脫落酸對人SACC-2細(xì)胞增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究

谷愛玲何巍457000河南省濮陽市人民醫(yī)院口腔科473058河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科

脫落酸對人SACC-2細(xì)胞增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究

谷愛玲1何巍2
457000河南省濮陽市人民醫(yī)院口腔科1
473058河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科2

目的：觀察天然植物激素ABA對SACC-2癌細(xì)胞抑制增殖的影響。方法：從細(xì)胞增殖活力、DNA合成和周期分布等方面研究ABA對SACC-2細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：不同濃度的ABA對SACC-2細(xì)胞增殖的影響不同。結(jié)論：ABA在濃度(≥1×10-1mmol/L)下有較強(qiáng)抑制增殖作用。

脫落酸；抑制；人SACC-2細(xì)胞；增殖

涎腺腺樣囊性癌有惡性程度高、易侵神經(jīng)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等特性，探索新療法成為必要[1]。國內(nèi)外文獻(xiàn)報道脫落酸有抗腫瘤作用[2]。本研究應(yīng)用ABA作用SACC-2細(xì)胞后，觀察細(xì)胞形態(tài)、計算生長曲線和細(xì)胞增殖抑制率的改變，以探討ABA的作用機(jī)制，為腺樣囊性癌的防治提供理論依據(jù)。

資料與方法

細(xì)胞株及試劑：人SACC-2細(xì)胞株(四川大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院)。98％ ABA(Aldrich公司，美國)。

方法：①細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：將細(xì)胞分為對照組、ABA組，培養(yǎng)24h、48h后，觀察各組細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)、染色質(zhì)和胞漿的變化。②MTT法檢測ABA對細(xì)胞抑制率：空白對照組、溶劑對照組、實(shí)驗(yàn)組，同樣條件分別培養(yǎng)6h、12h、24h、48h、72h后，計算實(shí)驗(yàn)結(jié)果。③流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布和增殖指數(shù)：采用15mW氬離子激發(fā)器，應(yīng)用Expo 32ADC進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析，計算S期分?jǐn)?shù)(SPF)和細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)。

統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS 13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用(x±s)表示，采用χ2檢驗(yàn)分析比較，以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

結(jié)果

ABA對SACC-2細(xì)胞作用的形態(tài)學(xué)觀察：在倒置相差顯微鏡下，對照組SACC-2細(xì)胞貼壁生長良好，細(xì)胞單層生長，形態(tài)為扁平的多角形，胞體較大，核分裂相多，胞質(zhì)飽滿，中央有細(xì)胞核，細(xì)胞具有連接成片的能力，生長迅速。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長明顯減慢、脫落、懸浮培養(yǎng)液中，貼壁細(xì)胞變圓、縮小、連接松解，細(xì)胞堆集減少，呈散在，胞漿顆粒增多，核顏色加深，用藥48h、72h后，生長停滯，脫落明顯，細(xì)胞皺縮變小、裂解，胞內(nèi)顆粒增多，核漿難分清。

ABA對SACC-2細(xì)胞生長的影響：不同濃度ABA分別為10-5mmol/L、10-4mmol/L、10-3mmol/L、10-2mmol/L、10-1mmol/L，分別作用6、12、24、48、72h后，利用MTT法測定了對SACC-2細(xì)胞生長的影響。隨著劑量的增加，細(xì)胞生長抑制率上升，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，存在劑量依賴關(guān)系，即呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，見圖1。隨時間延長，細(xì)胞生長抑制率上升，有時間依賴關(guān)系，即呈時間-效應(yīng)關(guān)系，見圖2。

圖1 不同濃度ABA對SACC-2細(xì)胞生長抑制作用

圖2 不同時間、不同濃度ABA對SACC-2細(xì)胞生長抑制作用

表1 ABA對SACC-2細(xì)胞周期的影響(x±s)

流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果：結(jié)果顯示，ABA在濃度10-1mmol/L時作用48h后，G0/G1期細(xì)胞構(gòu)成比分別為80.13％和77.23％，G2/M期分別為6.47％和7.64％，而對照組G0/G1期僅68.19％，G2/M期達(dá)5.51％，可見實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞構(gòu)成比明顯高于對照組，G2/M期明顯低于對照組(P＜0.05)，見表1，說明ABA作用后延長了G0/G1期，縮短了S期和G2/M期。提示ABA抑制細(xì)胞生長的作用可能與G0/G1期阻滯有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

討論

腫瘤最根本的屬性是細(xì)胞的增殖失去控制，這也是我們對于癌癥研究的核心問題[3]。因此抑制腫瘤細(xì)胞增殖是篩選抗腫瘤藥物的一個重要指標(biāo)[4]。本研究顯示，經(jīng)ABA作用后細(xì)胞數(shù)目減少、排列疏松，部分細(xì)胞脫壁，漂浮于培養(yǎng)液中，生長增殖受到明顯的抑制，且濃度越高，持續(xù)時間越長，受到的抑制作用越顯著。MTT比色法是目前廣泛使用檢測抗癌藥物對腫瘤增殖活性的方法[5]。本研究中，實(shí)驗(yàn)組的OD值越小，表明植物激素對腫瘤細(xì)胞的抑制作用越明顯。細(xì)胞分化的啟動，首先有細(xì)胞增殖停止，退出細(xì)胞周期。研究表明，G1-S卡點(diǎn)失常進(jìn)入S期細(xì)胞增多是是腫瘤細(xì)胞去分化的一個重要標(biāo)志。本研究明顯降低了腫瘤細(xì)胞的PI、S期比率，破壞了DNA復(fù)制合成，減少增殖，發(fā)揮了抗腫瘤的作用。

總之，高濃度的植物激素ABA對細(xì)胞增殖局域較強(qiáng)的抑制作用，具有劑量-效應(yīng)關(guān)系、時間-效應(yīng)性，其具體作用機(jī)制仍需要繼續(xù)進(jìn)行研究。

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Experiment research of abscisic acid on the proliferation effectof human SACC-2 cells

Gu Ailing1，HeWei2
DepartmentofStomatology，PuyangCity People'sHospitalofHenan Province4570001

Objective：To observe the effectof natural planthormone ABA on the suppress proliferation of SACC-2 cancer cells. Methods：The effectof ABA on the SACC-2 cells proliferationwas studied from cellproliferation activity，DNA synthesisand cycle distribution and otheraspects.Results：The differentconcentrationsof ABA had differenteffectson the SACC-2 cells proliferation. Conclusion：ABA in the concentration(≥1×10-1mmol/L)hasstrongersuppressproliferation effect.

Abscisic acid；Suppress；Human SACC-2 cells；Proliferation

book=6,ebook=8

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.22.2

DepartmentofOraland Maxillofacial Surgery，the FirstAffiliated HospitalofZhengzhou University，Henan Province 4730582