飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮代謝及血清生化指標(biāo)的影響

郭俊剛 張鐵濤 吳學(xué)壯 劉 志 崔 虎高秀華＊ 楊福合 邢秀梅

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京 100081；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，特種經(jīng)濟(jì)動物分子生物學(xué)省部重點共建實驗室，長春130112）

種狐的體況與繁殖有著極密切的關(guān)系，過肥、過瘦都會降低繁殖力。配種前期的主要任務(wù)是平衡營養(yǎng)，調(diào)整狐的體況，并使其控制在中等或中上等水平。此期間種狐的營養(yǎng)需求高，要求飼料營養(yǎng)全面。含硫氨基酸為藍(lán)狐的第一限制性氨基酸［1］，在飼糧中添加適宜水平含硫氨基酸可改善氨基酸平衡狀況，滿足機(jī)體需要。而蛋氨酸為含硫氨基酸之一，在動物體內(nèi)不僅能合成機(jī)體蛋白質(zhì)，而且能轉(zhuǎn)化為半胱氨酸和胱氨酸，滿足動物營養(yǎng)需 要［2］。崔 虎［3］研 究表明，在蛋白 質(zhì) 水 平 為30%飼糧中，蛋氨酸水平為1.14%時，育成期藍(lán)狐的生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化率和氮代謝比較理想。郭俊剛等［4］研究表明，蛋白質(zhì)水平為26%的飼糧中添加0.6%蛋氨酸，即飼糧中蛋氨酸水平為0.99%時，冬毛期藍(lán)狐的生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化率和氮沉積較為理想，可在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。然而，關(guān)于蛋氨酸在藍(lán)狐繁殖期上的應(yīng)用研究尚存在諸多空白，因此，為進(jìn)一步完善研究藍(lán)狐飼糧中適宜蛋氨酸水平，在前期試驗［5］得出配種前期雌性藍(lán)狐適宜蛋白質(zhì)水平基礎(chǔ)上，研究飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮代謝及血清生化指標(biāo)的影響，篩選出配種前期雌性藍(lán)狐飼糧中適宜蛋氨酸水平，以期達(dá)到蛋白質(zhì)資源的高效利用，節(jié)約養(yǎng)殖戶成本，提高養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選擇健康初產(chǎn)雌性北極狐（8～9月齡）150只，隨機(jī)分為5組，每組30個重復(fù)，每個重復(fù)1只藍(lán)狐，均為單籠飼養(yǎng)。Ⅰ～Ⅴ組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0、0.26%、0.52%、0.78%和1.04%蛋氨酸的試驗飼糧。預(yù)試期7d，正試期60d。試驗開始前，對藍(lán)狐進(jìn)行常規(guī)免疫接種，試驗期間注射1次加德納氏菌疫苗。每天09：00飼喂1次，自由飲水。試驗從2013年12月1日至2014年1月30日在農(nóng)業(yè)部長白山野生生物資源重點野外科學(xué)觀測試驗站進(jìn)行。

1.2 試驗飼糧

以膨化玉米、魚粉、豆粕等為主要原料，參照國內(nèi)文獻(xiàn)［5－6］報道，配制基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 消化代謝試驗

在正試期開始30d后，每組挑選8只體重相近的健康雌性藍(lán)狐進(jìn)行4d消化代謝試驗。采用全收糞法，消化代謝試驗期間飼養(yǎng)管理與日常飼養(yǎng)管理相同。每天收集的糞便稱重后按鮮重的5%加入10%硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于－20℃?zhèn)溆?。每天收集的尿液中?00mL加入10mL的10%硫酸溶液，加4滴甲苯用于防腐，保存于－20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 血清制備

在正試期開始40d后，每組挑選10只健康雌性藍(lán)狐進(jìn)行腿部靜脈采血5mL，采血時間08：30至09：30，裝于促凝管中，靜置析出血清后3 500r／min、4～8 ℃ 離 心 5min，血 清 分 裝 于1.5mL的Eppendorf管中，于－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 測試指標(biāo)及方法

