王不留行對去勢大鼠骨密度和骨代謝指標的影響

王不留行對去勢大鼠骨密度和骨代謝指標的影響

黃庭惠伍楊1鄭永梅

(恩施市中心醫(yī)院,湖北恩施445000)

摘要〔〕目的評價中藥王不留行對去勢大鼠骨質(zhì)疏松的防治效果。方法采用去卵巢建立大鼠骨質(zhì)疏松模型。60只雌性大鼠，分假手術(shù)組、模型組(去除卵巢)，雌二醇(E2)組(去除卵巢+尼爾雌醇)、藥物組(去卵巢+王不留行)。術(shù)后3個月，雙能X線吸收法(DEXA)測量大鼠骨密度(BMD)、骨礦含量(BMC)；取大鼠血、尿檢測骨代謝指標。結(jié)果與模型組比較，藥物組BMD和BMC有顯著提高。藥物組骨鈣素(BGP)、骨堿性磷酸酶(ALP)明顯升高，同時尿鈣/肌酐、尿磷/肌酐、尿羥脯氨酸/肌酐、尿Ⅰ型膠原羧基末端肽/肌酐均降低。結(jié)論王不留行可以有效地阻止去勢骨質(zhì)疏松大鼠的骨量丟失，具有促進骨形成，抑制骨吸收的作用，對去勢大鼠骨質(zhì)疏松有較好的防治作用。

關(guān)鍵詞〔〕王不留行；骨質(zhì)疏松；骨密度；骨代謝指標

中圖分類號〔〕R285.6〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：湖北省自然科學(xué)

通訊作者：伍楊(1962-)，女，副教授，主要從事老年病相關(guān)免疫學(xué)機制研究。

1湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院

第一作者：黃庭惠(1973-)，女，主管護師，主要從事老年護理與保健研究。

骨質(zhì)疏松是常見的代謝性疾病，雌激素的缺乏是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMO)發(fā)病中的重要因素。雌激素替代療法(ERT)是防治PMO的有效方法，但長期大量使用有一定的副作用〔1〕，因此，選用副作用小的中藥防治PMO已成為一個研究熱點。一些植物雌激素有著和天然雌激素相似的作用，在對傳統(tǒng)中藥王不留行化學(xué)成分的研究中，桑圣明等〔2〕從王不留行中分離出有較強雌激素樣活性的環(huán)肽成分。本實驗通過觀測王不留行對去勢大鼠骨密度(BMD)和骨代謝指標的影響來客觀評價王不留行對去勢大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用。

1材料與方法

1.1實驗動物3月齡清潔級Wsitar雌性大鼠60只，體重180～220 g，由湖北省實驗動物研究中心提供。動物合格證號：SCXK(鄂)2003～005。

1.2藥物及試劑王不留行藥材購自恩施州恒信醫(yī)藥公司，于常壓下，用10倍于藥材體積的開水將王不留行浸泡1 d，然后過濾去渣，將藥物濃縮至所需濃度。尼爾雌醇(片劑，每片1 mg，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn))，使用前配成0.01 mg/ml的溶液。血骨鈣素(BGP)、堿性磷酸酶(ALP)、尿鈣、磷、尿羥脯氨酸、尿Ⅰ型膠原羧基末端肽(CTX)、肌酐(Cr)檢測試劑盒均購自北京康源瑞得生物科技有限公司。

1.3儀器QDR-4500型雙能X線骨密度儀(美國Hologl公司)，中佳光電GC-1200γ放射免疫計數(shù)器，TP-1000電子天平(湘儀天平儀器廠)。

1.4分組及選模方法將大鼠稱重后除正常對照組(n=10)外，其余50只大鼠均以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(0.1 ml/100 g體重)，背部肋下切開皮膚、肌肉、暴露腹腔，找出卵巢，假手術(shù)組(10只)保留，其余大鼠切除雙側(cè)卵巢。術(shù)后1 w行陰道涂片，確定無動情周期變化者為選模成功，選模成功大鼠隨機分為3組：模型組、雌二醇(E2)組(去除卵巢+尼爾雌醇)、藥物組(去卵巢+王不留行液)，各組10只。E2組予以尼爾雌醇按人鼠體表面積比率折算1倍等效劑量〔3〕，合0.01 mg/ml的混懸液，每周1次(周內(nèi)第1天使用)，其余時間每天灌胃等量飲用水；藥物組予以0.4 g/ml王不留行水浸液2 ml(相當于生藥40 g)，每天1次灌服，連續(xù)6 d，休息1 h給藥時間為3個月。期間各組大鼠同樣環(huán)境分籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水。飼養(yǎng)環(huán)境：室內(nèi)溫度控制在(20±2)℃,標準飼料。

1.5標本制備大鼠處死前1 d置于代謝籠中收集24 h尿液，-10℃保存待測。3% 戊巴比妥鈉麻醉后，斷頭處死大鼠，取血，3 000 r/min離心10 min，分離血清，置-40℃保存待檢。

