柿炭疽病化學(xué)防治藥劑的初步篩選

丁向陽(yáng)，徐建強(qiáng)，鄧全恩，郗 慧，楊睿瑞

（1.河南省林業(yè)科學(xué)研究院，河南 鄭州 450008；2.河南科技大學(xué)，河南 洛陽(yáng) 471003；3. 中南林業(yè)科技大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410004）

柿炭疽病化學(xué)防治藥劑的初步篩選

丁向陽(yáng)1，徐建強(qiáng)2，鄧全恩3，郗 慧2，楊睿瑞2

（1.河南省林業(yè)科學(xué)研究院，河南 鄭州 450008；2.河南科技大學(xué)，河南 洛陽(yáng) 471003；3. 中南林業(yè)科技大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410004）

柿炭疽病是柿生產(chǎn)中危害最大的一種病害，在全國(guó)柿產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生。為了篩選生產(chǎn)中能應(yīng)用于柿炭疽病化學(xué)防治的殺菌劑，從柿炭疽病標(biāo)本中分離到27株柿炭疽病菌，從中選取4株進(jìn)行柿炭疽病化學(xué)防治殺菌劑的篩選試驗(yàn)。室內(nèi)采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定柿炭疽病菌對(duì)7種殺菌劑的敏感性。結(jié)果表明：噻菌靈和多菌靈對(duì)柿炭疽病菌抑制效果較好，MIC均為1 μg/mL；戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑次之，MIC為10 μg/mL；速克靈和嘧霉胺較差，在10 μg/mL時(shí)抑制率還不到50%；撲海因在5 μg/mL時(shí)表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抑制作用，但在10 μg/mL時(shí)抑制率降低，需通過進(jìn)一步的毒力測(cè)定及田間試驗(yàn)確認(rèn)殺菌劑對(duì)柿炭疽病的防治效果。

柿；炭疽??；防治藥劑；篩選

柿是我國(guó)重要的木本糧食樹種，在我國(guó)面積和產(chǎn)量均較大，發(fā)展柿產(chǎn)業(yè)符合國(guó)家發(fā)展木本糧油的政策導(dǎo)向[1]。但柿樹病害的發(fā)生也較為普遍并有加重的趨勢(shì)，研究和綜合防治柿病害就顯得尤為重要了。柿炭疽病由哈銳炭疽菌Colleotrichum.horii引起的[2]，是危害柿樹生長(zhǎng)的最主要的病害之一，在全世界產(chǎn)柿國(guó)家均有發(fā)生[3]。柿炭疽病主要發(fā)生在柿樹葉片、枝條、柿果和柿蒂上，不同品種及同一品種的不同部位對(duì)該病的敏感性不同[4-5]，葉片侵染癥狀主要表現(xiàn)為葉柄及葉脈部位，其正面及背面均變黑，形成黑色壞死斑，這是柿炭疽病區(qū)別于其它柿樹葉部病害的顯著標(biāo)志；枝條上病原菌主要侵染柿樹的幼梢，在生長(zhǎng)條件適宜的情況下病斑互相融合，環(huán)繞幼枝1圈或連成一片，從而引起葉片脫落，導(dǎo)致枝條死亡[6]；在柿蒂上癥狀表現(xiàn)為柿蒂黑色壞死。柿炭疽病還能侵染柿果，果實(shí)感病后病斑由小變大，果實(shí)變紅變軟，提前脫落[7]。在柿樹枝條、柿蒂及柿果上發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，會(huì)有黃色的分生孢子堆溢出，形成孢子角。

炭疽病對(duì)柿樹的危害嚴(yán)重，且生產(chǎn)中使用的防治藥劑種類繁雜、效果不一，因此對(duì)柿炭疽病菌的藥劑抑制效果篩選顯得格外重要[8-9]。本文中從國(guó)內(nèi)多省份廣泛采集柿樹炭疽病的典型標(biāo)本，選擇典型菌株測(cè)定對(duì)7種殺菌劑的敏感性，以期為生產(chǎn)中柿炭疽病的化學(xué)防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試菌株

從樣本中選取4個(gè)具有代表性的菌株：SDQZ-1、GXGCLMLL-1、HNLC-1及2SXFPTP-2，各菌株的采集地點(diǎn)及分離部位見表1。

1.1.2 試驗(yàn)藥劑

試驗(yàn)中選定的殺菌劑包括苯并咪唑類殺菌劑噻菌靈（特可多）、多菌靈，三唑類殺菌劑戊唑醇（立克銹）、苯醚甲環(huán)唑（世高、惡醚唑），二甲酰亞胺類殺菌劑速克靈（腐霉利）、撲海因（異菌脲），苯胺基嘧啶類殺菌劑嘧霉胺（施佳樂）。上述藥劑均為原藥，用甲醇或丙酮配置成104μg/mL的母液備用。