樣品分析：105℃烘干法測定干物質(zhì)含量；索氏浸提法測定粗脂肪含量，采用索氏脂肪提取器，主要試劑為無水乙醚；凱氏定氮法測定粗蛋白質(zhì)含量，采用Kjeltec8400全自動凱氏定氮儀。利用Hitachi日立L－8900全自動專用氨基酸分析儀分析氨基酸含量。待血清樣品室溫解凍后，采用威圖－E全自動生化分析儀測定血清生化指標(biāo)。尿素氮（UN）、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總蛋白（TP）和白蛋白（ALB）測定所用試劑全部購自中生北控有限公司，球蛋白（GLOB）由總蛋白和白蛋白差值計算獲得。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（air－dry basis） %

干物質(zhì)消化率（%）＝［（干物質(zhì)食入量－干物質(zhì)排泄量）／干物質(zhì)食入量］×100；

粗蛋白質(zhì)消化率（%）＝［（粗蛋白質(zhì)食入量－粗蛋白質(zhì)排泄量）／粗蛋白質(zhì)食入量］×100；

粗脂肪消化率（%）＝［（粗脂肪食入量－粗脂肪排泄量）／粗脂肪食入量］×100；

氨基酸表觀消化率（%）＝［（氨基酸食入量－氨基酸排泄量）／氨基酸食入量］×100；

氮沉積（g／d）＝食入氮－糞氮－尿氮。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用統(tǒng)計軟件SAS 9.1對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，表中結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析（one－way ANOVA）進(jìn)行差異顯著性檢驗，并對差異顯著者進(jìn)行Duncan氏法多重比較，檢驗差異顯著性，其中P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著，P＞0.05為差異不顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

由表2可以看出，干物質(zhì)采食量和干物質(zhì)排出量各組間差異不顯著（P＞0.05），但隨著飼糧蛋氨酸水平的提高，干物質(zhì)排出量有相對降低的趨勢。干物質(zhì)消化率和粗脂肪消化率隨著飼糧蛋氨酸水平的提高，有相對提高的趨勢（P＞0.05）。Ⅲ組粗蛋白質(zhì)消化率顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05）。

表2 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響Table 2 Effects of dietary Met levels on nutrient digestibility of female blue foxes in prepare breeding period

2.2 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氮代謝的影響

由表3可以看出，各組雌性藍(lán)狐食入氮含量差異不顯著（P＞0.05），Ⅴ組糞氮含量顯著低于Ⅱ組（P＜0.05）。Ⅲ組和Ⅳ組尿氮含量顯著低于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05）。Ⅳ組氮沉積量極顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.01），Ⅲ組和Ⅴ組氮沉積含量顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05）。

表3 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氮代謝的影響Table 3 Effects of dietary Met levels on nitrogen metabolism of female blue foxes in prepare breeding period g／d

2.3 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氨基酸表觀消化率的影響

由表4可以看出，Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅴ組蛋氨酸表觀消化率顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05），Ⅳ組和Ⅴ組蘇氨酸表觀消化率顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05），Ⅰ組蘇氨酸、甘氨酸、亮氨酸、纈氨酸表觀消化率顯著低于Ⅳ組和Ⅴ組（P＜0.05），Ⅰ組和Ⅱ組半胱氨酸表觀消化率極顯著低于Ⅳ組和Ⅴ組（P＜0.01），Ⅴ組精氨酸表觀消化率顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），Ⅰ組谷氨酸表觀消化率極顯著低于Ⅳ組和Ⅴ組（P＜0.01）。

表4 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氨基酸表觀消化率的影響Table 4 Effects of dietary Met levels on amino acid apparent digestibility of female blue foxes in prepare breeding period %

