糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP與微循環(huán)相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)中藥的干預(yù)作用
趙蕓蕓張文風(fēng)王秀閣1
(長春中醫(yī)藥大學(xué),吉林長春130117)
摘要〔〕目的觀察糖尿病(DM)大鼠坐骨神經(jīng)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)與微循環(huán)相關(guān)性及益氣活血通絡(luò)方的干預(yù)作用。方法采用鏈脲佐菌素復(fù)制DM大鼠模型,并隨機分為模型組、中藥組、彌可保組,同時設(shè)正常對照組。觀察益氣活血通絡(luò)中藥對大鼠血液流變學(xué)、坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量的影響。結(jié)果DM大鼠血液流變學(xué)、坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量均發(fā)生改變,益氣活血通絡(luò)方藥對二者有明顯改善作用。結(jié)論DM大鼠血液流變學(xué)與坐骨神經(jīng)改變cAMP、cGMP含量具有相關(guān)性,益氣活血通絡(luò)中藥通過對二者的改善從而防治DM周圍神經(jīng)病變。
關(guān)鍵詞〔〕糖尿??;血液流變學(xué);cAMP、cGMP;益氣活血通絡(luò)方
中圖分類號〔〕R285.5〔文獻標(biāo)識碼〕A〔
基金項目:吉林省科技發(fā)展計劃項目(No.20140311001YY);長春市科技計劃項目(No.2013374)
通訊作者:張文風(fēng)(1970-),女,博士后,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事中藥復(fù)方的配伍及機制研究。
1長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院
第一作者:趙蕓蕓(1992-),女,在讀本科,主要從事中藥復(fù)方的配伍及機制研究。
血液流變學(xué)是糖尿病(DM)診斷、治療、療效觀察的客觀指標(biāo)之一〔1〕,其異常變化對DM的慢性并發(fā)癥發(fā)生及發(fā)展影響較大。以往研究表明,益氣活血通絡(luò)方可以降低DM大鼠血糖、提高其體重、坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度、改善血清胰島素、C肽以及抑制細胞凋亡等作用〔2~8〕。本文探究DM大鼠血液流變性與坐骨神經(jīng)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量相關(guān)性及其作用,旨在揭示中藥復(fù)方的作用機制。
1材料與方法
1.1模型的建立雄性健康Wistar大鼠,體重(240±20)g。適應(yīng)性飼喂1 w后,禁食12 h,將鏈脲佐菌素臨用配成2%濃度溶液,按劑量50 mg/kg左下腹腔內(nèi)單次注射,72 h后取尾血測血糖,血糖≥16.7 mmol/L作為DM大鼠。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后將成模大鼠隨機分為模型組、中藥組、彌可保組各10只。并取體重、鼠齡相匹配的同批血糖值在正常范圍內(nèi)正常大鼠10只作為正常對照組。連續(xù)觀察8 w后處死。由于高血糖及并發(fā)感染,模型組死亡3只,彌可保組死亡2只,中藥組死亡1只。
1.2實驗設(shè)備AnkeTDL-5-A型離心機(上海醫(yī)療器械有限公司),GC-911-r-放射免疫計數(shù)器(中國科技大學(xué)實業(yè)總公司),F(xiàn)ASCO-3010全自動血液流變快測儀(重慶大學(xué)維多生物工程研究所)。
1.3藥品及試劑益氣活血通絡(luò)方組成藥物(黃芪、桂枝、生地、水蛭)均購于長春市同仁堂藥房,長春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定,煎制成2 g/ml,置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。cAMP、cGMP放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術(shù)研究所,批號121020、121026)。
1.4血液流變學(xué)檢測大鼠麻醉后,腹主動脈取血,肝素抗凝,應(yīng)用FASCO-3010全自動血液流變快測儀測定。
1.5大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP檢測大鼠在麻醉狀態(tài)下,切開雙側(cè)股后部皮膚,分離出雙側(cè)坐骨神經(jīng)。剪下后快速放入干冰中保存。在冰浴環(huán)境下,將坐骨神經(jīng)放入盛有2 ml冷的0.05 mol/L醋酸緩沖液(pH 4.75)的勻漿器內(nèi),將組織粉碎后,懸浮液倒入10 ml試管內(nèi),用2 ml無水乙醇洗勻漿器,然后將乙醇倒入懸浮液中混勻,靜止5 min,3 500 r/min離心15 min,將上清液收集在小瓶內(nèi),用2 ml 75%乙醇洗勻漿器和沉淀2次,混勻,3 500 r/min離心15 min,合并上清液,60℃水浴中吹干,殘渣放于4℃保存。嚴(yán)格按照試劑測定盒的要求檢測。
1.6統(tǒng)計學(xué)方法選用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析和q檢驗。
2結(jié)果
2.1各組大鼠血液流變學(xué)變化與正常對照組相比,模型組、中藥組、彌可保組大鼠全血度、紅細胞聚集指數(shù)及剛性指數(shù)明顯升高(P<0.05);與模型組相比,中藥組顯著差異,而彌可保組沒有顯著差異,見表1。
2.2各組大鼠坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量的變化與模型組相比,中藥組動物的cAMP、cGMP含量明顯升高(P<0.05);中藥組與彌可保組相比無顯著差異(P>0.05),見表1。
表1 各組大鼠血液流變學(xué)及CAMP、CGMP變化的比較
與正常對照組比較:1)P<0.01,2)P<0.05;與模型組比較:3)P<0.01,4)P<0.05
3討論
DM存在著不同程度的血液流變學(xué)改變。研究表明,DPN時神經(jīng)血流灌注減少且神經(jīng)內(nèi)膜缺氧,神經(jīng)微血管也有不同程度的病變發(fā)生,這些異常變化的程度與神經(jīng)病理變化和臨床癥狀程度極為相關(guān)。
cAMP、cGMP廣泛存在于動物機體的各種組織中。cAMP具有各種調(diào)節(jié)功能,神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量下降的同時,Na+-K+-ATP酶的活性也降低,將影響神經(jīng)的正常動作電位,使神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢。cGMP信號的產(chǎn)生是鳥苷酸環(huán)化酶(GC)催化的,其中的一類胞內(nèi)可溶性環(huán)化酶與NO的傳導(dǎo)有關(guān),NO有使血管舒張的作用〔9〕。
益氣活血通絡(luò)方由黃芪、水蛭、葛根、生地組成。研究表明,黃芪可擴張血管,改善血行增強機體免疫力;水蛭可抗血栓形成、抗凝血、降血脂、改善血液流變學(xué)和微循環(huán);葛根可改善微循環(huán)、擴張血管、增加血流、提高局部血流量。本研究結(jié)果表明,DM大鼠血液流變性及坐骨神經(jīng)cAMP、cGMP含量變化。血液流變性改變表現(xiàn)為血黏度升高,紅細胞聚集指數(shù)及剛性指數(shù)發(fā)生變化。血液流變性變化的同時伴隨神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量降低,證實了二者的相關(guān)性。
益氣活血通絡(luò)方能改善DM大鼠血液流變性,升高神經(jīng)組織中cAMP、cGMP含量,可能是其促進神經(jīng)軸突的再生和修復(fù)的作用及機制之一。
4參考文獻
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〔2014-10-17修回〕
(編輯李相軍/滕欣航)