牛蒡子萃取物對大鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用

牛蒡子萃取物對大鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用

隋欣邱智東李輝1楊永剛朱凱徐可進楊擎李娜

(長春中醫(yī)藥大學研發(fā)中心，吉林長春130117)

摘要〔〕目的探討牛蒡子超聲萃取物(Ufa)對線栓法致大腦中動脈栓塞(MCAO)模型的影響。方法將大鼠隨機分為假手術組(n=8)、腦缺血模型組(n=8)、陽性對照組(銀杏葉分散片，0.5 g/kg，n=8) 及 Ufa 0.4、0.2、0.1 g/kg 3個劑量組(n=8)。結扎大腦中動脈制備MCAO模型，術后灌胃給藥7 d，以神經學評分及腦梗死體積為指標觀察Ufa對大鼠局灶性腦缺血性損傷的保護作用；同時測定大鼠腦組織一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、過氧化脂質(LPO)含量。結果與模型組相比，Ufa高、中劑量組神經功能學評分明顯改善(P<0.05)。Ufa高劑量組腦梗死體積明顯降低(P<0.01)；Ufa各劑量組大鼠血清LPO、NO及MDA含量明顯降低(P<0 .05 或P<0 .01)。結論Ufa可以改善MACO模型動物的神經功能障礙，減少腦梗死體積?？寡卓赡転槠渥饔猛緩?。

關鍵詞〔〕牛蒡子；超聲萃取物；腦缺血；腦梗死體積

中圖分類號〔〕R743.3〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：吉林省教育廳資助項目〔吉教科合字(2014)第98號〕

通訊作者：李娜(1978-)，女，副研究員，主要從事分子藥理學研究。

1吉林省前衛(wèi)醫(yī)院

第一作者：隋欣(1984-)，女，博士在讀，主要從事中藥藥劑學研究。

牛蒡子味苦、辛，性寒、歸肺胃二經，是臨床上常用的中草藥，主要的功效有消腫利咽，透疹解毒，疏散風熱〔1，2〕。藥理研究發(fā)現牛蒡子還具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌、抗氧化、抗凋亡等藥理作用作用〔3〕。本研究通過線栓法制備大腦中動脈栓塞(MCAO)模型大鼠，考察牛蒡子超聲萃取物對MCAO模型大鼠腦梗死體積及炎癥等相關指標的影響，探討牛蒡子治療腦缺血的保護作用及機制。

1材料與方法

1.1實驗動物Wistar清潔級雄性大鼠，體重(220±20)g，由吉林大學動物中心提供〔動物合格證號：SCXK-(吉)2013-0005〕，飼養(yǎng)條件：室溫20℃～25℃，濕度40%～50%，動物自由進食及飲水，自然晝夜節(jié)律，飲用水為凈化水。

1.2實驗藥品及儀器牛蒡子超聲萃取物(由長春中醫(yī)藥大學研發(fā)中心提供，水∶牛蒡子體積比9∶1，60℃超聲萃取2 h)；銀杏葉分散片(湖南方盛制藥股份有限公司)；水合氯醛(沈陽市試劑三廠)；肝素(北京鼎國生物技術有限公司)；JA2003B電子天平(上海越平科學儀器有限公司)；DY89-Ⅱ電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；Centrifuge 5810R 冷凍離心機(德國艾本德有限公司)；紅四氮唑(TTC)(上海KAYON生物技術有限公司)；過氧化脂質(LPO)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)酶聯免疫吸附法(ELISA)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3實驗方法大鼠用10%水合氯醛0.35 ml/100 g體重，腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術臺上，四肢線繩固定，頸部消毒，正中切口，鈍性分離甲狀腺，將其上翻無菌紗布加以保護，分離右側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)，結扎CCA近心端，于ICA近心端置一動脈夾，于CCA遠心端備線，參照Zea Longa等〔4〕描述的方法，制備大鼠MACO模型。假手術組不插入線栓，采用假手術方式后，手術后縫合傷口。按Bederson的行為學評分法評分〔5〕，篩選出評分在2分以上為模型制備成功的模型大鼠，隨機分為模型組、陽性對照組(銀杏葉分散片0.50 g/kg)、Ufa高、中、低劑量組(0.4、0.2、0.1 g/kg)每組8只，另增加假手術組(只做手術不插線栓)8只作為對照。給藥體積為1 ml/100 g。各組均采用同體積不同濃度灌胃給藥。假手術組及模型組灌胃等體積蒸餾水。每天1次，連續(xù)7 d。

1.4大鼠神經功能評分采用 Bederson〔6〕的行為學評分法進行神經功能評分。評分標準如下：①無神經損傷癥狀，0分；②不能完全伸展對側前爪，1分；③向對側轉圈，2分；④向對側傾倒，3分；⑤不能自發(fā)行走，意識喪失，4分。

