桔?？傇碥湛勾笫蠓卫w維化作用的機(jī)制

桔?？傇碥湛勾笫蠓卫w維化作用的機(jī)制

王笑英韓玲干泳華

(吉林省人民醫(yī)院呼吸科，吉林長春130021)

摘要〔〕目的探討桔?？傇碥諏Ψ卫w維化大鼠的治療作用及可能機(jī)制。方法50只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組及高、中、低劑量桔?？傇碥战o藥組，每組10只；采用氣管內(nèi)注入博萊霉素法建立肺纖維化大鼠模型；高、中、低劑量給藥組分別灌胃給予400、200、100 mg/kg的桔?？傇碥眨?次/d，模型組及正常對照組灌胃給予等體積的生理鹽水；28 d后處死動物，取肺組織，評價(jià)桔?？傇碥諏Ψ谓M織纖維化程度、肺組織羥脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)水平的影響。結(jié)果模型組大鼠肺組織肺纖維化程度明顯，Hyp、MDA含量升高，SOD、GSH-Px含量降低，與正常對照組比較差異顯著(P< 0. 05)；而與模型組比較，桔?？傇碥崭鹘o藥組肺纖維化程度、肺組織Hyp、MDA水平顯著降低，肺組織SOD、GSH-Px水平顯著升高(P< 0. 05)。結(jié)論桔梗總皂苷對大鼠的肺纖維化具有一定的治療作用，該作用可能與其降低膠原合成及抗氧化作用有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕桔?？傇碥?；肺纖維化；抗氧化

中圖分類號〔〕R392.3〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

第一作者：王笑英(1962-)，女，主任醫(yī)師，主要從事肺癌及肺纖維化的基礎(chǔ)及臨床研究。

桔梗廣泛用于食品及支氣管炎、哮喘、肺結(jié)核等慢性疾病的治療〔1〕。桔梗皂苷為其主要活性成分，具有抗炎、抗病毒、保肝、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤等多方面的藥理作用〔2，3〕。研究〔4〕表明，桔梗皂苷對肝纖維化具有一定的保護(hù)作用，而關(guān)于其對肺纖維化的研究并不多見。本文以探討其對肺纖維化模型大鼠的治療作用及可能機(jī)制，以期為研究和開發(fā)以桔?？傇碥諡橹饕煞值闹委煼卫w維化的藥物奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料SD大鼠，180～220 g，由吉林大學(xué)驗(yàn)動物中心提供。50只SD大鼠，隨機(jī)分為正常對照組、肺纖維化模型組、桔?？傇碥崭?、中、低劑量組，每組10只。主要儀器有BX41型顯微圖像采集系統(tǒng)，日本Olympus公司；721型分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠。

1.2藥品及試劑桔?？傇碥沼砷L春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供(純度為91.2%)；注射用博萊霉素購自日本化藥株式會社(產(chǎn)品批號：Y32480)；羥脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)水平檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3方法

1.3.1模型制備采用氣管內(nèi)注入5 mg/kg博萊霉素后并迅速將大鼠直立旋轉(zhuǎn)的方法建立肺纖維化大鼠模型，正常對照組大鼠氣管內(nèi)注入等體積的生理鹽水。建模成功2 h后，高、中、低劑量給藥組分別灌胃給予400、200、100 mg/kg的桔?？傇碥眨?次/d；模型組及正常對照組灌胃給予等體積的生理鹽水。

1.3.2指標(biāo)檢測給藥28 d后，股動脈放血處死動物，完整取出肺組織。左肺經(jīng)10%的中性甲醛固定30 min，在下部矢狀面切取3～5 mm厚度的組織進(jìn)行石蠟包埋，制作切片，蘇木素-伊紅(HE)染色后，光鏡下觀察肺組織病理改變情況，并按照Szapiel的方法評價(jià)肺纖維化程度〔5〕。取右肺組織，加入適量預(yù)冷的生理鹽水，制備10%肺組織勻漿，3 500 r/min 4℃離心15 min，取上清液；按照試劑盒說明書中的操作步驟測定肺組織勻漿液中Hyp、SOD、GSH-Px及MDA水平。

