紫外測定不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮的含量

安冬琴，晏建新，王曉麗

(貴陽醫(yī)學(xué)院藥用植物與生藥學(xué)教研室，貴州貴陽 550004)

金櫻子(Rosa laevigata Michx．)又名蜂糖罐、山雞頭子、白玉帶、刺榆子、下山虎、三葉勒、糖罐子、野石榴、糖缽、刺榆子等。它為薔薇科薔薇屬常綠灌植物金櫻子的果實。金櫻子在向陽的地方生長得最好，農(nóng)村經(jīng)?？梢栽谏狡?、田邊或溪邊的灌木叢里看到它的蹤跡，一般分布在海拔200～1 600 m的地方。金櫻子在我國的資源非常豐富，尤其在云貴川地區(qū)產(chǎn)量最多，質(zhì)量好。

金櫻子的果實富含豐富的維生素、氨基酸、無機鹽、微量元素及甾體、萜類、皂苷等多種成分，它主要的活性成分為多糖、黃酮類化合物、三萜類及其衍生物［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，金櫻子有降血糖血脂作用［2－3］、抗氧化作用［4］、抗菌抗炎作用［5］以及預(yù)防老年癡呆癥［6］、排鉛的作用［7］，無致突變作用［8－9］。在現(xiàn)代臨床應(yīng)用上用于治療遺精早泄、老年尿失禁、腹瀉、慢性支氣管炎、慢性腎小球疾病氣陰兩虛證?，F(xiàn)代研究中對金櫻子的毒性研究表明金櫻子是一種無毒、無害的中藥［10］。筆者在此采用紫外分光光度計法測定金櫻子中總黃酮的含量，運用SPSS Statics 17．0統(tǒng)計軟件對貴州不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮含量進行相關(guān)性分析，考察不同采收期對黔產(chǎn)金櫻子中總黃酮含量的影響。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 研究對象。2014年8～12月份開始對金櫻子進行采摘并做上記號，每個月對同一株金櫻子進行采摘，曬干、烘干、粉碎過二號曬。

1．1．2 主要儀器。電子天平HZT-A500(福州華志科學(xué)儀器有限公司)、植物粉碎機(河北黃驊縣齊家務(wù)科學(xué)儀器廠)、標準檢驗篩(浙江上虞市道墟張興紗篩廠)、UV－2401紫外分光光度計(日本島津)、101－1型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海路達實驗儀器有限公司)。

1．1．3 主要試劑。蘆丁標準品(貴州省食品藥品檢驗所，批號100080－200707)，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇，所有試劑均為分析純。

1．2 方法

1．2．1 對照品溶液的制備。精密稱取干燥至恒重的蘆丁標準品0．012 6 g于25 ml容量瓶中，加適量60%乙醇水浴加熱使其完全溶解，再加60%乙醇定容，得到終濃度為0．504 mg/ml的對照品溶液。

1．2．2 供試品溶液的制備。稱取金櫻子粉末(過二號篩)2 g，置于100 ml三角燒瓶中，加入40 ml 60%乙醇，超聲回流提取2次，每次40 min，抽濾，用60%乙醇少量多次洗滌，合并2次濾液，濃縮為10 ml，60%乙醇定容至100 ml，即得樣品溶液。

1．2．3 方法學(xué)考察。

1．2．3．1 檢測波長的選擇。精密吸取2 ml蘆丁標準品于15 ml容量瓶中，依次加0．3 ml 5%亞硝酸鈉搖勻靜止6 min、加0．3 ml 10%硝酸鋁搖勻靜止6 min、加4 ml 1 mol/L氫氧化鈉再加60%乙醇定容至刻度，搖勻靜止15 min，以不加對照品溶液的為空白，在設(shè)定波長為350～550 nm掃描，即得對照品的紫外－可見吸收光光譜圖。再精密吸取1 ml樣品液于15 ml容量瓶中，按以上操作加入顯色劑，在設(shè)定波長350～550 nm掃描，即得樣品的紫外－可見吸收光光譜圖。

1．2．3．2 標準曲線的繪制。精密量取 0、1、2、3、4、5、6、7、8 ml的0．504 mg/ml蘆丁標準溶液于15 ml容量瓶中，再依次加0．3 ml 5%亞硝酸鈉搖勻靜止6 min、加0．3 ml 10%硝酸鋁搖勻靜止6 min，加4 ml 1 mol/L氫氧化鈉再加60%乙醇定容至刻度，搖勻靜止15 min，在最大吸收波長處檢測其吸光度值。

1．2．3．3 精密度試驗。精密吸取2 ml 0．504 mg/ml蘆丁標準液，按照“1．2．3．1”加入顯色劑。在測定波長處連續(xù)重復(fù)測定吸光度6次，計算RSD值。

