利用原子熒光光譜法檢測(cè)雛雞肝臟硒含量

利用原子熒光光譜法檢測(cè)雛雞肝臟硒含量

劉哲盧義梁建斌1于德斌1武瑞1

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江大慶163319)

摘要〔〕目的硒作為人和動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的必需的微量元素，影響了動(dòng)物的消化系統(tǒng)，探討雛雞肝臟硒含量的檢測(cè)方法。從而為硒缺乏的測(cè)定，為以后的科研實(shí)驗(yàn)做充分準(zhǔn)備。方法以雛雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用原子熒光吸收法測(cè)量雛雞全血及肝臟中的硒含量。建立低硒雛雞模型。結(jié)果第3天試驗(yàn)組血漿及肝臟組織的硒含量明顯減少，并且缺硒組7 d、14 d 血漿與肝臟硒含量依次遞減。正常組雛雞血硒及肝臟內(nèi)硒含量正常。由此結(jié)果可確定低硒雛雞模型復(fù)制成功。結(jié)論結(jié)果表明氫化物原子熒光光譜法測(cè)定雛雞血漿與肝臟中硒含量具有精確、靈敏、干擾小、成本低等優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞〔〕硒；原子熒光光譜法

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R826.15〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)

通訊作者：武瑞(1967-)，男，教授，博士，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與臨床獸醫(yī)學(xué)研究。

1黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院

第一作者：劉哲(1978-)，女，在讀博士，主要從事細(xì)胞凋亡及臨床獸醫(yī)學(xué)研究。

The detection of chickling selenium content by atomic fluorescence spectrometry

LIU Zhe,LU Yi,LIANG Jian-Bin,etal.

Heilongjiang Bayi Agricaltural University,Daqing 163319,Heilongjiang,China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the detection method of selenium in chicken liver.MethodsAtomic fluorescence absorption was used to measure selenium content in chicks plasma and liver，and low selenium chicks model was set up. Results At the third day,the selenium content of plasma and liver tissue of experimental group were decreased significantly;and at 7th,14th day,the selenium contents of selenium deficiency group were reduced in plasma and liver. The selenium contents in the liver and blood of normal group were normal.The low selenium chicks model was copied successfully.ConclusionsThe determination of selenium contents in chicken blood and liver by hydride atomic fluorescence spectrometry has advantages of accuracy,sensitivity,interference and low cost.

【Key words】Selenium;Atomic fluorescence spectrometry

硒作為人和動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的必需微量元素，對(duì)維持生命活動(dòng)和提高生產(chǎn)性能發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。但硒的最佳攝入量仍不明確，不合理的補(bǔ)充硒可能會(huì)危害人體的健康〔1，2〕。本文以雛雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用原子吸收法測(cè)量雛雞血及組織中硒含量，建立低硒雛雞模型，為以后的科研實(shí)驗(yàn)做充分準(zhǔn)備。

1材料和方法

1.1試劑與儀器氫氧化鈉，5%HCl，硫酸，過(guò)氧化氫溶液，Se標(biāo)準(zhǔn)溶液 GBW(E)，3.0%KBH4，均購(gòu)自上海生工公司。雙道原子熒光光度計(jì)AFS-920型，北京吉天儀器有限公司； DL-10型離心機(jī)：上海安亭儀器有限公司；AL204型電子天平：梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

1.2日糧組成實(shí)驗(yàn)組(A組)組飼喂低硒飼料，以低硒玉米-豆粕型為基礎(chǔ)日糧，其他成分按8730商品代蛋用雛雞飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配置。對(duì)照組(B組)予8730商品代蛋用雛雞飼料。

1.3動(dòng)物與分組日齡SPF蛋用雛雞120只，公母各半，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組飼喂低硒飼料，觀察組飼喂正常硒水平飼料。飼喂14 d，動(dòng)物飼養(yǎng)于室溫20℃±2℃，相對(duì)濕度40%～50%，嚴(yán)格參考雛雞飼養(yǎng)管理要求進(jìn)行，第1周用開(kāi)料盤(pán)，第2周用料槽自由采食和飲水。加強(qiáng)環(huán)境管理，確保試驗(yàn)動(dòng)物不受外來(lái)病原微生物的影響。

