多西他賽注射液制備工藝研究

陳 蘭 王雪蓮

（西南藥業(yè)股份有限公司，中國 重慶400038）

多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥，通過干擾細胞有絲分裂和分裂間期細胞功能所必須的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用。多西他賽可與游離的微管蛋白結(jié)合，促進微管蛋白裝配成穩(wěn)定的微管，同時抑制其解聚，導(dǎo)致喪失了正常功能的微管束的產(chǎn)生和微管的固定，從而抑制細胞的有絲分裂。多西他賽自1995年在墨西哥、南非被批準(zhǔn)用于治療乳腺癌及非小細胞肺癌(NSCLC)以來,已在世界范圍內(nèi)51個國家獲準(zhǔn)使用,且在其中24個國家中,它是唯一被批準(zhǔn)用于治療晚期NSCLC的藥物[1]。

1 試驗材料

1.1 儀器

Agilet 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），pHS-3C型pH計（上海雷磁儀器廠），YB-2型澄明度檢測儀（天津大學(xué)精密儀器廠），AB204-E電子天平（梅特勒-托利多）。

1.2 藥品與試劑

多西他賽（重慶泰濠制藥有限公司，批號：DO-0811001）；吐溫-80（日本三洋有限公司；無水乙醇（成都科龍有限公司）；活性炭（上海針用活性炭廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 多西他賽注射液的制備

準(zhǔn)確稱取多西他賽原料，放入配料罐中，并加入配置總量80%的無水乙醇，攪拌使原料完全溶解。在藥液中加入吐溫-80，攪拌均勻。將溶液稀釋至總重量。調(diào)節(jié)產(chǎn)品pH值。最后加入活性炭，攪拌靜止15分鐘，灌裝，冷凍干燥抽取乙醇，軋蓋。

2.2 多西他賽含量測定試驗

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

儀器：高效液相色譜儀 色 譜 柱：C18（4.6×250mm，5μm，安捷倫）。流動相：以水為流動相A，乙腈為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫。檢測波長：232nm。柱溫為45℃；流速為1.2ml/min；進樣體積：20μl。稱取多西他賽定性對照品（包括多西他賽，雜質(zhì)b，雜質(zhì)d，雜質(zhì)e和雜質(zhì)f）適量，用溶劑[乙腈-水-乙酸（100：100：0.1）]溶解并稀釋至1mg/ml的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。取對照品溶液用溶劑配制成0.2μg/ml的溶液，作為靈敏度溶液。分別精密量取系統(tǒng)適用性試驗溶液各20μl進樣，系統(tǒng)性試驗溶液色譜圖中多西他賽和雜質(zhì)b的分離度應(yīng)大于3.5，對照品溶液主峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于1.0%[2]。

表1

2.2.2 測定法

取本品的內(nèi)容物適量，精密稱定，用溶劑溶解并稀釋制成0.2mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取多西他賽對照品約10mg，置50ml量瓶中，加2ml乙醇使溶解，加溶劑稀釋制成約含多西他賽0.2mg/ml的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密稱取內(nèi)容物適量，用溶劑溶解并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別進樣。

表2 含量系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果

6份樣品的主峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.23%，主峰保留時間得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16%，均小于1%，表明該方法系統(tǒng)適用性不錯。

2.2.4 空白試驗

按處方比例稱取輔料約10mg和制劑12mg各一份，分別置于10ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別進樣，同時進一份溶劑。結(jié)果：溶劑和輔料的吸收峰在主峰保留時間處均未有吸收峰出現(xiàn)，不干擾含量測定。

2.2.5 精密度試驗

①重復(fù)性試驗

精密稱取內(nèi)容物適量，并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別取20μl進樣。結(jié)果見表3。

表3 含量重復(fù)性試驗結(jié)果

結(jié)果：6次進樣的平均峰面積為98.7%，RSD=0.46%，表明含量的重復(fù)性較好。

②中間精密度試驗

由另外一人，另一天，用另外一臺液相檢測，結(jié)果見表4。

表4 含量中間精密度試驗結(jié)果

重復(fù)性和中間精密度試驗12份溶液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%，可見此方法測定含量精密度較好。

