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    非小細(xì)胞肺癌患者血清和呼出氣冷凝液中白介素-17及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平變化及意義

    2016-01-11 05:49:39朱杰,何海艷,馬航
    疑難病雜志 2015年8期
    關(guān)鍵詞:冷凝肺癌血清

    非小細(xì)胞肺癌專題

    非小細(xì)胞肺癌患者血清和呼出氣冷凝液中白介素-17及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平變化及意義

    朱杰,何海艷,馬航,呂學(xué)東

    作者單位: 226001南通市第一人民醫(yī)院呼吸科

    通信作者: 呂學(xué)東,E-mail:xuedonglv@126.com

    【摘要】目的觀測(cè)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者血清和呼出氣冷凝液中白介素-17(IL-17)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平及其在肺癌發(fā)病機(jī)制中的作用。方法收集NSCLC患者39例為NSCLC組,同期健康體檢者20例為健康對(duì)照組,采集空腹血清和呼出氣冷凝液(EBC)標(biāo)本,采用ELISA方法檢測(cè)血清及EBC中IL-17、VEGF水平,并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果(1) NSCLC組血清IL-17及VEGF水平分別為(27.34±8.12)pg/ml及(42.72±7.69)pg/ml,均明顯高于健康對(duì)照組的IL-17(16.23±4.22)pg/ml、VEGF(24.64±5.17)pg/ml(P均<0.01)。(2)NSCLC組EBC中IL-17水平和VEGF水平分別為(5.96±1.51)pg/ml,(22.73±4.26)pg/ml,均高于健康對(duì)照組的(1.96±0.49)pg/ml、(13.31±4.61)pg/ml(P均<0.01)。(3)NSCLC患者外周血清和EBC中IL-17、VEGF水平隨臨床分期進(jìn)展呈上升趨勢(shì)(P<0.01)。(4)NSCLC患者血清中IL-17 水平與VEGF水平呈正相關(guān)性(r=0.594,P<0.01),EBC中IL-17水平與VEGF亦呈正相關(guān)(r=0.704,P=0.000)。血清中IL-17、VEGF水平與臨床分期呈正相關(guān)(r=0.811、0.722,P均<0.01)。EBC中IL-17、VEGF水平與臨床分期亦呈正相關(guān)(r=0.843、0.789,P均<0.01)。結(jié)論IL-17參與NSCLC的發(fā)病過(guò)程,可能和其促進(jìn)VEGF的表達(dá),進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)有關(guān)。EBC中IL-17水平的檢測(cè)可作為NSCLC患者監(jiān)測(cè)病情變化的無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)。

    【關(guān)鍵詞】非小細(xì)胞肺癌;血清;呼出氣冷凝液;白介素-17;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

    DOI【】10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.08.004

    收稿日期:(2015-04-10)

    Changes and implications of interleukin-17 and vascular endothelial growth factor in serum and exhaled breath condensate in non-small cell lung cancerZHUJie,HEHaiyan,MAHang,LVXuedong.DepartmentofRespiratory,theFirstPeople’sHospitalofNantong,Nantong226001,China

    Correspondingauthor:LVXuedong,E-mail:xuedonglv@126.com

    Abstract【】ObjectiveTo observe interleukin 17 (IL-17) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in serum and exhaled breath condensate(EBC) in non-small cell lung cancer (NSCLC),and it role in the pathogenesis of lung cancer.MethodsCollected 39 NSCLC patients as NSCLC group, 20 cases of healthy subjects as healthy control group, collected fasting serum and EBC specimens, using ELISA method for the detection of serum and EBC IL-17 and VEGF levels, and correlation analysis were performed.Results(1) In the NSCLC group, the serum levels of IL-17 and VEGF levels were (27.34±8.12) pg/ml and (42.72±7.69) pg/ml,which were significantly higher than those in healthy control group of the IL-7: (16.23±4.22) pg/ml, VEGF: (24.64±5.17) pg/ml (P<0.01). (2) The NSCLC group, in EBC, IL-17 concentration and VEGF concentration were (5.96±1.51) pg/ml and (22.73±4.26) pg/ml respectively, which were higher than in the healthy control group’s (1.96±0.49) pg/ml, (13.31±4.61) pg/ml (P<0.01). (3) NSCLC’s EBC in the peripheral blood, IL-17 and VEGF levels were increased along with clinical stage progress increased (P<0.01). (4) In NSCLC, serum IL-17 levels and VEGF levels were positively correlated (r=0.594,P< 0.01), EBC IL-17 levels and VEGF was also positively correlated (r=0.704,P=0.000). The serum level of VEGF and IL-17 was positively correlated with clinical stage(r=0.811,r=0.722,P<0.01). IL-17, VEGF level and clinical stage was positively correlated to EBC (r=0.843,r=0.789,P<0.01).ConclusionIL-17 participates in the pathogenesis of NSCLC. It may promote VEGF expression to further promote tumor growth. EBC IL-17 level can be used as a noninvasive index for monitoring the disease condition of NSCLC.

