、診斷與鑒別診斷提供了有效的技術(shù)支持，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

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