甘肅地區(qū)女性宮頸HPV感染的現(xiàn)狀研究

杜 宏，索蘭草，劉紅賢，王 強，劉 斌，簡啟亮，黃 山，張文華，王 芳

（1．蘭州大學(xué)第二醫(yī)院病理科，甘肅蘭州，730000；2．蘭州軍區(qū)機關(guān)門診宮頸疾病診治中心，甘肅蘭州730000；3．隴南市人民醫(yī)院病理科，甘肅隴南742500；4．成縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，甘肅成縣742500；5．蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院病理科，甘肅蘭州730000）

甘肅地區(qū)女性宮頸HPV感染的現(xiàn)狀研究

杜 宏1，索蘭草2，劉紅賢3，王 強4，劉 斌5，簡啟亮1，黃 山1，張文華5，王 芳1

（1．蘭州大學(xué)第二醫(yī)院病理科，甘肅蘭州，730000；2．蘭州軍區(qū)機關(guān)門診宮頸疾病診治中心，甘肅蘭州730000；3．隴南市人民醫(yī)院病理科，甘肅隴南742500；4．成縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，甘肅成縣742500；5．蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院病理科，甘肅蘭州730000）

目的：了解甘肅地區(qū)女性人乳頭瘤病毒（HPV）感染的基因亞型、年齡及地區(qū)分布等．方法：采用凱普醫(yī)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)，對7318名蘭州女性進行生殖道21種HPV感染基因亞型篩查．結(jié)果：甘肅地區(qū)女性HPV感染率為19．9%（1 452／7 318），其中高危型HPV感染率14．78%（1 082／7 318），低危型HPV感染率3．38%（247／7 318），高危型中HPV16為主要致病亞型，占28．59%（415／1 452），低危型中HPV6占6．30%（98／1 452）．1452例感染HPV的標(biāo)本中，單一感染1 188例，占81．82%（1 188／1 452），多重感染264例，占18．18%（264／1 452）．按年齡分組中≥50歲組HPV感染率最高，占24．24%．按地區(qū)分析，隴南地區(qū)HPV感染率最高，達到30．97%（83／268）．結(jié)論：甘肅地區(qū)為宮頸癌高發(fā)區(qū)，其中HPV16是感染最多的型別，對該地區(qū)女性進行子宮頸癌的篩查和防治已成為當(dāng)務(wù)之急．

人乳頭瘤病毒（HPV）；核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片；PCR；甘肅地區(qū)

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性腫瘤中位居第二，僅次于乳腺癌［1］．據(jù)世界范圍統(tǒng)計每年有52．98萬新發(fā)病例，80%發(fā)生在發(fā)展中國家，其中約13萬在中國，約占世界宮頸癌新發(fā)病例的24．53%，為中國婦女惡性腫瘤第一位［2］．甘肅省是宮頸癌的高發(fā)地區(qū)，據(jù)調(diào)查顯示該地區(qū)宮頸癌患病率502．56／10萬，宮頸癌死亡率為11．88／10萬，占全癌死因構(gòu)成的11．67%，均居全國之首［3］．人乳頭瘤病毒（human papilloma virus HPV）感染已被證實是宮頸癌發(fā)生的首要因素且為始動因素［4］．自1949年Straussza在電鏡下第1次發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒，目前已鑒定出HPV有100多種亞型，約有40多種與生殖道感染有關(guān)，根據(jù)其致病力分為高危型和低危型；高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、58等［5］，可引起多種惡性腫瘤如喉癌、膀胱癌、宮頸癌、肉瘤等，高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要致病因素［6］；低危型主要包括HPV6、11、42、43、44等型別，常引起濕疣等良性病變［7］．近年來，基因芯片技術(shù)已應(yīng)用于HPV的分型，并取得良好的臨床效果．本研究采用凱普醫(yī)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)，對蘭州女性進行生殖道21種HPV感染基因亞型篩查，了解并掌握甘肅地區(qū)與宮頸癌發(fā)病相關(guān)的主要HPV型別分布，為將來研制有效的適合甘肅地區(qū)的HPV疫苗積累基礎(chǔ)數(shù)據(jù)．

