分化型甲狀腺癌組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)及與臨床病理的相關(guān)性

分化型甲狀腺癌組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)及與臨床病理的相關(guān)性

王新征劉金彪侯永強(qiáng)王寧王明軍

(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外三科,河南洛陽471000)

摘要〔〕目的探討分化型甲狀腺癌組織中熱休克蛋白70(HSP70)與腫瘤壞死因子(TNF)-α的表達(dá)及與臨床病理的相關(guān)性。方法收集該院2012年6月至2014年3月甲狀腺癌切除標(biāo)本(石蠟包埋)40例，取40例甲狀腺良性病變及40例正常甲狀腺組織，應(yīng)用PCR技術(shù)檢測組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)，分析甲狀腺癌組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性。結(jié)果癌組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)量明顯高于正常組織、良性病變組織(P<0.05)，兩兩比較顯示HSP70和TNF-α的表達(dá)在正常組織與癌組織及良性病變組織與癌組織之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常組織與良性病變組織之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；癌組織中HSP70和TNF-α的表達(dá)與臨床病理特征行Spearman秩和檢驗(yàn)，結(jié)果顯示HSP70的表達(dá)與腫瘤大小、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度之間無相關(guān)關(guān)系(P>0.05)，HSP70的表達(dá)與臨床病理分期之間呈正相關(guān)(P<0.05)。TNF-α的表達(dá)與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期之間呈正相關(guān)(P<0.05)，與分化程度之間呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤的大小之間無關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論HSP70與TNF-α在甲狀腺癌組織中高表達(dá)，HSP70與TNF-α的表達(dá)與臨床的病理分期之間呈正相關(guān)關(guān)系，說明二者在甲狀腺癌中發(fā)揮著重要的作用。

關(guān)鍵詞〔〕甲狀腺癌；HSP70；TNF-α

中圖分類號〔〕R736〔

第一作者：王新征(1977-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事外科學(xué)研究。

甲狀腺癌約占全身惡性腫瘤的1.3%～1.5%，且有增長趨勢〔1〕。其中乳頭狀癌較早出現(xiàn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但預(yù)后較好；濾泡狀腺癌腫瘤生長較快，屬中度惡性，易經(jīng)血運(yùn)轉(zhuǎn)移；未分化癌預(yù)后很差，平均存活時(shí)間3～6個(gè)月〔1，2〕。熱休克蛋白70(HSP70)與腫瘤壞死因子(TNF)-α在腫瘤中的作用已經(jīng)得到證實(shí)，但是在甲狀腺癌中的作用還不很明確〔3〕，本文研究HSP70與TNF-α的表達(dá)及與病理特征的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料收集我院2012年6月至2014年3月甲狀腺癌切除標(biāo)本(石蠟包埋)40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)過病理組織檢查確診，并且能收集完整的檢查和治療資料。②不患有其他重要的并發(fā)癥，或內(nèi)分泌性疾病，甲狀腺患者在手術(shù)前均未放化療或者免疫治療。③符合倫理道德，家屬或患者簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者本身患有其他重要的器官衰竭性疾病或內(nèi)分泌性疾病。②患者在手術(shù)前有過放化療或者免疫治療。③不能收集到完整的治療和檢查資料。男24例，女16例，年齡60～85〔平均(72.35±7.44)〕歲，體重(42.33±3.08)kg，病理類型：乳頭狀癌24例、濾泡狀癌8例、未分化癌4例、其他4例；按照甲狀腺癌TNM分期(AJCC2002)Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅳ～Ⅲ期15例。同期再選取40例甲狀腺良性病變〔男26例，女14例，年齡(72.83±7.73)歲，體重(44.31±2.55)kg〕以及40例正常甲狀腺(良性病變2 cm以外)組織，男26例，女14例，年齡60～86〔平均(72.83±7.73)〕歲，體重(44.35±2.25)kg。三組的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2試劑RNA提取試劑盒以及DNAmarker購自上海捷瑞生物工程有限公司，75%乙醇(0.1% DEPC配制)；PCR試劑盒購自康泰生物科技有限公司；兔抗人 HSP70、TNF-α多克隆抗體 購自上海信然生物有限公司。

1.3研究方法RNA提取以及PCR反應(yīng)：所有的操作都按照RNA試劑盒和PCR試劑盒的操作說明嚴(yán)格進(jìn)行。RNA 提取方法(TRIzol法)：試劑準(zhǔn)備：①TRIzol試劑、氯仿、75%乙醇(0.1% DEPC配制)，②塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡，③0.1%DEPC水：100 ml ddH2O中加入DEPC 0.1 ml，充分振蕩，37℃孵育12 h以上，121℃高壓滅菌20 min，于4℃保存。操作步驟：50～100 mg組織中加入1 ml TRIzol試劑；樣品常溫靜置5 min；加入0.2 ml(1 ml TRIzol試劑)氯仿，充分振蕩15 s并于15℃～30℃靜置2～3 min；于2℃～8℃ 12 000 r/min離心15 min，上層水相中含RNA，下層有機(jī)相中含蛋白和DNA；取上清，加入0.5 ml異丙醇混勻，于15℃～30℃靜置10 min后，管底有膠狀沉淀，即為RNA；于2℃～8℃ 12 000 r/min離心10 min后棄去上清；加入1 ml 乙醇(75%)混勻；于2℃～8℃ 7 500 r/min離心5 min后棄上清；將RNA樣品涼干加入適量DEPC水溶解。PCR反應(yīng)條件：94℃變性5 min，循環(huán)次數(shù)35個(gè)。循環(huán)參數(shù)為：94℃變性 30 s，57℃退火 30 s，72℃延伸30 s，最后 72℃延伸15 min。RNA定量：RNA(mg/ml)=40×OD260×稀釋倍數(shù)(n)/1000，RNA純品OD260/OD280=2.0。

