CyclinB2、CDK1在胃癌中的表達(dá)水平及生物學(xué)意義

CyclinB2、CDK1在胃癌中的表達(dá)水平及生物學(xué)意義

王曉明梁國棟楊玉波王斌劉海瑞王淑紅

(吉林省腫瘤醫(yī)院腹部腫瘤外一科,吉林長春130012)

摘要〔〕目的探討胃癌患者瘤組織中細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)B2、細(xì)胞周期依賴性激酶(CDK1)的表達(dá)水平及其預(yù)后的臨床生物學(xué)意義。方法共收集60例胃癌患者組織標(biāo)本，采用免疫組化法檢測胃癌及癌旁組織CyclinB2、CDK1表達(dá)水平進(jìn)而分析其與患者臨床病理特征及長期預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果胃癌組織CyclinB2、CDK1表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(χ2=17.515,P<0.001)，病理為Ⅲ期患者的瘤組織中CyclinB2、CDK1的表達(dá)水平明顯高于術(shù)后病理Ⅰ期，臨床統(tǒng)計學(xué)證實CyclinB2、CDK1的表達(dá)水平與TNM分期有關(guān)(χ2=11.545,P=0.05)。CyclinB2、CDK1高表達(dá)的胃癌患者總生存率明顯差于CyclinB2、CDK1低表達(dá)者(P=0.039)，而無疾病生存率兩者無顯著性差異(P=0.096)。 結(jié)論胃癌患者CyclinB2、CDK1高表達(dá)可能提示腫瘤侵襲的生物學(xué)能力較強(qiáng)，并與患者低總生存率(OS)有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕胃癌；細(xì)胞周期蛋白B2；細(xì)胞周期依賴性激酶

中圖分類號〔〕R735.1〔

基金項目：吉林省科技廳資助項目(200705274)

通訊作者：梁國棟(1983-)，男，主治醫(yī)師，博士，主要從事普通外科的臨床研究。

第一作者：王曉明(1962-)，男,副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤外科臨床研究。

細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)和細(xì)胞周期依賴性激酶(CDK)是細(xì)胞周期調(diào)控的重要分子，在細(xì)胞有絲分裂周期的不同時段發(fā)揮重要的生物學(xué)作用，使細(xì)胞周期正常有序的運行。研究表明在其他消化道腫瘤中均存在Cyclin、CDK的過表達(dá)，與其侵襲、轉(zhuǎn)移、增殖、分化等生物學(xué)行為密切相關(guān)，目前胃癌聯(lián)合檢測CyclinB2、CDK1文獻(xiàn)報道較少。本實驗通過免疫組化、熒光原位雜交(FISH)等方法研究CyclinB2和CDK1在胃癌組織(不同TNM分期)、癌旁組織、正常胃組織中的表達(dá)，及其生物學(xué)行為與患者預(yù)后的相關(guān)性〔1〕。近期國外有研究提示CyclinB2為進(jìn)展期胃癌預(yù)后不良標(biāo)志之一〔2〕。國內(nèi)雖有類似研究，但大多缺乏長期預(yù)后數(shù)據(jù)〔3〕。本研究旨在探究CyclinB2、 CDK1在國人胃癌患者中表達(dá)水平及其預(yù)后意義。

1材料與方法

1.1研究對象2013年6月至2014年6月收集我住院手術(shù)切除胃癌組織的患者60例，年齡37～72歲。45例患者行遠(yuǎn)端胃癌切除術(shù)，15例患者行全胃切除術(shù)。腫瘤<5 cm 26例，>5 cm 34例；低分化30例，中/高度分化30例；臨床分期ⅡA期6例，ⅡB期11例，ⅢA期12例，ⅢB期14例，ⅢC期17例；T分期：T2期9例，T3期26例，T4期25例；N分期N0期7例，N1期15例，N2期19例，N3期19例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均為初始治療，未行術(shù)前新輔助化療、無服用生物免疫制劑歷史。術(shù)后病理證實為胃腺癌患者60例，其中男30例，女30例。均行D2+淋巴結(jié)清掃術(shù)(開腹手術(shù)51例，腹腔鏡手術(shù)9例)。兩位臨床高年資病理醫(yī)生(副教授)依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(AJCC)胃癌臨床病理分型對病人進(jìn)行術(shù)后TNM分期〔4〕。手術(shù)后將病人新鮮癌胃組織(原發(fā)灶)與癌旁組織進(jìn)行免疫組化及FISH病理分析，癌旁組織選擇距癌灶>5 cm的胃組織，本實驗得到吉林省腫瘤醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)并且征得患者本人的同意。

1.2免疫組化樣本經(jīng)4%多聚甲醛固定后，包埋于石蠟中。將組織切割為4.0 μm厚的連續(xù)切片。二甲苯脫蠟30 min后，梯度乙醇水化。切片浸于枸櫞酸緩沖溶液中進(jìn)行復(fù)性，再用3%的H2O2抑制內(nèi)源性過氧化酶。切片置于10%皂素中修復(fù)，余步驟按卵蛋白-生物素-酶復(fù)合物染色(ABC)法進(jìn)行，常規(guī)行蘇木精-伊紅染色，免疫組化染色，鼠單克隆抗體CyclinB2和CDK1均購于上海BOSTER生物有限公司，ABC購于(英國Leica Biosystems Newcastle公司)。