1．2．3．4 穩(wěn)定性試驗。按樣品液的測定方法對同一份樣品在 0、0．5、1．0、1．5、2．0、3．0 h 不同時間點測定吸光度值，計算RSD值。

1．2．3．5 重復(fù)性試驗。精密稱取2 g金櫻子藥材粉末共6份，按照“1．2．2”操作，再吸取 1 ml樣品液于 15 ml容量瓶中，按“1．2．3．1”加入顯色劑，60% 乙醇定容。測定吸光度值，計算RSD值。

1．2．3．6 加樣回收率試驗。稱取已知黃酮含量的金櫻子粉末2 g，置于100 ml三角燒瓶中，加入0．5 ml蘆丁標準品(0．504 mg/ml)。再加40 ml 60%乙醇，超聲回流提取2次，每次40 min，抽濾，用60%乙醇少量多次洗滌，合并2次濾液，濃縮為10 ml，60%乙醇定容至100 ml。精密量取1 ml樣品液，按“1．2．3．1”加入顯色劑，在測定波長處測定其吸光度值，計算平均回收率。

1．2．4 樣品的含量測定。稱取不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子各2 g，按“1．2．2”方法制備供試品液，再按“1．2．3．1”方法加入顯色劑，在測定波長處測定吸光度值，帶入標準曲線中，計算總黃酮含量。

1．2．5 不同采收期金櫻子中總黃酮的相關(guān)性分析。運用統(tǒng)計軟件SPSS Statics 17．0對貴州不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮含量進行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 方法學(xué)考察

2．1．1 檢查波長的選擇。圖1表明對照品和樣品在496 nm處有最大吸收峰，所以選擇496 nm為檢測波長。

2．1．2 標準曲線的繪制。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標、濃度C為橫坐標繪制標準曲線(圖2)，得到回歸方程為 A=4．177 0C+0．061 2(r=0．999 1)，在濃度范圍為 0．033 3 ～0．266 7 mg/ml具有線性關(guān)系。

2．1．3 精密度試驗。按“1．2．3．3”方法操作，得到吸光度值分別為0．345 1、0．345 1、0．345 1、0．345 1、0．345 1、0．346 3，RSD值為0．14%，表明在此試驗條件下精密度良好。

2．1．4 穩(wěn)定性試驗。按“1．2．3．4”方法操作，在0、0．5、1．0、1．5、2．0、3．0 h 不同時間測得的吸光度分別為 0．328 3、0．320 5、0．318 4、0．312 9、0．321 0、0．314 3，RSD 值為 1．7%，表明在3 h內(nèi)測定吸光度值幾乎都是穩(wěn)定的。

2．1．5 重復(fù)性試驗。按“1．2．3．5”方法操作，測得吸光度分別為0．322 1、0．321 3、0．316 8、0．318 1、0．328 2、0．315 3，RSD值為1．5%，說明該試驗的重復(fù)性好。

2．1．6 加樣回收率試驗。按“1．2．3．6”方法操作，測定吸光度分別為 0．470 2、0．468 1、0．463 2、0．472 3、0．458 0、0．460 3，平均回收率為98．8%。

2．2 含量測定 由表1可知，貴州不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮含量在3．02% ～8．55%，而產(chǎn)于銅仁市思南縣的金櫻子中總黃酮含量明顯比其他產(chǎn)地的高;不同采收期金櫻子中總黃酮的含量有一定的差異，8～12月金櫻子中總黃酮含量隨著采收時間的推移，呈現(xiàn)略微減少的趨勢。

2．3 不同采收期金櫻子中總黃酮的相關(guān)性分析 由表2可知，8月采收的金櫻子中總黃酮含量與9、10、11、12月采收的均呈極顯著相關(guān)性，9 月與10、11、12 月，10 月與 11、12 月，11月與12月均有極顯著相關(guān)性。

表2 不同采收期金櫻子中總黃酮的相關(guān)性

3 結(jié)論與討論

該試驗采用紫外分光光度法測定金櫻子中的總黃酮含量，得到貴州不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮含量為3．02% ～8．55%，銅仁市思南縣的金櫻子含量最高，為8．55%;不同采收期總黃酮的含量有一定的差異，8～12月金櫻子中總黃酮含量隨著采收時間的推移，呈現(xiàn)略微減少的趨勢。不同采收期金櫻子中總黃酮含量的相關(guān)性分析得出8月與9、10、11、12，9 月與10、11、12 月，10 月與11、12 月，11 月與12月均有極顯著相關(guān)性，這可能是不同采收期的同一植株的藥材所處的環(huán)境一致，其產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物的含量有相同的趨勢所致。

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［10］ZHANG S，ZHENG L L，XU L，et al．Subchronic toxicity study of the total flavonoids from Rosa laevigata Michx．fruit in rats［J］．Regulatory Toxicology and Pharmacology，2012，62(2):221－230．