梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷成分的定量分析

胡鐵山

（江西省中醫(yī)院藥學(xué)部，南昌330006）

梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷成分的定量分析

胡鐵山

（江西省中醫(yī)院藥學(xué)部，南昌330006）

目的探討梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷成分的定量分析。方法使用H P L C法測定梔子金花丸中的黃芩苷和漢黃芩苷，本組研究的檢測波長為275nm，流動(dòng)相甲醇-0.3%的冰醋酸溶液（比例為43∶57），KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm）。結(jié)果黃芩苷和漢黃芩苷分別在0.1055～2.1100μg、0.0362～0.7240μg范圍內(nèi)時(shí)，其線性關(guān)系較好，平均回收率均在97.50%以上，而RSD在1.95%以下。結(jié)論本組研究使用HPLC法同時(shí)對梔子金花丸中的黃芩苷與漢黃芩苷進(jìn)行定量分析，可將其作梔子金花丸的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

梔子金花丸；黃芩苷；漢黃芩苷；定量分析；中藥化學(xué)

梔子金花丸，是一種復(fù)方中藥制劑，經(jīng)常應(yīng)用于清熱瀉火治療，最開始記載在《宣明論方》中，現(xiàn)在收錄于2010年版的《中國藥典》里［1］。而《中國藥典》中雖然有梔子金花丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，但對于梔子金花丸質(zhì)量的有效控制仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。因?yàn)辄S芩在梔子金花丸處方中的用量相對較大，同時(shí)，黃芩包含漢黃芩苷、黃芩苷等黃酮類成分，其成分比較明確，因此測定黃芩苷、漢黃芩苷成分含量可有效反映并控制梔子金花丸內(nèi)在質(zhì)量［2］。本文采取HPLC法同時(shí)測定其漢黃芩苷與黃芩苷成分含量，為梔子金花丸的質(zhì)控提供有效依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器使用戴安高效液相色譜儀，包括四元低壓梯度泵，二極管陣列檢測器和柱溫箱即Chromeleon色譜工作站；上海必能信超聲有限公司生產(chǎn)的超聲波清洗器，頻率為25kHZ，功率為250W，瑞士的Precisa電子天平。

1.2 試藥由中國藥品生物制品檢定所提供的黃芩苷對照品（批號：110715-200514），由上海由友思生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的漢黃芩苷對照品（純度＞99%，批號：20051214）；由山東孔圣堂制藥有限公司生產(chǎn)的梔子金花丸（規(guī)格：9g/袋，批號：090541，090637，100991）。

2 方法和結(jié)果

2.1 制備對照品溶液精密稱量黃芩苷與漢黃芩苷對照品并適量取出，對照品均已干燥到恒重，分別添加甲醇將其制成0.1055g·L-1，0.0362g·L-1的溶液，同時(shí)取空濾膜以備用。

2.2 制備樣品溶液將本品進(jìn)行研磨，過40目篩，取出大約為0.5g研細(xì)的樣品，經(jīng)過精密稱量后放入具塞的錐形瓶內(nèi)，將100ml的70%乙醇精密加入其中，密塞后稱定其質(zhì)量，再使用超聲給予30min處理，放冷后再行質(zhì)量稱定，使用70%乙醇將減失質(zhì)量補(bǔ)足，搖勻后，使用0.22μm的微孔濾膜過濾，即得濾液，即樣品溶液。

2.3 制備陰性對照品溶液根據(jù)處方比例將黃芩去除，制成為缺失黃芩的陰性對照樣品，在根據(jù)供試品溶液制備方法，分別制備成為黃芩陰性對照品溶液。

2.4 色譜條件流動(dòng)相甲醇-0.3%的冰醋酸溶液（比例為43∶57），KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），柱溫是35℃，測波長為275nm，流速是1.0ml·min-1。在上述的色譜條件下，梔子金花丸中的漢黃芩苷和黃岑苷等對照品可分別同其他組份達(dá)到極限分離，而在對照品的相應(yīng)位置處，陰性樣品沒有吸收峰。

2.5 線性關(guān)系探察對上述的對照品溶液予以精密吸取，跟分級色譜條件取樣1，2，5，10，15，20μL，將進(jìn)樣量（μg）作為橫坐標(biāo)，將峰面積作縱坐標(biāo)，以此繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算回歸方程，其中，漢黃芩苷可列為：Y=5.21×105X-2256.05，r=0.9998，而黃芩苷可列為Y=8.71×105X-537.01，r=0.99995?？梢?，當(dāng)黃芩苷在0.1055～2.1100μg時(shí)，漢黃芩苷在0.0362～0.7240μg范圍內(nèi)時(shí)的線性關(guān)系較好。