1 資料與方法

1．1 資料

（1）研究對象 2010年5月至2012年7月在甘肅省蘭州軍區(qū)機關(guān)門診宮頸疾病診治中心、蘭州軍區(qū)總院病理科、蘭州大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科門診、成縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科及隴南市人民醫(yī)院病理科就診的女性，共計7 318人，年齡19～80歲，平均年齡（40．22±8．93）歲，均來源于甘肅省地區(qū)，源中河?xùn)|地區(qū)包含平?jīng)鍪?、慶陽市，河西地區(qū)包含武威地區(qū)、酒泉地區(qū)、張掖地區(qū)，其余按行政市劃分，所有患者至少有1年性生活史、處于非妊娠期、無其他內(nèi)外科疾患、無盆腔放療、化療病史．

（2）儀器與試劑 HPV-DNA提取試劑盒購自大連寶生物技術(shù)有限公司，HPV基因微陣列分型檢測試劑盒購自深圳凱普生物技術(shù)有限公司．

1．2 方法

（1）標(biāo)本采集和處理 所有受檢者均由各單位固定的婦產(chǎn)科醫(yī)生用凱普公司配套專用宮頸刷置于宮頸口鱗柱交接處沿順時針旋轉(zhuǎn)3～5周獲得足夠的移行區(qū)上皮細胞后取出，放入3 mL專用細胞保存液中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，做好樣本標(biāo)記，立即送檢或放置4℃冰箱中，3 d內(nèi)檢驗．

（2）檢測方法 HPV感染型別檢測用試劑盒提取DNA；按PCR反應(yīng)體系加入各試劑和DNA模板，混勻后進行PCR擴增．PCR循環(huán)溫度設(shè)置：95℃9 min、95℃20 s、55℃30 s、72℃30 s、40個循環(huán)；72℃5 min；4℃保存．PCR產(chǎn)物95℃變性5 min，迅速放入冰浴中，同時進行雜交實驗的準(zhǔn)備．按凱普公司提供的實驗步驟進行HPV導(dǎo)流雜交，酶標(biāo)顯色．（3）結(jié)果判斷肉眼觀察檢測結(jié)果，陽性點為清晰可見的藍紫色圓點，根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點為何種HPV病毒類型．本檢測將HPV分為21種基因亞型，有2種或2種以上者為多重感染，對多重感染者，各亞型陽性率重復(fù)計算．

1．3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18．0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，列聯(lián)表資料分析，各年齡組間檢出率差異用χ2檢驗，P檢驗為雙向，P＜0．05表示有統(tǒng)計學(xué)差異．

2 結(jié)果

2．1 HPV感染狀況和型別分布

7 318名女性中有1 452名感染HPV，總感染率為19．9%（1 452／7 318），其中高危型HPV感染率14．78%（1 082／7 318），低危型HPV感染率3．38%（247／7 318）．感染HPV的女性中，高危型占74．52%（1 082／1 452），低危型占17．01%（247／1 452），高危型與低危型同時感染者占8．47%（123／1 452）．所有高危型HPV感染者中，HPV16為主要致病亞型，占28．59%（415／1 452），HPV58為第二致病亞型，占17．01%（247／1 425），感染HPV52和HPV18者分別占13．34%（194／1 452）和7．77%（113／1 452），低危型中HPV6占6．30%（98／1 452），HPV11占6．30%（92／1 452）．檢測的21種亞型均有出現(xiàn)，構(gòu)成比按遞減順序排列情況（表1）．

表1 甘肅省婦女HPV感染的不同類型構(gòu)成Table 1 Different infect type of HPV in Gansu province

2．2 不同年齡段HPV感染陽性率比較

7 318例受檢者分成5個年齡段，≥50歲組HPV感染率最高，占24．24%．由于樣本數(shù)量較少且包含年齡段較少，統(tǒng)計分析時將≤20歲組的樣本并入20～30歲組，結(jié)果顯示該組HPV感染陽性率亦較高，為20．88%；30～39歲組與40～49歲組HPV感染率分別為18．08%，和19．57%．兩兩比較提示：≥50歲組HPV感染率明顯高于其他各組（P均＜0．05），≤29歲組、30～39歲組、40～49歲組間兩兩比較HPV感染率差異不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）（表2）．