1.2 方 法

1.2.1 柿炭疽病菌的分離

選取具有典型病斑的柿樹葉片，用自來水沖洗干凈后用吸水紙吸干；將發(fā)病部位的葉脈、枝條或柿蒂剪成3mm左右的小段，放入70%酒精30 s左右；然后放入NaClO溶液中1 min左右，用無(wú)菌水沖洗3次，用滅過菌的濾紙吸干，用消毒鑷子將葉脈、枝條或柿蒂小段放入含乳酸的PSA培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5 d后，觀察菌落生長(zhǎng)情況，選取類似炭疽病的菌落鏡檢，將發(fā)現(xiàn)炭疽病菌分生孢子的菌落進(jìn)行保存，每皿保存1個(gè)菌落，為1個(gè)菌株。

1.2.2 柿炭疽病菌防治藥劑的篩選

將供試菌株分別接種在不含藥的PSA平板和含1、5、10 μg/mL殺菌劑的PSA平板上，每皿2個(gè)菌株，每處理2次重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)4 d后，測(cè)量各處理的菌落直徑，求平均值后，計(jì)算抑制率，得出藥劑對(duì)炭疽病菌的最低抑制濃度（Minimum inhibitory concentration，MIC）。

抑制率＝(對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑－菌餅直徑)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 柿樹炭疽病菌的菌株分離

于2013年從各地采回的柿炭疽病標(biāo)本中采用組織分離法分離得到27株柿炭疽病菌，菌株編號(hào)、采集地點(diǎn)及分離部位信息如表1所示。

表1 2013年度分離保存的柿炭疽病菌菌株Table 1 Separated and preserved strains of anthracnose pathogens of persimmon in 2013

2.2 柿樹炭疽病菌防治藥劑的初步篩選

通過室內(nèi)試驗(yàn)，7種殺菌劑對(duì)柿炭疽病菌的抑制結(jié)果如表2所示。

由表2可以看出，噻菌靈和多菌靈對(duì)炭疽病菌抑制作用較好，MIC均為1 μg/mL，而戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑?qū)μ烤也【种菩Ч沃?，MIC為10 μg/mL；速克靈和嘧霉胺對(duì)炭疽病菌幾乎無(wú)抑制作用，在10 μg/mL時(shí)抑制率還不到50%；撲海因在5 μg/mL時(shí)表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抑制作用，但在10 μg/mL時(shí)抑制作用又降低，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因有待進(jìn)一步研究。

表2 柿樹炭疽病菌對(duì)7種殺菌劑的敏感性Table 2 Sensitivities of anthracnose pathogens of persimmon to seven kinds of fungicides

柿樹炭疽菌對(duì)7種殺菌劑的敏感性如圖1所示。

綜上所述，苯并咪唑類殺菌劑可以作為生產(chǎn)中防治炭疽病的備選藥劑，其它幾類殺菌劑對(duì)炭疽病菌有無(wú)其它作用方式需進(jìn)一步研究。

3 討論與小結(jié)

（1）柿炭疽病是目前為害最嚴(yán)重的柿病害之一，雖然通過搞好果園衛(wèi)生、加強(qiáng)栽培管理、苗木檢疫等方法可在一定程度上控制炭疽病的危害，但該病在我國(guó)主產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)中仍大量爆發(fā)，炭疽病又是多循環(huán)病害，因此化學(xué)藥劑在炭疽病的防治中具有非常重要的作用[7]。

圖1 柿樹炭疽菌對(duì)7種殺菌劑的敏感性Fig. 1 Sensitivities of anthracnose pathogens of persimmon to seven kinds of fungicides

（2）在本研究中，除了選取染病柿樹葉脈作為分離材料外，還嘗試了從其它組織分離的方法，如直接挑取黃色的分生孢子角，放入加過乳酸的PSA上，也分離到了菌株，而且該方法操作簡(jiǎn)便，步驟簡(jiǎn)單，操作迅速，需時(shí)很短。但此法要求必須具有典型分生孢子角的材料。從柿樹枝條及柿蒂上分離炭疽病菌時(shí)，由于柿樹枝條及柿蒂較硬，分離成功率低，故不建議采用此法。但由于柿樹枝條及柿蒂同柿樹葉片相比，保存時(shí)間長(zhǎng)，故在分離標(biāo)本較多時(shí)可先分離葉脈上的，后分離枝條及柿蒂上的。

