益艾康膠囊對鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影響

益艾康膠囊對鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影響

魏征1徐立然2

(河南省中醫(yī)藥研究院腫瘤科，河南鄭州450004)

摘要〔〕目的建立Friend型鼠白血病病毒(FLV)引起的BALB/C小鼠所致的免疫缺陷動物模型，探討益艾康膠囊對其免疫功能的影響。方法對FLV毒株傳代兩次，隨機(jī)分為FLV模型組、齊多夫定(ATZ)對照組、唐草片對照組、益艾康大中、小劑量組。模型組灌以等量生理鹽水，ATZ組按200 mg/kg體重灌胃，連續(xù)21 d。無菌取脾，測定脾/胸腺指數(shù)。結(jié)果與模型組相比，益艾康組對脾大均有較好的抑制作用，但效果稍遜于AZT組。益艾康組與唐草片組亦能增加胸腺重量，兩者之間沒有差異。結(jié)論益艾康膠囊可以抑制FLV致免疫缺陷小鼠的脾腫大，并降低脾指數(shù)，保護(hù)脾臟，且可以增加FLV致免疫缺陷小鼠胸腺重量和胸腺指數(shù)。

關(guān)鍵詞〔〕益艾康膠囊；鼠白血病病毒；胸腺指數(shù)；脾指數(shù)

中圖分類號〔〕R965.1；R975.5〔

基金項(xiàng)目：國家“十一五”科技重大專項(xiàng)基金資助(2008ZX10005-002)

通訊作者：徐立然(1959-)，男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)內(nèi)科學(xué)研究。

1南京中醫(yī)藥大學(xué)2河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

第一作者：魏征(1983-)，男，在讀博士，主治醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療惡性腫瘤研究。

獲得性免疫缺陷綜合征(艾滋病)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的傳染性疾病，其感染性強(qiáng)，死亡率高，以免疫系統(tǒng)損害和機(jī)會性感染為主要的特征，病變范圍可波及人體各重要器官和組織〔1〕。益艾康膠囊是導(dǎo)師夏祖昌教授帶領(lǐng)河南省中醫(yī)藥專家長期前往艾滋病高發(fā)區(qū)巡診后擬定的臨床經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效確切，后經(jīng)劑型改造，目前為國家《中醫(yī)藥治療艾滋病試點(diǎn)項(xiàng)目臨床技術(shù)》指定用藥，也是我國中醫(yī)藥治療艾滋病較大范圍使用的唯一中醫(yī)藥制劑〔2～4〕。艾滋病動物模型的探索開始于19世紀(jì)80年代，當(dāng)時的艾滋病模型主要有十二種〔5〕，但是隨著實(shí)踐的檢驗(yàn)，牛，羊，馬由于其臨床表現(xiàn)和艾滋病人的臨床表現(xiàn)差距較大，其體積龐大，不易飼養(yǎng)，培養(yǎng)周期長等原因已經(jīng)不適宜作為艾滋病的動物模型。現(xiàn)在全球艾滋病動物模型研究主要集中在猴免疫缺陷病毒(SIV)，貓免疫缺損病毒(FIV)和免疫缺陷鼠艾滋病模型(Murine AIDS)〔6，7〕。鼠白血病病毒——Friend leukaemia virus (FLV)是由Carlotte Friend教授于1957年在研究一種可以在小鼠間傳染的鼠白血病中發(fā)現(xiàn)的，是第一種被確認(rèn)可以在動物體內(nèi)引起腫瘤的病毒。由于FLV本身是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，又能夠在敏感小鼠體內(nèi)引起紅白血病和獲得性的免疫抑制，而成為研究腫瘤機(jī)制、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療以及病毒基因與宿主作用機(jī)制的常用小動物模型〔8～10〕。脾臟和胸腺是主要的免疫器官，病毒入侵后，脾臟和胸腺發(fā)生腫大，觀測胸腺指數(shù)和脾指數(shù)是為了更好地研究益艾康膠囊對免疫系統(tǒng)的影響〔11〕。

1材料與方法

1.1藥物與試劑益艾康膠囊：河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，主要由人參、山藥、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、黃芩等組成。國家中醫(yī)藥管理局《5省中醫(yī)藥治療艾滋病項(xiàng)目臨床技術(shù)方案》制劑，批件〔41豫Z20000009〕提供。齊多夫定(ATZ)：陽性西藥對照藥物；國藥準(zhǔn)字H20020322；東北制藥總廠；批號：071201。唐草片：陽性中成藥對照藥物；北京金衛(wèi)制藥股份有限公司生產(chǎn)，由木棉花、老鸛草、龍葵、金銀花、白花蛇舌草、糯稻根、黃芪、甘草、訶子等二十多味中藥組成。片劑，0.5 g/片，100片/瓶。國藥準(zhǔn)字H20040074，批號080301。FLV毒株，購自美國菌種保藏中心，并由北京中原公司在國內(nèi)代購。經(jīng)傳代后冷凍液氮罐中低溫保存。

1.2儀器Biofuge Fresco臺式離心機(jī)(德國賀力士) YJ-875醫(yī)用凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備公司) 分析天平(Metler AB204-E德國梅特勒)

1.3動物BALB/C小鼠76只，體重(16±2)g左右，雌性，由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SYXK(豫)2008-0012，同時提供飼料，50%～75%濕度下飼養(yǎng)小鼠3 w，隔2 d稱量小鼠體重一次。