1.6檢測指標和方法所有動物3% 戊巴比妥鈉麻醉后置于掃描定位板上，于QDR-4500型雙能X線密度儀測定腰椎、股骨及全身BMD和骨礦含量(BMC)。按試劑盒說明測定血BGP、ALP、尿鈣、磷、尿羥脯氨酸、尿Ⅰ型CTX。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1王不留行對去勢大鼠全身、股骨、腰椎BMD的影響模型組大鼠腰椎、股骨和全身BMD與正常對照組比較明顯降低(P<0.01)；藥物組、E2組與模型組比較，全身及腰椎、股骨BMD有顯著差異(P<0.01)。見表1。

2.2王不留行對去勢大鼠BMC的影響模型組與正常對照組比較BMC量明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組骨礦含量有顯著性提高(P<0.01)。見表2。

2.3王不留行對去勢大鼠血清BGP、ALP含量的影響模型組大鼠血清BGP、ALP含量與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組大鼠血清BGP、ALP含量明顯降

低(P<0.01)；藥物組、E2組明顯沒有差異。見表3。

2.4王不留行對去勢大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥氨酸/Cr、CTX/Cr的影響模型組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，藥物組、E2組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr明顯降低(P<0.01)；藥物組、E2組明顯沒有差異。見表4。

表1　王不留行對去勢大鼠全身、股骨、腰椎BMD的

與模型組比較：1)P<0.01

表2　王不留行對去勢大鼠BMC的影響

與正常對照組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；下表同

表3　各組大鼠血清BGP、ALP含量比較

表4　各組大鼠24 h空腹尿鈣、鈣/Cr、磷/Cr、羥脯氨酸/Cr、CTX/Cr的比較

3討論

2000年美國國立公共衛(wèi)生研究所(NIH)召開的骨礦會議上，認為骨質(zhì)疏松是指因為骨強度的問題而引發(fā)骨折增加骨骼疾病。骨強度是由BMD和骨質(zhì)量綜合決定的。骨質(zhì)量評價依賴于DEXA評價和骨代謝標志物檢測。目前，DEXA是世界公認的診斷骨質(zhì)疏松的金標準〔4〕。骨代謝標志物，血清BGP是成骨細胞合成分泌的特殊蛋白，其功能是維持骨的正常礦化率，為反映骨形成的靈敏指標，BGP由成骨細胞合成后，約20%從骨組織直接進入血液，因此血中BGP的濃度可以反映骨中BGP的狀態(tài)。血清ALP主要來自骨和肝，ALP是成骨細胞成熟早期的標志物，可反映骨形成?？崭鼓蜮}、磷主要來源于骨鹽的分解，故其排出量可反映骨吸收的狀況。尿羥脯氨酸的排泄量為骨吸收的指標；CTX是反映骨吸收狀態(tài)的特異指標。治療后骨吸收標志物減少能反映長期的骨折風險減小。因此，骨代謝標志物不僅作為評價量質(zhì)量，預(yù)測骨折率的手段，且正在成為評價骨吸收藥物藥效的手段〔5〕。

本實驗結(jié)果顯示，中藥王不留行能有效改善去勢骨質(zhì)疏松大鼠BMD和BMC，其治療效果與尼爾雌醇無明顯差異，王不留行既可以促進骨形成，又可以抑制骨吸收，對去勢大鼠骨質(zhì)疏松有較好的防治作用，是一種有研究和應(yīng)用前景的天然藥物。本實驗結(jié)果表明王不留行可顯著降低去勢大鼠白細胞介素(IL)-1、IL-6、TNF-α的水平〔6〕。而雌激素水平降低則可使這些細胞因子分泌增加，王不留行可能經(jīng)其雌激素樣作用而改善去勢大鼠骨質(zhì)疏松癥狀，其防治骨質(zhì)疏松的機制有待進一步的實驗和臨床研究。

4參考文獻

1劉建立.應(yīng)用雌激素防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的問題〔J〕.國際內(nèi)分泌代謝雜志，2006；26(4)：230-2.

2桑圣明，榮愛娜，王洪誠，等.中藥王不留行化學(xué)成分的研究(Ⅱ) 〔J〕.中草藥，2000；31(3):1-4.

3苗明三.實驗動物和動物實驗技術(shù)〔M〕.北京：中藥中醫(yī)藥出版社，1997：143-4.

4馮秉瑋，高雨紅.源發(fā)性骨質(zhì)疏松的診斷現(xiàn)狀〔J〕.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2004；36(1)：37-40.

5于麗，蘇秀蘭，畢力夫.骨代謝指標和骨質(zhì)疏松〔J〕.中國骨質(zhì)疏松雜志，2006；12(3)：307-9.

6伍楊，鄧明會，陳顯兵.王不留行防治去勢大鼠骨質(zhì)疏松癥的實驗研究〔J〕.四川中醫(yī)，2010；28(5)：58-9.

〔2014-01-07修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)