2.4 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐血清生化指標(biāo)的影響

由表5可以看出，Ⅲ組和Ⅳ組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），而天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性各組間差異不顯著（P＞0.05）。白蛋白和球蛋白含量隨飼糧蛋氨酸水平的提高，有先升高后降低的趨勢（P＞0.05）。Ⅲ組總蛋白含量顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），尿素氮含量各組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

配種前期的主要任務(wù)是平衡營養(yǎng)，調(diào)整雌性藍(lán)狐的體況，并使其控制在中等或中上等水平。在整個配種前期限制飼喂，因此雌性藍(lán)狐各組干物質(zhì)采食量差異不顯著，隨著試驗組雌性藍(lán)狐飼糧中蛋氨酸添加水平的提高，營養(yǎng)物質(zhì)消化率呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢，干物質(zhì)排出量呈現(xiàn)降低的趨勢，在雌性藍(lán)狐飼糧中添加0.52%的蛋氨酸干物質(zhì)消化率、粗蛋白質(zhì)消化率和粗脂肪消化率在各組中最高。蛋氨酸為藍(lán)狐的第一限制性氨基酸［7］，如果蛋氨酸缺乏就會導(dǎo)致體內(nèi)蛋白質(zhì)合成受阻，造成機(jī)體損害，添加適宜水平蛋氨酸可改善氨基酸平衡狀況，滿足其對含硫氨基酸的需要。Dahlman［8］研究表明，飼糧中添加蛋氨酸可以提高粗脂肪的消化率，促進(jìn)藍(lán)狐生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加蛋氨酸可以提高粗脂肪消化率，但效果并不是十分明顯，可能是配種前期為控制雌性藍(lán)狐體況限飼的原因，當(dāng)飼糧采食水平較低時，食糜的排空速度也較慢，有利于營養(yǎng)物質(zhì)被充分消化吸收，因此消化率會相應(yīng)升高。

表5 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary Met levels on serum biochemical parameters of female blue foxes n prepare breeding period

3.2 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氮代謝的影響

本試驗結(jié)果可知，各組藍(lán)狐的干物質(zhì)采食量和蛋白質(zhì)水平之間差異不顯著，藍(lán)狐的食入氮含量與干物質(zhì)采食量和蛋白質(zhì)水平之間存在很大的相關(guān)性，因而各組藍(lán)狐的食入氮含量不存在顯著差異。楊春花等［9］研究表明，飼糧氨基酸平衡可減少尿氮排出，提高氮的利用率。董志巖等［10］研究表明，飼糧蛋白質(zhì)水平一定的情況下，提高限制性氨基酸水平，尿氮和糞氮排出量均顯著降低。本試驗研究結(jié)果表明，隨著飼糧蛋氨酸水平的提高，糞氮和尿氮排出量分別具有降低的趨勢，而氮沉積具有相對增加的趨勢。蛋氨酸是藍(lán)狐的限制性氨基酸，提高飼糧中蛋氨酸水平，有利于提高藍(lán)狐的營養(yǎng)物質(zhì)消化率，尤其是蛋白質(zhì)消化率，這由本試驗結(jié)果可得到證實。飼糧中添加蛋氨酸可以提高氮沉積，提高藍(lán)狐對飼糧中氮的利用率，這與張鐵濤等［11］的研究結(jié)果基本一致。