    Keywords【】Non-small cell lung cancer;Serum;Exhaled breath condensate;IL-17; Vascular endothelial growth factor

    1資料與方法

    1.1臨床資料2014年1月—2015年2月南通市第一人民醫(yī)院初次診治原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌患者39例為NSCLC組,其中男28例,女11例,年齡55~78(69.2±6.1)歲。病程3個(gè)月~2年。既往合并高血壓12例,合并糖尿病4例,所有患者否認(rèn)家族性遺傳性疾病史。采用美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(American joint committee on cancer,AJCC)第7版癌癥分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期,I期8例,II期9例,III期12例,IV期10例。所有患者采血或EBC標(biāo)本前未經(jīng)任何抗癌及激素治療,并排除合并自身免疫性疾病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺炎及其他部位惡性腫瘤。以同期醫(yī)院體檢中心的健康志愿者20例為健康對(duì)照組,其中男12例,女8例,年齡56~77(64.2±5.6)歲。2組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)同意,并簽署知情同意書(shū)。

    1.2檢測(cè)指標(biāo)及方法

    1.2.1EBC收集: 首先安裝好收集管,將收集器預(yù)冷20 min,檢查時(shí)患者先安靜休息15 min,用清水漱口,常規(guī)帶鼻夾,通過(guò)一次性咬口器連接收集器(HAAK EK20 EcoScreen,德國(guó)),平靜呼吸20 min,采集過(guò)程中,患者口中有唾液可咽下或吐掉。若患者感咳嗽、噯氣、打噴嚏等囑其暫停收集,待平靜后再繼續(xù)收集,以防止唾液、胃內(nèi)成分污染標(biāo)本。收集到呼出氣冷凝物融化后約1~2 ml,移至Ependoff管(3810X,德國(guó))內(nèi),每管約300 μl,置入-70℃冰箱保存待測(cè)。

    1.2.2IL-17及VEGF檢測(cè): 取空腹肘靜脈血5 ml,離心后留血清,-70°保存待測(cè)。采用ELISA法測(cè)定EBC及血清中IL-17及VEGF濃度,試劑盒為上海船夫生物科技有限公司產(chǎn)品。所有標(biāo)本嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,方差齊時(shí)均數(shù)樣本間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)量資料相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析,對(duì)IL-17、VEGF表達(dá)與臨床分期關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1血清及EBC中IL-17及VEGF水平比較NSCLC組血清及EBC中IL-17、VEGF水平均明顯高于健康對(duì)照組( P<0.01)。見(jiàn)表1。

    表1 2組血清及EBC中IL-17及VEGF

    2.2不同臨床分期患者IL-17及VEGF水平比較NSCLC患者血清及EBC中IL-17、VEGF濃度隨著臨床分期的進(jìn)展逐步升高(P<0.01)。見(jiàn)表2。

    表2 不同分期NSCLC患者血清及EBC中IL-17

    2.3相關(guān)性分析NSCLC患者血清及EBC中IL-17水平均與VEGF水平呈正相關(guān)性(r=0.594、 0.704,P=0.000)。血清中IL-17、VEGF水平與臨床分期呈正相關(guān)(分別為r=0.811、0.722,P均<0.01)。EBC中IL-17、VEGF水平與臨床分期亦呈正相關(guān)(分別為r=0.843、0.789,P均<0.01)。見(jiàn)圖1~6。