表2 甘肅省不同年齡段婦女HPV感染率比較Table 2 Intection rate of different age group in Gansu province

2．3 HPV單一感染和多重感染的情況

1 452例感染HPV的標(biāo)本中，單一感染1 188例，占81．82%（1 188／1 452），多重感染264例，占18．18%（264／1 452），其中198例為雙重感染，占13．64%（198／1 452），55例為三重感染，占3．79%（55／1 452），另11例為四重感染，占0．76%（11／1 452）．多重感染最多的為HPV16合并58型，其次為HPV16合并52型和HPV16合并18型．

2．4 不同地區(qū)感染HPV類型比較

參與檢測的7 318位女性均來自甘肅省不同地區(qū)．結(jié)果顯示：HPV感染率最高的地區(qū)為隴南地區(qū)，達到30．97%（83／268），其次是甘南地區(qū)，達到28．62%（81／283），感染率最低的是臨夏地區(qū)，達到15．63%（75／480）．各地區(qū)HPV感染情況（表3）．

表3 甘肅省不同地區(qū)婦女HPV感染率Table 3 Infection rate of different area in Gansu province

3 討論

本研究采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對甘肅地區(qū)7 318名女性宮頸HPV感染進行檢測，結(jié)果顯示HPV感染1 452名，感染率為19．9%（1 452／7 318），低于浙江省臺州地區(qū)35．08%［8］，高于深圳地區(qū)17．5%［9］和呼和浩特地區(qū)13．04%［10］．高危型HPV感染者中，HPV16為主要致病亞型，占28．59%（415／1 452），在總體、各年齡組及各地區(qū)均占首位，與世界范圍內(nèi)的研究結(jié)果一致，HPV58為第二致病亞型，占17．01%（247／1 452），HPV52僅次于HPV58，占13．34%（194／1 452），低危型HPV感染者中HPV6為主要亞型，占6．30%（92／1 452），與多數(shù)亞洲國家的研究結(jié)果一致［7，11］．世界范圍內(nèi)的研究結(jié)果提示HPV感染常見基因亞型具有地區(qū)差異：東南亞地區(qū)的常見亞型為HPV18，非洲西部檢出率最高的亞型為HPV45［7］，與中國境內(nèi)其他地區(qū)相比較，HPV感染常見基因亞型亦存在一定地區(qū)差異：浙江省臺州地區(qū)常見基因亞型依次為HPV16、11、52、33、58型［8］；北京地區(qū)常見基因亞型依次為HPV16、58、52、53、33型［12］；香港地區(qū)常見類型是HPV16、58、11、cp8304和33型［13］，本研究中甘肅地區(qū)常見HPV感染基因亞型為HPV16、HPV58、HPV52、HPV18、HPV53型，表明HPV感染率及常見基因亞型具有明顯的地區(qū)特點．

本研究結(jié)果顯示大于50歲組HPV感染率（24．24%）高于其他各年齡組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義．目前HPV感染率與年齡的相關(guān)性各學(xué)者所持觀點不盡相同，一些國內(nèi)外的研究報道，發(fā)展中國家或經(jīng)濟落后地區(qū)HPV感染的年齡別分布曲線為U型［14］．Sellors等［15］報道在20～24年齡段女性HPV感染率最高為24．0%，而45～49年齡段女性HPV感染率降至3．4%，HPV感染率隨年齡增長逐漸降低，與本研究結(jié)果不一致．Baseman等［14］研究發(fā)現(xiàn)HPV總感染率及高危亞型隨年齡增長感染率逐漸升高，特別是與宮頸癌發(fā)生密切相關(guān)的最常見高危亞型HPV16隨年齡增長陽性率明顯遞增，與本研究結(jié)果不一致，可能與當(dāng)代社會性生活過早、過頻及多性伴現(xiàn)象的出現(xiàn)有關(guān)，也可能由于年齡大于45歲的女性機體免疫力逐漸降低或激素水平變化導(dǎo)致潛伏期病毒復(fù)活．HPV在人群中普遍存在，大多數(shù)感染是一過性的，35歲以后高危亞型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌的直接原因，特別是同一基因亞型高危亞型HPV的持續(xù)感染更易造成宮頸癌，由于老年女性性生活逐漸減少，其HPV感染水平可能反映著HPV持續(xù)感染狀態(tài)．本研究中大于50歲女性HPV感染率明顯增高，與中國宮頸癌高發(fā)年齡在45～60歲相符．因此，對年長女性積極開展HPV感染基因亞型檢測以預(yù)防宮頸癌及宮頸癌前病變的發(fā)生刻不容緩．