2結(jié)果

2.1桔梗總皂苷對模型大鼠肺組織纖維化程度的影響正常對照組大鼠肺組織無明顯病理性改變；模型組大鼠肺組織可見炎癥細(xì)胞浸潤、肺泡結(jié)構(gòu)遭破壞明顯，并有大量成纖維細(xì)胞及纖維條索形成；與模型組比較，桔?？傇碥战o藥組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)明顯改善，炎癥細(xì)胞浸潤、成纖維細(xì)胞和膠原纖維均減少，肺纖維化程度顯著降低(P< 0.05)。見表1。

表1　桔梗總皂苷對模型大鼠肺組織

與正常對照組比較：1)P< 0.05；與模型組比較：2)P< 0.05；下表同

2.2桔梗總皂苷對模型大鼠肺組織Hyp含量的影響肺纖維化模型組〔(0.81±0.12)mmol/L〕與正常對照組〔(0.51±0.07)mmol/L〕比較，肺組織Hyp含量明顯升高(P< 0.05)；桔梗總皂苷高、中、低劑量給藥組Hyp含量〔(0.56±0.10)、(0.61±0.09)、(0.68±0.08)mmol/L〕與模型組比較顯著降低，并且具有劑量依賴關(guān)系(P< 0.05)。

2.3桔梗總皂苷對模型大鼠肺組織SOD、GSH-Px及MDA含量的影響與正常對照組比較，肺纖維化模型組大鼠肺組織勻漿液中SOD及GSH-Px水平顯著降低，而MDA水平明顯升高(P< 0.05)；給予高、中、低劑量的桔梗總皂苷治療后，SOD及GSH-Px水平與模型組比較顯著增加，而MDA水平與模型組比較顯著降低(P< 0.05)。見表2。

表2　桔梗總皂苷對模型大鼠肺組織SOD、

3討論

肺纖維化是具有相似病理過程的一類彌漫性肺間質(zhì)疾病的總稱，早期病理特征為彌漫性肺泡炎及肺泡結(jié)構(gòu)破壞，隨之細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，繼而進(jìn)展為彌漫性肺間質(zhì)纖維化，最終導(dǎo)致呼吸衰竭及病人死亡〔6〕。肺纖維化的發(fā)病率逐年遞增，發(fā)病原因至今未完全闡明，且缺乏有效的治療藥物；而西醫(yī)治療肺纖維化主要采用免疫抑制劑、激素等藥物，效果不理想、副作用較大；因此，尋找合適的中藥治療肺纖維化疾病成為目前研究的熱點(diǎn)〔7〕。本研究結(jié)果表明桔梗總皂苷對大鼠的肺纖維化具有一定的治療作用。

肺纖維化的一個(gè)重要特征是細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積，肺中膠原蛋白降解速度低于合成速度，使膠原纖維顯著增多，最終導(dǎo)致膠原過度積累。Hyp在膠原蛋白中占13.4%，是組成機(jī)體膠原蛋白的一種特有的氨基酸。幾乎所有Hyp都存在于膠原中，而膠原是肺纖維化時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，故Hyp水平可以反映肺組織纖維化的程度〔8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桔?？傇碥諏Υ笫蠓卫w維化的治療作用可能與其降低膠原合成有關(guān)。氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，肺纖維化患者肺組織中SOD、GSH-Px水平降低，MDA水平升高〔9〕。SOD、GSH-Px為低分子清除劑，可清除H2O2和超氧陰離子，從而起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能完整的作用，其含量多少是衡量機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)〔10〕。MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，可以反映機(jī)體過氧化程度，也可以破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞腫脹壞死〔11〕。本研究結(jié)果表明，桔梗總皂苷對大鼠的肺纖維化的治療作用可能與其抗氧化作用有關(guān)。

綜上所述，桔?？傇碥諏Υ笫蟮姆卫w維化具有一定的治療作用，該作用可能與其降低膠原合成及抗氧化作用有關(guān)。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-12-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)