2.2.6 溶液的穩(wěn)定性

取重復(fù)性試驗的樣品溶液1份，在室溫下放置不同的時間，計算含量。結(jié)果見表5。

表5 含量溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

供試品溶液在放置8小時后，含量基本無變化，可見溶液穩(wěn)定性很好。

2.2.7 回收率試驗

精密稱取多西他賽原料各三份，分別置于量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至100ml，搖勻，分別進樣，計算回收率。結(jié)果見表6。

表6 含量回收率試驗結(jié)果

三個濃度下的平均回收率為99.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.34%，表明此方法測定含量的準(zhǔn)確度很好，可以對多西他賽進行準(zhǔn)確定量。

2.3 注射用多西他賽制備工藝的考察

2.3.1 質(zhì)量指標(biāo)

①性狀：白色凍干塊狀物。②pH測定：pH值應(yīng)為3.0~4.5。③水分：取本品，照水分測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅧM第一法A）測定，含水分不得過3.0%。④有關(guān)物質(zhì)測定：單個雜質(zhì)峰面積不的過2.0%，總雜質(zhì)峰面積不得過5.0%。⑤含量測定：多西他賽含量用高效液相法測定，多西他賽含量應(yīng)在90%~105%范圍內(nèi)。

2.3.2 藥用炭的篩選

將多西他賽用無水乙醇溶解后，加入吐溫-80攪拌均勻后，分別加入0.01%、0.05%、0.1%的活性炭，攪拌均勻后，靜止15分鐘，粗濾，再通過0.22μm精濾，灌裝，冷凍抽乙醇后軋蓋。加入不同藥用炭試驗，結(jié)果見表7。

表7 活性炭篩選結(jié)果表

結(jié)果顯示，活性炭對多西他賽的吸附不是很明顯，但一定量的活性炭有助于保證產(chǎn)品質(zhì)量，在多西他賽藥液中加入0.01%的活性炭，在大生產(chǎn)過程中既保證細菌內(nèi)毒素合格，又保證過濾系統(tǒng)能順利進行。

2.3.3 凍干時間的篩選

多西他賽原料難溶于水，我們使用無水乙醇作為產(chǎn)品溶劑。因此多西他賽注射液需控制乙醇殘留量。為保證有效去除無水乙醇，采取了分階段程序升溫的辦法，同時保證高真空度的條件下去除無水乙醇。我們分別考察了32小時、36小時、40小時、44小時時本品的無水乙醇殘留量最終確定本品的冷凍干燥時間。無水乙醇殘留量的測定采用氣相色譜法測定。

表8 凍干時間與無水乙醇殘留量研究

根據(jù)實驗的測定結(jié)果，冷凍干燥32小時乙醇的殘留量符合標(biāo)準(zhǔn)要求，為保證在大生產(chǎn)過程中，產(chǎn)品的乙醇殘留量符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，因此選擇冷凍干燥時間為44小時。

2.3.4 結(jié)果

多西他賽溶液配制后加入0.01%活性炭后攪拌靜止15分鐘，藥液經(jīng)過0.45μm及0.22μm兩級過濾后灌裝，冷凍干燥44小時后，軋蓋。中試生產(chǎn)的三批樣品（批號：20130301、20130302、20130303），樣品經(jīng)過質(zhì)量檢測，各項指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。結(jié)果見表9。

3 討論

表9 三批試驗結(jié)果表

多西他賽的藥理作用比紫杉醇強，在細胞內(nèi)濃度比紫杉醇高3倍，作為微管穩(wěn)定劑和裝配促進劑，活性比紫杉醇大2倍；作為微管解聚抑制劑，活性比紫杉醇大2倍[3]，目前已在64個國家上市。因原料藥多西他賽難溶，使用乙醇作為溶劑。再與吐溫-80混合形成溶液，再采取冷凍干燥技術(shù)將混合溶液中的無水乙醇抽除。我們對多西他賽注射液進行了處方篩選、凍干曲線的摸索等試驗研究工作，研究結(jié)果表明，按照研制工藝中試生產(chǎn)的三批樣品均符合質(zhì)量要求，處方和工藝合理，利于生產(chǎn)操作，能保證產(chǎn)品質(zhì)量，生產(chǎn)效率高。

［1］姚和際,等.多西紫杉醇研究進展及市場分析[J].中國制藥信息,2001,17(5):29-30.

［2］美國藥典[Z].USP35版.

［3］孫燕,李雛廉,管忠震.泰索帝治療晚期乳腺癌和肺癌[J].中國新藥雜志,1998,7(3):165-167.