HPV多重感染率在世界范圍內(nèi)的差異很大，在菲律賓人群中為14．3%，摩洛哥為5．3%，荷蘭為28%，哥斯達黎加人群中為39%［15］．本研究結(jié)果顯示甘肅地區(qū)女性HPV感染以單一感染為主，占81．82%（1 188／1 452），多重感染僅占18．18%（264／1 452），與國內(nèi)學(xué)者研究結(jié)果相比，低于陶萍萍等報道的北京地區(qū)多重感染率44．35%［16］，與蔣旭峰等［17］報道的金華地區(qū)多重感染率21．87%、林廣玲等［18］報道的粵東地區(qū)多重感染率19．61%相一致，高于楊英捷等［12］報道的北京地區(qū)多重感染率8．9%．在多重感染中雙重感染占有極大地比例為75%（198／264），三重感染占20．83%，四重感染占4．17%（11／264）．多重感染最多的為HPV16合并其他亞型的感染，提示HPV16型感染后清除率低，導(dǎo)致宮頸對其他型別的易感性增加．多重感染在宮頸病變進展中的意義尚不明確．Munoz等［7］認為多重感染并不增加宮頸癌的發(fā)生，HPV感染的型別數(shù)與宮頸病變的級別沒有相關(guān)性．但也有學(xué)者持相反觀點：Ho等［19］認為HPV多重感染者出現(xiàn)持續(xù)感染的危險性更大，而HPV的持續(xù)感染是宮頸病變發(fā)生的原因，因此多重感染易導(dǎo)致宮頸病變．Lee等［20］認為，多重感染發(fā)生宮頸癌的危險較單一型別感染者明顯升高．陶萍萍等［21］在以往的研究中也發(fā)現(xiàn)多重感染與宮頸病變有關(guān)，HPV多重感染率隨病變級別增加而增加，一定程度上說明多重感染對宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起促進作用．對于甘肅地區(qū)HPV感染基因亞型數(shù)與宮頸病變的關(guān)系，需在以后的工作中繼續(xù)研究．

本研究結(jié)果顯示HPV感染地區(qū)分布明顯，高發(fā)區(qū)主要集中在甘肅隴南、甘南地區(qū)，河西、天水地區(qū)居一般水平，臨夏地區(qū)最低．國家衛(wèi)生部信息統(tǒng)計中心的結(jié)果顯示：宮頸癌有明顯的聚集現(xiàn)象，高發(fā)區(qū)主要分布在中西部地區(qū)（甘肅、山西和陜西?。?，且農(nóng)村高于城市，山區(qū)高于平原［22－24］．20世紀90年代全國第二次死因回顧抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，甘肅省宮頸癌死亡率為11．88／10萬，居全國前列；而隴南市武都區(qū)宮頸癌死亡率為36．15／10萬，比全國平均水平高出11．2倍，居全國之首［25］．中國西部10個縣、市中，甘肅省有4個縣宮頸癌死亡率高于全國平均水平，其中隴南地區(qū)武都縣為最高，死亡率居全國首位，高出全國平均水平10倍以上，甚至居世界最高水平［22］．中國子宮頸癌死亡率的地理分布不均衡主要是由于城市中進行子宮頸癌篩查比農(nóng)村多．宮頸癌是目前為止惟一一個病因明確、可以預(yù)防的惡性腫瘤．篩查是預(yù)防和控制宮頸癌的主要手段，宮頸浸潤癌的5年生存率是67%，宮頸早期癌的5年存活率是90%，而宮頸原位癌則幾乎達100%．因此，如果加強對35歲以下農(nóng)村婦女的一、二級預(yù)防，發(fā)現(xiàn)變化及時就醫(yī)，防患于未然，切實做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，甘肅省的宮頸癌防治工作將會取得更大的成績．