結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)： 用Olympus顯微鏡觀察DAB-染色切片，染色強(qiáng)度分級由吉林省腫瘤醫(yī)院病理科負(fù)責(zé)，事前未告知臨床診斷分期。胞質(zhì)、胞核出現(xiàn)棕黃色，黃褐色顆粒為陽性染色細(xì)胞，光鏡下每張切片隨機(jī)選取高倍視野(400倍)計數(shù)500個細(xì)胞，根據(jù)染色陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評分〔2〕： 0分為無色，1分為5%～25%細(xì)胞表達(dá)CyclinB2和CDK1，2分為25%～50%，3分50%～75%，4分75%～100%。根據(jù)染色評分結(jié)果，將患者分為CyclinB2和CDK1低表達(dá)(評分為0～1分)與CyclinB2和CDK1高表達(dá)(評分為2～4分)。

1.3術(shù)后輔助化療患者術(shù)后行替吉奧(愛斯萬日本大鵬株式會社)聯(lián)合奧沙利鉑(樂沙定法國賽諾菲)輔助化療，根據(jù)患者耐受情況及病情變化等決定化療療程，最大療程數(shù)為6個療程?；煼桨福禾婕獖W(愛斯萬日本大鵬株式會社)40 mg/m2口服，2次/d，第1～14天；奧沙利鉑(樂沙定法國賽諾菲)130 mg/m2避光4 h泵入，第1天，每3 w為1個周期。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS16.0軟件，計數(shù)資料比較采用Pearsonχ2檢驗或趨勢χ2分析及秩和檢驗。兩小樣本計量資料比較采用t檢驗。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，組間比較采用log秩和檢驗。

2結(jié)果

2.1胃癌與癌旁組織CyclinB2和CDK1表達(dá)水平60例胃癌患者中29例呈現(xiàn)CyclinB2和CDK1高表達(dá)，其中2分為14例，3分為15例。癌旁組織6例為CyclinB2和CDK1高表達(dá)，均為2分，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=17.515,P<0.001)。

2.2CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與胃癌臨床病理因素的相關(guān)性研究CyclinB2和CDK1高表達(dá)與患者性別、腫瘤大小無關(guān)(均P>0.05)，但與患者TNM分期相關(guān)，CyclinB2和CDK1高表達(dá)患者TNM分期明顯高于低表達(dá)者(均P<0.05)。趨勢χ2分析表明，CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與TNM分期有關(guān)，分期越高，CyclinB2和CDK1高表達(dá)患者所占比例越高(P=0.05)。CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均存在相關(guān)性(均P>0.05)。見表1。

表1　CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與

2.3長期預(yù)后患者隨訪6～24個月，中位隨訪24個月，失訪4例，失訪率8.16%。CyclinB2和CDK1高表達(dá)胃癌患者總生存率明顯差于CyclinB2和CDK1低表達(dá)者(P=0.039)，無疾病生存率無顯著差異(P=0.096)。見圖1，圖2。

圖1　CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與 患者總生存率的相關(guān)性

圖2　CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與 患者無疾病生存率的相關(guān)性

3討論

腫瘤基本生物學(xué)行為的特征是細(xì)胞的增殖(有絲分裂)和分化失控，多數(shù)由于癌基因的激活和抑癌基因的失活，干擾了細(xì)胞正常有序的增殖分化，而最終歸結(jié)至細(xì)胞周期調(diào)節(jié)機(jī)制的異常。細(xì)胞周期主要由Cyclin和CDK及CK1共同完成。細(xì)胞周期G2末期是重要的檢查點，決定著G2/M的轉(zhuǎn)換，學(xué)者Yang等發(fā)現(xiàn)CyclinB1、2在胃癌G1細(xì)胞中及瘤細(xì)胞株中非時相性過度表達(dá)，可使細(xì)胞周期關(guān)鍵點G2/M轉(zhuǎn)變時間縮短，加速細(xì)胞周期的轉(zhuǎn)換，使細(xì)胞過度增殖最終導(dǎo)致癌變，在食管癌、大腸癌的研究中也發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白的異常表達(dá)。由此可以推論CyclinB2和CDK1在細(xì)胞周期的調(diào)控和腫瘤細(xì)胞的形成中起到了重要的作用，且可能為消化道腫瘤發(fā)生過程中的一個較早的分子事件。通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，不同分化程度的腫瘤CyclinB2和CDK1表達(dá)差別無顯著性意義，這可能與本實驗選取的例數(shù)較少有關(guān)，在食道癌及喉癌中的表達(dá)情況恰恰相反，說明也存在著器官的差異性。CyclinB2和CDK1在人類多種腫瘤細(xì)胞表面過表達(dá)，并與細(xì)胞運動性及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔5〕。臨床研究表明，高表達(dá)CyclinB2和CDK1的乳腺癌、腎癌、肝癌及膽管癌等惡性腫瘤患者，其預(yù)后不良。然而CyclinB2和CDK1在胃癌中的預(yù)后意義研究較少〔2,6〕。Li等〔7〕研究結(jié)果支持本研究結(jié)論。而Kang等〔2〕研究中CyclinB2和CDK1表達(dá)水平與腫瘤T分期的相關(guān)性并無統(tǒng)計學(xué)差異，但CyclinB2和CDK1表達(dá)水平似乎隨著腫瘤T分期升高而增加。以上研究結(jié)果提示CyclinB2和CDK1高表達(dá)可能是腫瘤侵襲能力增強(qiáng)的表現(xiàn)。

本研究患者術(shù)后采用統(tǒng)一輔助化療方案，隨訪失訪率<10%，提示數(shù)據(jù)質(zhì)量較好。結(jié)果與國內(nèi)外研究〔2〕一致。但本研究并未發(fā)現(xiàn)CyclinB2和CDK1高表達(dá)與患者無復(fù)發(fā)生存率有關(guān)?？赡芘c本研究樣本量少、隨訪時間短有關(guān)，也可能與人群基因遺傳背景不同有關(guān)，尚待擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-08-12修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)