2.6 精密度試驗(yàn)精密獲取10μL同樣品溶液，并重復(fù)性進(jìn)樣5次，再行測定分析，結(jié)果顯示漢黃芩苷和黃芩苷的峰面積RSD均不足2.0%。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在0，2，4，8，12，24h時(shí)精密獲取樣品溶液，并在間隔一定時(shí)間后分別取樣10μL，結(jié)果顯示漢黃芩苷與黃芩苷的峰值面積RSD分別是1.01%和0.85%，可見樣品溶液于24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)選取統(tǒng)一生產(chǎn)批號的適量梔子金花丸（生產(chǎn)批號：100991）樣品，研磨精細(xì)后，根據(jù)上述方法將其制備成為樣品溶液，再給予測定，計(jì)算其漢黃芩苷、黃芩苷的含量，經(jīng)六次測定后，結(jié)果顯示RSD都在2.00%以下。

2.9 加樣回收實(shí)驗(yàn)將含量已知的、為同一生產(chǎn)批號的梔子金花丸予以研磨精細(xì)，并精密稱量后，獲取10份，加入適量的黃芩苷和漢黃芩苷的對照品，依法進(jìn)行5次測定后結(jié)果顯示三份對照品平均的回收率分別是為98.85%和97.55%，其測定峰值RSD分別是41.64%和1.96%。

2.10 梔子金花丸樣品含量測定將生產(chǎn)批號不同的梔子金花丸依法制備成為樣品溶液，精密獲取樣品溶液、對照品溶液各10μL，根據(jù)以上色譜條件進(jìn)行峰面積測定，同時(shí)采取外標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算，結(jié)果如表1所示。

表1 梔子金花丸中漢黃芩苷、黃芩苷成分含量的測定（n=2，m g·g-1）

3 討論

梔子金花丸主要由黃芩、梔子、金銀花、大黃、黃柏和黃連等中藥材制成，可廣泛應(yīng)用于扁桃體炎、牙周炎、呼吸道感染、口腔潰瘍、熱型便秘、牙齦炎、習(xí)慣性便秘等治療中，具有解毒通便、清熱下火的功效，其臨床療效較為顯著［3］。經(jīng)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，梔子金花丸具有抗病毒、抗菌、增強(qiáng)免疫力和解熱等作用［4］。黃芩重要成分是黃酮類化合物，具有消炎和抗菌等藥理作用，同梔子金花丸整體功效均有密切關(guān)系［5］。然而，《中國藥典》中并未收錄黃芩定量標(biāo)準(zhǔn)，因此在本組研究中，采取HPLC法測定梔子金花丸中關(guān)于漢黃芩苷和黃芩苷質(zhì)量控制方法，結(jié)果顯示，三種不同生產(chǎn)批號的梔子金花丸中漢黃芩苷及黃芩苷平均含量均為2.07mg·g-1和6.28mg·g-1，且漢黃芩苷與黃芩苷總量高達(dá)8.35mg·g-1。

本組研究采用HPLC法對梔子金花丸中漢黃芩苷、黃芩苷的成分進(jìn)行了有效測定，對于控制梔子金花丸的產(chǎn)品質(zhì)量、探索中藥復(fù)方科學(xué)性、整體性質(zhì)量評估手段有重要借鑒意義。

［1］趙倩，馮偉紅，張啟偉，等．“一測多評”法用于梔子金花丸多成分含量測定的可行性研究［J］．中國中藥雜志，2014，39（10）：1826-1833．

［2］陳曉虎，蘇晶，王慧，等．UPLC法同時(shí)測定梔子金花丸中11種成分［J］．中草藥，2014，45（7）：955-959．

［3］李春紅，何兵，張金平，等．HPLC法同時(shí)測定梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素［J］．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（17）：4509-4510．

［4］李婷婷，霍慧靈，張蕾．漢黃芩苷、漢黃芩素和千層紙素A油水分配系數(shù)測定［J］．中成藥，2013，35（11）：2545-2548．

［5］馮志強(qiáng)，韓堅(jiān)，謝智勇，等．黃芩提取物中黃酮類成分血漿蛋白結(jié)合率的測定［J］．中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（2）：286-289．

HU Tieshan
（Department of Pharmacy， Jiangxi Province hospital of Traditional Chinese medicine， Nanchang330006， China）

Objective To explore quantitative analysis of the baicalin and wogonoside ingredients in Gardenia golden flower pill.Methods Using HPLC method for determination of baicalin and wogonoside ingredients in gardenia golden flower pill.The research wavelength was275nm，mobile phase of methanol-0.3% glacial acetic acid solution（ratio of43∶57），and Kromasil C18column（4.6mm×250mm，5μm）.Results the baicalin and wogonoside ingredients in 0.1055～2.1100μg and 0.0362～0.7240μg range，respectively，had better linear relation，the average recovery was over97.50%，and RSD under1.95%.Conclusion This study used HPLC method for determination，and made a quantitative analysis of baicalin and wogonoside ingredients.It can be used for the quality control standard of golden flower gardenia pill.

gardenia golden flower pill；baicalin；wogonoside；quantitative analysis；chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.17.075

1672-2779（2015）-17-0144-02

：張文娟本文校對：張文然

2015-06-26）