    3討論

    肺癌已成為目前人類(lèi)因癌癥死亡的主要原因之一。研究表明腫瘤的組織類(lèi)型及患者的免疫狀態(tài)均影響腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移。非小細(xì)胞肺癌患者經(jīng)放療、化療、手術(shù)等綜合性治療后效果不佳,其中主要的原因之一是非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能受到不同程度的抑制[2]。

    圖1 NSCLC患者血清中IL-17水平與VEGF水平相關(guān)性分析圖2 NSCLC患者EBC中IL-17水平與VEGF水平相關(guān)性分析圖3 NSCLC患者血清中IL-17水平與臨床分期相關(guān)性分析

    圖4 NSCLC患者血清中VEGF水平與臨床分期相關(guān)性分析圖5 NSCLC患者EBC中IL-17水平與臨床分期相關(guān)性分析圖6 NSCLC患者EBC中VEGF水平與臨床分期相關(guān)性分析

    血管生成在腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。VEGF是血管生成中的關(guān)鍵因子,它和腫瘤的轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后相關(guān)。VEGF主要作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,能增強(qiáng)微血管的通透性,同時(shí)可刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及分泌基質(zhì)降解酶,從而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)、遷移。為進(jìn)一步探討IL-17參與肺癌發(fā)病過(guò)程中的可能機(jī)制,我們檢測(cè)了肺癌患者血清中VEGF水平,結(jié)果表明肺癌患者血清中VEGE水平亦明顯升高,在肺癌不同分期中VEGF的水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清中IL-17水平和VEGF水平呈正相關(guān),這表明IL-17可能通過(guò)促進(jìn)VEGF的表達(dá),促進(jìn)腫瘤血管生成,參與肺癌的發(fā)病過(guò)程。

    腫瘤微環(huán)境是近年來(lái)深入研究腫瘤局部免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用而提出的新概念,它主要是指腫瘤在其發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所處的內(nèi)環(huán)境,由腫瘤細(xì)胞本身、間質(zhì)細(xì)胞、微血管及少量浸潤(rùn)細(xì)胞,如淋巴細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等共同組成[16]。外周循環(huán)中的免疫炎性狀態(tài)屬于全身免疫,受患者身體狀況、所處環(huán)境、飲食等多種因素影響,而腫瘤微環(huán)境中免疫炎性狀態(tài)受外部影響較小,故對(duì)腫瘤微環(huán)境的研究更能反映Th17細(xì)胞及IL-17的生物學(xué)效應(yīng)。EBC檢測(cè)是近年來(lái)新出現(xiàn)的肺臟局部炎性狀態(tài)的檢測(cè)方法。它只需患者對(duì)著咬口器平靜呼吸,氣體通過(guò)冷凝裝置成為液態(tài)后收集。氣道內(nèi)液體中多種生化分子平靜呼吸時(shí)可隨氣體呼出,遇冷則隨水蒸氣凝結(jié)而進(jìn)入EBC。它能更準(zhǔn)確地實(shí)時(shí)反映肺臟局部的炎性狀態(tài)及肺臟腫瘤微環(huán)境情況,具有安全無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便易行和可多次重復(fù)的優(yōu)點(diǎn)[17]。本結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺癌患者EBC中IL-17及VEGF水平均高于健康對(duì)照組。隨著臨床分期進(jìn)展,EBC中IL-17及VEGF水平亦逐漸升高,且均與臨床分期呈正相關(guān)(r=0.843、0.789,P<0.01),這表明在肺臟局部腫瘤微環(huán)境中IL-17發(fā)揮重要的生物學(xué)功能,對(duì)肺癌患者EBC中IL-17水平的檢測(cè)能預(yù)測(cè)肺癌患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后。

    綜上所述,我們的研究表明NSCLC患者血清及EBC中存在著高水平的IL-17,且和臨床分期成正相關(guān)。相關(guān)性分析顯示,血清及EBC中IL-17水平均與VEGF水平呈正相關(guān),表明IL-17參與肺癌的發(fā)病過(guò)程,可能和其促進(jìn)VEGF的表達(dá),進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)有關(guān)。EBC中IL-17水平的檢測(cè)可作為肺癌患者監(jiān)測(cè)病情變化的無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)。

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