2結(jié)果

2.1不同組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)水平比較癌組織中HSP70與TNF-α的表達(dá)量明顯高于正常組織、良性病變組織(P<0.05)，正常組織與良性病變組織之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

組別HSP70mRNATNF-αmRNA正常組織1.23±0.061.15±0.21良性病變組織1.34±0.071.22±0.30癌組織11.23±2.255.45±1.24F/P值18.057/0.00011.720/0.000

2.2甲狀腺癌組織中HSP70與TNF-α表達(dá)水平與臨床病理的相關(guān)性HSP70的表達(dá)與腫瘤大小、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度無相關(guān)關(guān)系(P>0.05)，與臨床病理分期呈正相關(guān)(P<0.05)。TNF-α的表達(dá)與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期呈正相關(guān)(P<0.05)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤的大小無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

臨床病理特征nHSP70/GAPDHrs/P值TNF-α/GDPDHrs/P值腫瘤大小(cm)<1911.41±1.270.324/0.0675.44±1.300.226/0.0781～52612.35±1.265.43±1.38>5514.23±1.336.14±1.32頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是189.11±1.250.032/0.5696.56±1.300.455/0.025否229.97±2.235.58±1.28分化程度1級118.69±1.300.231/0.0896.47±1.24-0.566/0.0142級218.77±1.265.34±1.233級88.89±1.233.78±1.22病理分期Ⅰ～Ⅱ258.31±2.330.872/0.0003.45±0.120.856/0.000Ⅳ～Ⅲ1514.51±2.446.51±0.11

3討論

甲狀腺惡性腫瘤中最常見的是甲狀腺癌，極少數(shù)可有惡性淋巴瘤及轉(zhuǎn)移瘤，甲狀腺癌占全身惡性腫瘤的1%。除髓樣癌外，絕大部分甲狀腺癌起源于濾泡上皮細(xì)胞。甲狀腺癌的發(fā)病率與地區(qū)、種族、性別有一定關(guān)系。美國的甲狀腺癌發(fā)病率較高，據(jù)統(tǒng)計(jì)，1973～2002年，美國甲狀腺癌的年發(fā)生率約增加了2.4倍，而且這種趨勢仍然在逐年增長〔4〕。國內(nèi)的甲狀腺癌發(fā)病率較低，據(jù)統(tǒng)計(jì)，其中男性約(0.8～0.9)/10萬，女性約(2.0～2.2)/10萬〔5〕。甲狀腺癌大多處于低度惡化的狀態(tài)，早期臨床表現(xiàn)不明顯，多無自覺癥狀，頸部腫塊往往為非對稱性硬塊，腫塊易較早產(chǎn)生壓迫癥狀，如伴有聲音嘶啞，呼吸不暢，吞咽困難或局部壓痛等壓迫癥狀，頸靜脈受壓時(shí)，可出現(xiàn)患側(cè)靜脈怒張與面部水腫等體征，特別在甲狀腺腫大伴有單側(cè)聲帶麻痹時(shí)，為甲狀腺癌的特征之一〔5〕。HSP70是分子量約70 kD的HSP，是HSP家族中重要的一員，被稱為主要HSP，包括分子量為68、72、73、75、78 kD等的20多種蛋白，在正常細(xì)胞中水平較低，應(yīng)激狀態(tài)下可明顯升高，是HSP研究中最多的一種。尤其是對HSP70的結(jié)構(gòu)、功能以及表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究較多，正常情況下HSP70位于胞質(zhì)內(nèi)，受到熱休克刺激時(shí)，核內(nèi)HSP70迅速增加，漿內(nèi)只有少量存在，細(xì)胞處于恢復(fù)階段時(shí)，核內(nèi)的HSP70消失，漿內(nèi)仍有低水平HSP70表達(dá)〔6〕。近年來研究發(fā)現(xiàn)HSP70在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用〔7〕。TNF-α為巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，TNF在體內(nèi)、體外均能殺死某些腫瘤細(xì)胞，或抑制增殖作用。腫瘤細(xì)胞株對TNF-α敏感性有很大的差異，TNF-α對極少數(shù)腫瘤細(xì)胞甚至有刺激作用。本研究結(jié)果與HSP70和TNF-α在其他的已經(jīng)確認(rèn)的結(jié)論是一致的〔8，9〕。

綜上所述，HSP70與TNF-α在甲狀腺癌組織中高表達(dá)，二者在甲狀腺癌中發(fā)揮著重要的作用，在臨床的診斷、治療以及預(yù)防發(fā)揮著重要的作用。

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〔2014-05-10修回〕

(編輯袁左鳴)