3.3 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐氨基酸表觀消化率的影響

在動物營養(yǎng)中，決定飼料氨基酸利用率的首要指標(biāo)是消化率，它決定于飼料中氨基酸在消化道內(nèi)的消化、吸收狀況。本試驗結(jié)果表明，隨著蛋氨酸水平的提高，氨基酸表觀消化率相應(yīng)提高。蛋氨酸作為蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)組成部分和彌補(bǔ)氨基酸平衡的營養(yǎng)性添加劑，提供氨基酸轉(zhuǎn)換過程中所需的活性甲基，飼糧中添加適宜水平蛋氨酸能提高蛋白質(zhì)和其他氨基酸消化利用率。Dilger等［12］研究表明，某一氨基酸添加量的差別會影響其他氨基酸的消化率，所以氨基酸表觀消化率隨飼糧氨基酸攝入量的增加而增加［13］。Dahlman等［14］研究表明，飼糧中添加DL－蛋氨酸或L－蛋氨酸能夠提高藍(lán)狐的氨基酸表觀消化率，補(bǔ)充外源性的氨基酸比調(diào)節(jié)飼糧中氨基酸比例效果更加明顯。蛋氨酸是毛皮動物第一限制性氨基酸，含硫氨基酸需要量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他家畜。張鐵濤等［11］研究在育成期藍(lán)狐飼糧中添加蛋氨酸，可以提高飼糧中含硫氨基酸的表觀消化率，本試驗結(jié)果與其結(jié)果基本一致。在動物飼糧生產(chǎn)中添加限制性合成氨基酸，能夠促進(jìn)飼糧中氨基酸平衡，更符合理想蛋白質(zhì)模型，因此，提高了飼糧中蛋白質(zhì)和氨基酸利用率。粗蛋白質(zhì)和各種氨基酸消化率是根據(jù)飼料和糞便中粗蛋白質(zhì)含量和干物質(zhì)消化率計算的，由于受各種氨基酸之間的協(xié)同和拮抗關(guān)系的影響，還受到胃腸道微生物及其代謝產(chǎn)物，消化道分泌物和經(jīng)消化道排泄的代謝產(chǎn)物，消化道黏膜脫落物的影響。因此，本試驗中各種氨基酸表觀消化率與粗蛋白質(zhì)消化率變化規(guī)律也不完全一致。

3.4 飼糧蛋氨酸水平對配種前期雌性藍(lán)狐血清生化指標(biāo)的影響

Gugolek等［15］研究表明，飼糧中添加蛋氨酸可提高藍(lán)狐血紅蛋白水平，可能對造血具有積極影響，有利于改善藍(lán)狐健康狀況，并且指出藍(lán)狐對蛋氨酸需要量近年來呈現(xiàn)增加的趨勢。天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是蛋白質(zhì)代謝過程中2種重要的酶，在蛋白質(zhì)合成和分解中發(fā)揮作用，其活性能夠直接反映機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝的狀況。Ⅲ組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性最高，說明飼糧中添加適宜水平蛋氨酸有利于體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸相互轉(zhuǎn)化。血清總蛋白是機(jī)體蛋白質(zhì)的一個來源，用于修補(bǔ)組織和提供能量，在一定程度上也代表了飼糧蛋白質(zhì)水平以及動物對蛋白質(zhì)的消化吸收程度。本試驗研究結(jié)果表明，飼糧中添加蛋氨酸可以顯著提高血清中總蛋白含量，可以提高白蛋白和球蛋白含量。周勤飛等［16］研究表明，母兔飼喂不同水平蛋氨酸飼糧，球蛋白含量呈上升趨勢，白蛋白含量先上升后下降，說明飼糧中適宜的蛋氨酸水平能促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)營養(yǎng)利用，本試驗結(jié)果與其基本一致。血清尿素含量氮是衡量動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡的一個重要指標(biāo)［11］。血清尿素氮含量過高會導(dǎo)致尿氮的增加，從而降低了機(jī)體對氮的利用率。通常較低的血清尿素氮含量表明氨基酸平衡較好，機(jī)體蛋白質(zhì)合成率較高。本試驗結(jié)果血清尿素氮含量各組間雖差異不顯著，但隨著飼糧蛋氨酸水平的提高，有相對降低的趨勢。

4 結(jié) 論

在蛋白質(zhì)水平為29.31%飼糧中添加0.52%蛋氨酸，即飼糧中蛋氨酸總水平為1.03%時，配種前期雌性藍(lán)狐的營養(yǎng)物質(zhì)消化率和血清生化指標(biāo)較為理想，并且滿足配種前期雌性藍(lán)狐的蛋氨酸需要量。

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