染病柿樹葉脈仍是分離炭疽病菌的最佳材料，但標(biāo)本保存時(shí)間不宜過長(zhǎng)，應(yīng)盡快分離；對(duì)于染病柿蒂或枝干標(biāo)本，若不能及時(shí)分離，可先在室內(nèi)晾干，然后保存于陰涼處防止受潮，可保存一定時(shí)間后再行分離。

（3）本試驗(yàn)中結(jié)果表明，噻菌靈和多菌靈對(duì)炭疽病菌抑制率較好，MIC均為1 μg/mL，可以作為生產(chǎn)中防治炭疽病的主要備選藥劑。

[1]譚曉風(fēng),馬履一,李芳東,等.我國(guó)木本糧油產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略研究[J].經(jīng)濟(jì)林研究,2012,30(1)：1－5.

[2]余賢美,侯長(zhǎng)明,王 潔,等.次郞甜柿炭疽病菌的分離鑒定及其rDNA-ITS序列分析[J].經(jīng)濟(jì)林研究,2014,32(1)：45－50.

[3]李明江.膠孢炭疽菌侵染柿樹的細(xì)胞學(xué)研究及CGTA1的基因克隆[D].杭州：浙江大學(xué),2007.

[4]張敬澤,徐 同.柿樹炭疽菌侵染不同柿樹種、品種和部位的細(xì)胞學(xué)特征[J].菌物學(xué)報(bào),2005,24(1)：116－122.

[5]Geffroy V, Sévignac. Inheritance of partial resistance against Colletotrichum lindemuthianum in Phaseolus vulgaris and colocalization of quantitative trait loci with genes involved in speci fi c resistance[J]. Mol Plant Microbe Interact, 2000, 13(3)：287－296.

[6]張敬澤,徐 同.柿樹炭疽病菌在越冬枝條上的菌態(tài)及數(shù)量[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào),2003,30(4)：438－439.

[7]屈偉良.柿炭疽病發(fā)生規(guī)律及綜合防治技術(shù)研究[J].陜西林業(yè)科技 ,2009,67(4)：63－ 64.

[8]李石磊,劉君昂,趙 瑩,等.6種殺菌劑對(duì)油茶主要病害的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2013,33(9)：60－62.

[9]宋光桃,周國(guó)英.油茶炭疽病拮抗放線菌的篩選及其抑菌譜研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2010,30(2)：75－78.

Preliminary selection of fungicides to anthracnose pathogens in persimmon

DING Xiang-yang1, XU Jian-qiang2, DENG Quan-en3, CHI Hui2, YANG Rui-rui2
(1.Henan Academy of Forestry, Zhengzhou 450008, Henan, China; 2. Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003, Henan, China; 3. Central South University of Forestry & Technology, Changsha 410004, Hunan, China)

Anthracnose is one of the most harmful diseases on persimmon, which almost happens all over the areas producing persimmon in China. To select fungicides that could be applied in chemical controlling of the disease in production, 27 strains of persimmon anthracnose were separated from anthracnose pathogen samples, and four strains of pathogens of persimmon anthracnose were selected as materials of the fungicides selection experiment to anthracnose pathogens in persimmon. The sensitivities of persimmon anthracnose pathogens to seven fungicides were determined by using the method of mycelium growth rate. The results showed that： Probenazole and Carbendazim had better effects on inhibiting anthracnose pathogens of persimmon, and MIC was 1 μg/mL; Tebuconazole and Difenoconazole following, and MIC was 10 μg/mL; The effect of Procymidone and Pyrimethanil are worse, and inhibition rate was less than 50% when MIC was 10 μg/mL; When MIC was 5 μg/mL, Iprodione showed a strong inhibition effect, while the inhibition rate was decreased when MIC was 10 μg/mL. To con firm the effect of fungicides, further Virulence test and field trials were needed.

persimmon; anthracnose; fungicides; selection

S665.2

A

1003—8981(2015)04—0148—04

10.14067/j.cnki.1003-8981.2015.04.029

2014-12-10

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201203047）。

丁向陽(yáng)，研究員，博士。E-mail：dxydd001@163.com

丁向陽(yáng),徐建強(qiáng),鄧全恩,等.柿炭疽病化學(xué)防治藥劑的初步篩選[J].經(jīng)濟(jì)林研究,2015,33(4)：148－151, 156.

[本文編校：聞 麗]