1.4方法

1.4.1FLV免疫缺陷小鼠艾滋病模型制備取BALB/C小鼠，雌性，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 d后，將液氮罐中凍存的FLV感染小鼠的10%脾臟懸液取出，融化后用生理鹽水稀釋75倍，給小鼠腹腔注射0.5 ml脾懸液的稀釋液，并留出10只小鼠不接種作為正常對照組。接種過的小鼠按照體重隨機(jī)分為FLV模型組、ATZ組、唐草片組、益艾康大、中、小劑量組。常規(guī)喂養(yǎng)。小鼠接種第2天開始給藥。正常對照組和FLV模型組灌胃生理鹽水0.4 ml/d，益艾康大、中、小劑量組分別按照4、2、1 g·kg-1·d-1(相當(dāng)于臨床32、16、8倍)的劑量灌胃給藥。ATZ組按200 mg·kg-1·d-1劑量灌胃給藥，唐草片給藥體積為0.2 ml/10 g。每天給藥一次，連續(xù)給藥21 d。最后一次給藥后1 h，稱量小鼠體重，脫臼處死，無菌剖取脾臟和胸腺并稱重。

1.4.2脾指數(shù)和胸腺指數(shù)測定計算各組小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析。

2結(jié)果

2.1對脾重及脾指數(shù)的影響AZT組的脾臟接近于正常對照組，脾臟增大不明顯，其余各組均出現(xiàn)脾大，其中模型組脾大最明顯。和模型組相比，益艾康小、中劑量和唐草片組對脾大的抑制較好(P<0.05)，且益艾康小劑量組稍優(yōu)于唐草片組。和模型組對比，AZT組最小程度的減少脾指數(shù)。其次是益艾康中劑量組，接著是唐草片組、益艾康小劑量，益艾康大劑量組，說明益艾康中劑量組和唐草片組有相似降低脾指數(shù)的作用，但效果不如AZT組。見表1。

2.2對胸腺重量及胸腺指數(shù)的影響模型組的胸腺重量減少明顯，胸腺受抑制較顯著，余組均能一定程度的增加胸腺重量，抗病毒，減少對胸腺組織的損傷。AZT組胸腺重量接近于正常對照組(P>0.05)。益艾康小劑量組對胸腺的損害在余組中最小，其次是益艾康大劑量組。益艾康膠囊能夠增加胸腺重量，和唐草片組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義。模型組明顯抑制胸腺的大小，而AZT組能明顯地改善胸腺指數(shù)，接近正常對照組。益艾康膠囊組和唐草片組胸腺指數(shù)抑制效果接近，說明益艾康組能有效地降低胸腺指數(shù)，顯示其增強(qiáng)免疫的作用可能與增強(qiáng)胸腺指數(shù)有一定的關(guān)系，見表2。

表1　益艾康對小鼠脾重和脾指數(shù)的影響 ± s)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2　益艾康對小鼠胸腺重及胸腺指數(shù)的影響 ± s)

3討論

艾滋病“疫毒”侵犯五臟，首先犯脾。脾為后天之本，氣血生化之源，脾臟受損，脾臟運(yùn)化功能失常，氣血生化無源，從而導(dǎo)致五臟氣血陰陽俱虛，是貫穿艾滋病基本病機(jī)。五臟氣血陰陽俱虛，首先衛(wèi)外不能，易感外邪，其次五臟功能受損，則易產(chǎn)生痰飲水濕等變化。在艾滋病病變過程中，病機(jī)錯綜復(fù)雜，并非能以單一病機(jī)等加以概括。一般而言，艾滋病無癥狀期以正虛為主，當(dāng)出現(xiàn)機(jī)會性感染時，則多以邪實(shí)為主。

總之，通過對艾滋病中醫(yī)藥治療的臨床觀察，艾滋病之“疫毒”與中醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)意義上的“疫毒”在傳播途徑、病因性質(zhì)、病理變化等方面都有顯著不同，與傳統(tǒng)意義上的“虛勞病”亦有差別。一般而論，艾滋病無癥狀期，或其癥狀經(jīng)治療而緩解或消失后，其病機(jī)為五臟氣血陰虛俱虛，尤其是脾肺氣虛，即以正虛為主，當(dāng)臨床癥狀突出時，其病機(jī)則多以邪實(shí)為主或虛實(shí)夾雜，但也有以正虛為主者，如久瀉、久喘、長期發(fā)熱等。我們以上述理論為指導(dǎo)，對河南地區(qū)1000多例艾滋病患者進(jìn)行辨證論治，取得了較好療效〔12〕。

本實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)LV感染小鼠的脾重大小在一定程度上反映病毒對免疫系統(tǒng)的損害，脾指數(shù)是一個直觀而可靠的指標(biāo)。胸腺屬中樞免疫器官，是免疫細(xì)胞生成、發(fā)育，接受杭原刺激成熟的場所。益艾康膠囊能顯著增加FLV小鼠的脾指數(shù)，胸腺指數(shù)，增強(qiáng)動物的免疫力，效果和上市藥物唐草片沒有差別，但不如抗病毒藥物AZT。益艾康膠囊治療鼠艾滋病的機(jī)制有待進(jìn)一步深入細(xì)致地研究。

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〔2014-05-17修回〕

(編輯曹夢園)