1.4測(cè)定飼料、血漿及肝臟中的硒含量在飼養(yǎng)3、7、14 d時(shí)間點(diǎn)，分別從兩組隨機(jī)挑選9只雛雞，采血，加抗凝保存，檢測(cè)血漿、肝臟組織中硒含量(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)分析測(cè)試中心檢測(cè))。檢測(cè)條件：倍增管伏高壓300 V，原子化器高度8 mm，燈電流50 mA，載氣流速1 000 ml/min，原子化器高度11 mm；注入量0.5 ml。還原劑3.0%KBH4，試液介質(zhì)5%HCl。使用雙道原子熒光光度計(jì)在31℃ 54%RH下低硒樣品呈深紅色液體，對(duì)照組為深紅棕色液體。標(biāo)準(zhǔn)濃度(ng/ml)分別為1.0、2.0、4.0、8.0～10.0 ng/ml時(shí)，熒光強(qiáng)度分別為82.95%、148.41、309.44、593.41、769.35，載距：1.443 4，斜率：75.795 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

圖1　標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

精密度：在重復(fù)條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。A1～A3：實(shí)驗(yàn)組血漿樣品；A4～A6：實(shí)驗(yàn)組肝臟； B1～B3：對(duì)照組血漿樣品；B4～B6：對(duì)照組肝臟樣品，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1(空白之夜熒光值均為32.66)。計(jì)算公式：X=〔(C1-C0)×V〕÷(m×1 000)試樣體積(V)A1～A3、B1～B3均為12.5 ml，A4～A6、B4～B6均為25 ml。

表1　樣品硒含量的檢測(cè)參考值

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析組間比較行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2. 1飼料硒含量的測(cè)定日糧硒含量檢測(cè)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組是0.01 mg/kg；對(duì)照組是0.40 mg/kg。對(duì)照組是實(shí)驗(yàn)組的40倍。

2.2血漿與肝臟硒含量的測(cè)定血漿硒含量在3、7 d差異顯著(P<0.05)，在14 d差異均顯著(P<0.01)；肝臟中硒含量在3、7、14 d差異均顯著(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　血液與肝臟中硒含量的檢測(cè)結(jié)果( ± s, n=9)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01

3討論

動(dòng)物體內(nèi)正常硒含量為0.05～0.2 μg/g，克山病病區(qū)等缺硒病發(fā)生地區(qū)的居民體內(nèi)硒含量為0.074 μg/g。適宜水平Se的攝入有益健康。本結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組肝臟組織的硒含量明顯減少，并且7、14 d血漿與肝臟硒含量依次遞減。3、7、14 d 對(duì)照組血漿硒含量分別是實(shí)驗(yàn)組的1.85、3.05、4.46倍多，3、7、14 d 對(duì)照組肝臟硒含量是實(shí)驗(yàn)組的3.41、3.55、4.09倍多〔3，4〕。

1至3日齡時(shí)，由母體而來(lái)的硒尚可提供最基本的代謝需求，持續(xù)的低硒攝入可導(dǎo)致體內(nèi)硒逐漸耗竭。隨著試驗(yàn)期延長(zhǎng)，其血硒含量隨時(shí)間推移遞減，肝臟硒含量也隨之偏低。缺硒組肝臟病變漸趨嚴(yán)重，組織出血、壞死。低硒雛雞生長(zhǎng)緩慢，還往往發(fā)生貧血和低蛋白血癥，且出現(xiàn)消化問(wèn)題，其血硒含量隨時(shí)間推移遞減，肝臟硒含量也隨之偏低〔5〕。正常雛雞生長(zhǎng)正常，并沒(méi)有消化吸收問(wèn)題，血硒含量為0.1 mg/kg以上，肝臟內(nèi)硒含量正常。由此結(jié)果可確定低硒雛雞模型復(fù)制成功。因此，本結(jié)果表明，氫化物原子熒光光譜法測(cè)定雛雞血漿與肝臟中硒含量具有精確、靈敏、干擾小、成本低等優(yōu)點(diǎn)。

4參考文獻(xiàn)

1郝玉波，劉華琳，慈曉科，等. 施硒對(duì)兩種類(lèi)型玉米硒元素分配及產(chǎn)量、品質(zhì)的影響〔J〕.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2012；23(2)：411-8.

2李秀華，劉雪楓，劉晉敏. 食物中硒含量測(cè)定與分析質(zhì)量控制〔J〕.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001；4，32(2)：135-7.

3薛平，宋歡. 飼料中砷和硒含量的原子吸收法測(cè)定〔J〕.檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2001；11(2)：48-56.

4郝小琴，吳子愷. 鮮食甜糯玉米子粒硒含量的研究〔J〕.作物雜志，2004；5(1)：15-7.

5馬作江，陳永波，王爾惠，等. 原子吸收光譜法測(cè)定茶葉中硒和銅〔J〕.微量元素與健康研究，2011；28(1)：41-5.

〔2014-12-07修回〕

(編輯袁左鳴)