甘肅地區(qū)是宮頸癌高發(fā)病率、高死亡率地區(qū)，地處大西北，經(jīng)濟、文化水平落后，衛(wèi)生資源匱乏，患者大多來源于自然環(huán)境和醫(yī)療條件較差的農(nóng)村山區(qū)，所以，臨床上確定患者的HPV亞型，研究符合甘肅地區(qū)女性HPV感染基因亞型、感染率及流行趨勢等特點的HPV疫苗，對于本地區(qū)婦女的健康有著重要的意義．本研究通過檢測初步得知甘肅地區(qū)與宮頸癌發(fā)病有關(guān)的主要HPV型別，有利于研究甘肅地區(qū)宮頸癌高發(fā)病率與高危型HPV感染之間的關(guān)系，并為將來研制針對甘肅地區(qū)發(fā)病狀況的HPV疫苗提供了依據(jù)，對研究宮頸癌的發(fā)病機制以及預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌和癌前病變都具有重要的意義．

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［責(zé)任編輯：朱穎嫄］

Current research status of cervical HPV infection in Gansu province

DU Hong1，SUO Lancao2，LIU Hongxian3，WANG Qiang4，LIU Bin5，JIAN Qiliang1，HUANG Shan1，ZHANG Wenhua5，WANG Fang1
（1．Department of Pathology，Lanzhou University Second Hospital，Lanzhou，730000 China；2．Lanzhou Military Authority of Cervical Disease Treatment Center，Lanzhou，730000 China；3．Department of Pathology，the People's Hospital of Longnan，Longnan，742500 China；4．Department of Obstetrics and Gynecology，the People's Hospital of Chengxian，Chengxian Gansu，742500 China；5．Department of Pathology，Command Hospital of Lanzhou Military Area，Lanzhou，730000 China）

Aim：To investigate the characteristics of the subgenotype，age and regional distribution of HPV infected in females of Gansu province．Methods：A screening for the 21 subgenotypes of HPV was carried out in 7318 females at the Lanzhou military authority of cervical disease treatment center，the department of pathology in command hospital of Lanzhou military area，the department of obstetrics and gynecology outpatient in Lanzhou university second hospital，the department of obstetrics and gynecology in the people's hospital of Chengxian，and the department of pathology in the people's hospital of Longnanfrom May，2010 to July，2012 with Cape Flow-through hybridization and gene chip techniques．Results：HPV infection rate was found to be 19．9%（1 452／7 318）in Gansu province of which HR-HPV infection rate was 14．78%（1 082／7 318），and LR-HPV infection rate was 3．38%（247／7 318）．HPV16 accounts for 28．59%（415／1 452）of HR-HPV，and is considered to be the main pathogenic subtype，while it accounts for 6．30%（98／1 452）of LR-HPV．Among the 1 452 HPV-infection samples，single-infection accounts for 81．82%（1 188／1 452）and multi-infection for 18．18%（264／1 452）．The patients of≥50 years accounts for 24．24%，with the highest infection rate．Of all the patients tests，those from Longnan showed the highest infection-rate，which acounts for 30．97%（83／268）．Conclusion：Gansu has been the area with high-incidence of HPV infection with HPV16 as the highest subtype．It is a top priority to check and screen for cervical cancer in the females of this area．The present results could be a guidance to clinical therapy and prevent of the disease．

HPV；Cape Flow-through hybridization and gene chip technology；Gansu

R730．26，R737．33

A

1000－9965（2015）01－0040－06

10．11778／j．jdxb．2015．01．007

2014－06－03

國家自然科學(xué)基金青年項目（81202959）；中央高校基本科研業(yè)務(wù)專項資金（lzujbky－2013－m04）

杜 宏（1985－），女，研究方向：輔助生殖醫(yī)學(xué)

王 芳（1973－），女，博士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，Mobile：13919302888；E-mail：wangfang4323＠126．com