1.5腦梗死范圍的測定將大鼠處死后，于冰臺上取出大腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，于-20℃冰箱中冷凍20 min左右，取專用腦切片刀對冷凍的腦組織進行切片，切片厚度2.5 cm。然后迅速放入2%TTC溶液中，37℃避光溫孵30 min，每隔7～8 min翻動一次，使切好后的腦片均勻接觸到TTC染色液中。溫孵完畢后將腦片置于10%甲醛溶液中避光固定保存。24 h后用數碼相機拍照，用計算機圖像處理軟件計算腦缺血面積，最后對每片腦片的體積進行求和，算出的是整個腦組織的梗死體積。

1.6統(tǒng)計學處理使用SPSS16.0軟件行t檢驗。

2結果

2.1神經功能學評分測定結果造模前各組神經功能學評分無明顯差異(P>0.05)。給藥后的各組神經功能學評分除假手術組和模型組外，各組均有不同程度的降低。與模型組比較，陽性對照組、Ufa高、中、低劑量組神經功能學評分具明顯改善(P<0.05)，見表1。

2.2腦梗死體積測定結果與假手術組比較，模型組大鼠腦梗死體積顯著性升高(P<0.001)；與模型組比較，陽性對照組、Ufa高、中劑量組腦梗死體積顯著降低(P<0.01，P<0.05)，見表1，圖1。

表1　各組局灶性腦缺血大鼠的神經學評分及

與假手術組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

1～6：假手術組；模型組；陽性對照組；Ufa低、中、高劑量組 圖1　Ufa對MCAO大鼠腦缺血面積的影響(TTC染色)

2.3腦組織勻漿中MDA、LPO、NO的含量測定與模型組比較，Ufa高劑量組MDA和LPO、NO含量降低(P<0.05，P<0.01),見表2。

表2　各組大鼠腦組織勻漿中LPO、MDA、NO含量

3討論

腦動脈的阻塞是腦缺血損傷的主要表現為，能夠使腦組織缺乏血液供應，引起腦部供血供氧不足，加重腦缺血疾病的嚴重發(fā)生〔7〕。其早期主要表現為細胞內大量鈣離子堆積、線粒體功能障礙、細胞離子受損、活化溶酶、細胞逐漸水腫及崩解等死亡過程〔8〕。

腦缺血后通過進行神經功能缺損評分，測定腦含水量，計算腦梗死體積來考察腦缺血損傷的程度是研究藥物對腦缺血模型動物的有力工具〔9〕。牛蒡子中含有牛蒡甙，水解生成牛蒡甙元及葡萄糖；又含羅漢松脂酚，絡石甙元，倍半木質素AL-D及AL-F、脂肪油等多種有效成分，有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌、降血糖等作用〔10〕。本研究結果提示，牛蒡子對局灶性腦缺血大鼠腦組織的損傷具有明顯的保護作用，其機制可能涉及抗炎作用，但具體機制尚有待于進一步的研究。本研究為牛蒡子萃取物治療腦缺血的有效性提供了可靠的理論基礎和實驗依據，為今后安全有效的利用牛蒡子及開發(fā)奠定了基礎。

4參考文獻

1許順江，張建新，李蘭芳，等.一氧化氮合酶抑制劑對早期缺血性損傷影響的研究〔J〕.中國藥理學通報，2000;16(6):645-8.

2顏正華.中藥學〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，1995:89.

3王海燕，楊俊山.牛蒡子化學成分的研究〔J〕.藥學學報，1993；28(2):911-7.

4Zea Longa E，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕.Stroke，1989；20(1):84-91.

5Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M，etal.Rat middle cerebral artery occlusion;evaluation of the modle and development of a neurologic examination〔J〕.Stroke，1986；17(3):472-6.

6張國瑾.國外腦血管疾病研究進展〔M〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版，2000：157-9.

7Aufmann AM，Firlik AD，Fukui MB，etal.Ischemic score and penrmbrain human stroke〔J〕.Stroke，1999；30(1):93-9.

8黃龑.草藥牛蒡子可降低機體組織MDA含量的研究〔J〕.南京體育學院學報，2011；10(3):29-31.

9姜德華，金男革，玄漢石，等.大鼠急性局灶性腦缺血再灌注腦組織NO含量和NOS活性的變化〔J〕.臨床神經病學雜志，2000；13(4):201-3.

10臧召霞.牛蒡子復方制劑對大鼠腦缺血再灌注后Caspase-3表達的影響〔J〕.黑龍江醫(yī)藥，2010；23(1)：48-9.

〔2014-05-17修回〕

(編輯李相軍)